Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота (некробактериоз, копытная гниль) - Автореферат
Изучение видового спектра микроорганизмов при болезнях конечностей крупного рогатого скота и овец. Ознакомление с результатами испытаний эффективности ассоциированных вакцин в лабораторных и производственных условиях. Рассмотрение методов их контроля.
При низкой оригинальности работы "Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота (некробактериоз, копытная гниль)", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Эпизоотологические данные последних лет подтверждают тот факт, что инфекционные болезни конечностей крупного рогатого скота (КРС) и овец занимают одно из ведущих мест в инфекционной патологии этих видов животных в Российской Федерации (РФ), где наибольшее значение имеют некробактериоз и копытная гниль (Архангельский И.И. и др., 1986; Лайшев А.Х. и др., 1966; Walker P.D. et al., 1981). Многочисленные исследования по изучению этиологии некробактериоза КРС, некробактериоза и копытной гнили овец подтверждают большую роль сопутствующей микрофлоры, которая существенно осложняет течение болезни, что подтверждается данными отечественных и зарубежных исследователей (Самоловов А.А., 1988; Сидорчук А.А. и др., 2004; Banting В связи с вышеизложенным, конструирование вакцин против инфекционных болезней конечностей КРС (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль) на основе ассоциации анаэробных микроорганизмов (Fusebacterium necrophorum и Dichelobacter nodosus) и гнойно-раневой микрофлоры позволит более надежно профилактировать указанные болезни. Изучить особенности эпизоотологии некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец в различных зонах Российской Федерации и Республики Киргизия; Впервые в Российской Федерации разработаны и испытаны с положительными результатами две инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза конечностей КРС (запатентованные названия “Нековак”, “Нековак-стимул”, патент N 2098127 от 10.12.1997г.) и инактивированная ассоциированная вакцина против инфекционных заболеваний конечностей овец (запатентованное название “Овикон”, патент N 2098128 от 10.12.1997г.).На основании результатов проведенных исследований, была описана клиническая картина болезней конечностей, условия распространения, пути передачи инфекций и влияние предрасполагающих факторов, а также установлены некоторые общие закономерности проявления инфекционных болезней конечностей у КРС и овец в различных природно-климатических зонах. При попадании в животноводческие хозяйства, ранее благополучные по некробактериозу и копытной гнили, хозяйства становились стационарно-неблагополучными по этим инфекциям, так как основные возбудители инфекций могут годами сохраняться в структурах копытного рога и обеспечивать случаи рецидивов болезни. При изучении инфекционных болезней конечностей овец в хозяйствах Центральной России у животных отмечалось поражение одной или значительно реже двух конечностей, чаще передних. Конечности животных с такими поражениями были отечными, местная температура повышена, животные на такие конечности не опирались, держали их на весу. У животных отмечали поражение одной, реже двух или трех конечностей, как и в хозяйствах Центральной России и Ставрополья, так и в хозяйствах Киргизии у овец чаще поражались передние конечности, а у баранов-производителей - задние.Инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота широко распространены в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и Республике Киргизия. Заболеваемость конечностей КРС некробактериозом варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 11,6 до 83,0%, в хозяйствах Ставропольского края от 1 до 17,6%, в хозяйствах Республики Киргизия от 6,5 до 20,3% поголовья животных хозяйства. Заболеваемость конечностей овец копытной гнилью и некробактериозом так же варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 3,5 до 52%, в хозяйствах Ставропольского края от 3,6 до 38,1%, в хозяйствах Республики Киргизия от 8,0 до 86,0% поголовья животных . Клиническое проявление инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота зависит от условий содержания и кормления, а также от факторов внешней среды и состава складывающейся патогенетической ассоциации. В этиологии и патогенезе инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль) помимо основных возбудителей этих болезней F. necrophorum и D. nodosus важную роль играют представители сапрофитной, условно-патогенной и патогенной микрофлоры, формирующие экопаразитарные патогенетические ассоциации синергетического типа.
Вывод
2.1 Эпизоотология и клиническое проявление некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец в различных природно-климатических зонах
На основании результатов проведенных исследований, была описана клиническая картина болезней конечностей, условия распространения, пути передачи инфекций и влияние предрасполагающих факторов, а также установлены некоторые общие закономерности проявления инфекционных болезней конечностей у КРС и овец в различных природно-климатических зонах. Так, значительному распространению этих эпизоотий способствовала продажа племенных животных, среди которых имелись хронически больные животные, которые становились источником распространения инфекции. Хотя возбудитель некробактериоза анаэробный неспорообразующий микроорганизм Fusobacterium necrophorum является убиквитарным, случаев спонтанного возникновения некробактериоза в хозяйствах нами не отмечалось. При попадании в животноводческие хозяйства, ранее благополучные по некробактериозу и копытной гнили, хозяйства становились стационарно-неблагополучными по этим инфекциям, так как основные возбудители инфекций могут годами сохраняться в структурах копытного рога и обеспечивать случаи рецидивов болезни.
Инфекционным болезням конечностей были подвержены все половозрастные группы животных, однако наиболее тяжело болели быки и бараны-производители, овцематки старше трех лет, высокоудойные коровы и коровы после отела, что, вероятнее всего, связано с нарушением обменных процессов у животных, приводящим к структурным нарушениям копытного рога. Это делало животных более чувствительными к воздействию предрасполагающих факторов и приводило к травматизму копыт. Молодые животные до 3-4, реже 6-месячного возраста, мало восприимчивы к инфекционным болезням конечностей, что во многом определяется состоянием их копыт.
Заболеваемость КРС некробактериозом во всех хозяйствах колебалась в широких пределах. Наибольшей она была в хозяйствах Центральной России от 11,6 до 83,0%. Наименьшей в хозяйствах Ставропольского края от 1,0 до 17,6%. В хозяйствах Республики Киргизия заболеваемость некробактериозом КРС составила 6,5-20,3%.
У овец заболеваемость конечностей некробактериозом и копытной гнилью также варьировала в широких пределах. Наибольшей она была в хозяйствах Республики Киргизия от 8,0 до 86,0%, несколько меньшей в хозяйствах Центральной России от 30,0 - 52,0% и Ставрополья - от 3,6 до 38,1%.
Во всех природно-климатических зонах инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота имели два сезонных пика распространения: зимне-весенний и летне-осенний, что связано с действием предрасполагающих факторов внешней среды.
Клиническое проявление инфекционных болезней конечностей у КРС и овец также зависело от условий содержания, кормления и факторов внешней среды и от состава складывающейся патогенетической ассоциации, вызывающей болезни конечностей.
Так, заболевание КРС некробактериозом в хозяйствах Центральной России имело подострое и хроническое течение. Поражения локализовались, в основном, в области межкопытной щели, при этом отмечали покраснение и отек кожи и окружающих тканей. На месте поражения отмечали наличие эрозий и язв с неровными краями в виде валика, покрытых экссудатом. Отмечали повышение местной температуры и болезненность конечностей. Животные были угнетены, опирались на зацеп больной конечности или держали ее на весу. В отдельных случаях отмечали наличие абсцессов в области венчика, некроз связок и сухожилий, наличие свищей. Все это вызывало синдром хромоты. Реже наблюдали генерализованные формы некробактериоза с поражением связок, костей и наличием абсцессов в области суставов, а также некротических поражений и абсцессов во внутренних органах. У некоторых коров в колхозе «им. Ленина» Ухоловского района Рязанской области регистрировали некротические поражения на вымени и коже нижней части тела. Такие животные не подлежали лечению и выбраковывались.
В условиях Ставропольского края заболевание КРС некробактериозом характеризовалось, в основном, поражением конечностей, при этом отмечали наличие язв в области пяточных частей межкопытной щели, реже абсцессы и свищи в области венчика. В отдельных случаях отмечали воспаление запястного и заплюсневого суставов, гнойные тендовагиниты и бурситы. Пораженные конечности были сильно отечными и болезненными. В покое больную конечность животные держали слегка приподнятой. При движении больных животных проявлялась прогрессирующая хромота.
Изучение клинического проявления некробактериоза КРС в хозяйствах Республики Киргизия позволило установить тот факт, что первичные поражения локализовались преимущественно на коже и подкожной клетчатке межкопытной щели, а также в области венчика и сгибательной поверхности пута в виде влажной эрозии с небольшим отеком и экссудатом с неприятным запахом. В начальной стадии болезни наблюдали эрозии кожи с ворсистой поверхностью в области межкопытной щели, а также гиперплазию тканей в виде валика, копытный рог был разросшимся, изъязвленным, рыхлым.
В некоторых случаях отмечали более глубокие поражения в области мягких тканей конечностей с наличием свищей и затоков под копытным рогом, а также абсцессов в области венчика копыта. В этот период животные были угнетены, у них повышалась температура тела до 400С и выше, терялся аппетит, резко снижались удои. Пораженные конечности были отечными, местная температура повышена, в области поражения наблюдалась сильная болезненность, развивался синдром хромоты.
Наблюдали также поражения суставов, гнойные тендовагиниты и бурситы, отслоение копытного рога, то есть подтверждается мнение многих исследователей, что заболевание некробактериозом КРС по клиническим признакам имеет насколько форм (стадий, степеней) проявления.
В хозяйствах Республики Киргизия отмечали также отдельные случаи некротических поражений (дифтеритических воспалений) слизистых оболочек ротовой полости телят. Заболевание, как правило, было связано с травматизмом слизистых оболочек ротовой полости грубыми кормами, протекало остро и характеризовалось повышением температуры тела до 400С, и выше, общим угнетением животных и отказом от приема корма, зловонным слюнотечением. В ротовой полости на слизистой оболочке, а также на языке и деснах, отмечались серо-белые и с желтым оттенком дифтеретические пленки, после снятия которых наблюдались кровоточащие изъязвления. У павших телят отмечали также некротические поражения внутренних органов.
При изучении инфекционных болезней конечностей овец в хозяйствах Центральной России у животных отмечалось поражение одной или значительно реже двух конечностей, чаще передних. У ягнят возрастом до 6 месяцев практически не наблюдалось клинических проявлений копытной гнили. Более выраженное, по сравнению с овцематками, проявление инфекции (чаще с поражением задних конечностей) отмечено у баранов-производителей. Заболевание имело ярко выраженный сезонный характер. Клиническая картина болезней конечностей у овец характеризовалась гнойным воспалением кожи свода межкопытной щели. Отмечали ее облысение, покраснение, наличие эрозий, покрытых серовато-белым ихорозным экссудатом. В отдельных (единичных) случаях отмечали поражение основы кожи пяточных частей внутренних стенок копытец и основы кожи подошвы с отслоением рогового башмака. Все это вызывало синдром хромоты.
В ГПЗ «Котовский» и совхозе «Мир» отмечали единичные случаи абсцессов в области венчика копыта и воспаление копытцевых и венечных суставов, чаще у баранов, то есть несколько клинических форм болезни.
В условиях Ставропольского края по нашим данным, чаще болеют овцы, чем бараны, однако, у баранов-производителей заболевание протекает более тяжело. Среди ягнят до 3-4 месячного возраста даже при совместном содержании с больными овцематками копытную гниль регистрировали в единичных случаях. По нашему мнению, этот факт связан с эластичностью копытного рога ягнят, отсутствием трещин и заломов копыт и отсюда меньшей подверженностью влияния предрасполагающих факторов внешней среды.
В двух маточных отарах ОПХ ВНИИОК «Темнолесский» и одной отаре колхоза «им. Войтика», отмечено очень тяжелое клиническое проявление болезней конечностей овец (злокачественная форма), которое характеризовалось поражениями не только в области копытец с отслоением рогового башмака, но и наличием язв и свищей в области венчика, путового сустава, наличием гнойных тендовагинитов и бурситов. Конечности животных с такими поражениями были отечными, местная температура повышена, животные на такие конечности не опирались, держали их на весу. В этих отарах у новорожденных и ягнят до 3-месячного возраста были отмечены случаи некротических поражений слизистой оболочки ротовой полости. Очевидно, в указанных хозяйствах имело место инфекционное заболевание конечностей овец, вызыванное ассоциацией микроорганизмов, что впоследствии подтвердилось микробиологическими исследованиями патматериала и постановкой биопробы на лабораторных животных.
В Республике Киргизия среди ягнят до 3-месячного возраста заболеваний конечностей не наблюдалось даже в период массовой заболеваемости маток, несмотря на круглосуточное совместное содержание ягнят с больными матерями. Минимальная заболеваемость конечностей наблюдалась у ярок и валухов старше десятимесячного возраста, что вероятнее всего связано с условиями содержания и кормления. У животных отмечали поражение одной, реже двух или трех конечностей, как и в хозяйствах Центральной России и Ставрополья, так и в хозяйствах Киргизии у овец чаще поражались передние конечности, а у баранов-производителей - задние. Инфекционные болезни конечностей имели хроническое течение, однако начало заболевания всегда было острым, а затем процесс принимал хронический характер.
У заболевших животных в Республике Киргизия отмечено несколько клинических форм проявления болезней конечностей. В начальной стадии животные беспокоились, поднимали и облизывали больные ноги, при движении животных отмечалась слабо выраженная хромота. При осмотре больных конечностей в области межкопытной щели наблюдали гиперемию кожи свода межкопытной щели, отечность и выпадение волос, повышение местной температуры. Это легкая форма проявления заболеваний конечностей.
При средней степени поражения конечностей животные были угнетены, выявлялась сильно выраженная хромота при движении, в покое овцы держали пораженные конечности на весу, ползали при поражении обеих передних ног на карпальных суставах или лежали. Больные конечности были отечны и болезненны, повышена местная температура. При осмотре в области пораженных конечностей отмечалась резко выраженная гиперемия, наличие эрозий, покрытых серовато-белым гнойным налетом со специфическим, неприятным запахом. При наблюдении за больными животными в некоторых случаях отмечался некроз внутренних стенок рогового башмака и подошвы. Отмечалось также неправильное разрастание и деформация копытного рога. При тяжелой степени поражения конечностей животные были сильно угнетены, чаще лежали, отмечали повышение общей температуры тела. При осмотре больных конечностей наблюдали сильную отечность, гиперемию, наличие эрозий и язв с гиперплазией тканей в виде валика, покрытым сероватым ихорозным экссудатом. Отмечали наличие свищей и язв в области венчика, в особо тяжелых случаях - поражение карпальных и скакательных суставов. При этом роговые ткани внутренних стенок копыта и подошвы были некротизированы и расплавлены, вызывали отслоение рогового башмака. Такую степень инфекционных поражений конечностей овец наблюдали более чем у 50% заболевших животных в маточных отарах в сезон массового распространения болезней конечностей при наличии предрасполагающих факторов внешней среды после выпаса этих отар на пастбищах, где ранее выпасали стада крупного рогатого скота, неблагополучные по некробактериозу.
В перечисленных хозяйствах Чуйской долины Республики Киргизия среди ягнят весной (март-май) и осенью (сентябрь-октябрь) наблюдали две вспышки некробактериоза лицевой части головы, слизистых оболочек губ и ротовой полости. Первая (весенняя) вспышка наблюдалась в период окота среди новорожденных ягнят, вторая (осенняя) - после отбивки ягнят при формировании новых отар из приплода текущего года. Заболевание ягнят было связано с травматизмом слизистых оболочек и кожных покровов лицевой части головы. Клинически заболевание проявлялось появлением на пораженных участках слизистой губ и рта везикул, наполненных жидкостью, которая выливалась, а затем подсыхала. Вокруг рта образовывалась серая корка, лицевая часть головы и губы сильно отекали, были очень болезненны, при отпадении корок обнажалась изъязвленная кровоточащая поверхность. При поражении слизистых оболочек рта, десен, языка отмечалось наличие серо-желтых бляшек, изо рта выделялась пенистая тягучая слюна с гнилостным запахом и крошковатыми массами, из носовых отверстий также выделялся зловонный секрет, содержащий грязно-желтые крошковатые массы. Животные были сильно угнетены, отставали от отары или лежали, у них повышалась температура тела и при отсутствии лечения наступала гибель. У павших ягнят при вскрытии отмечали некротические поражения гортани, трахеи, а также некротические поражения и абсцессы в легких и печени. Весьма примечательным обстоятельством в указанные сезоны года было одновременное появление вспышек у ягнят вирусной эктимы и некробактериоза, что подтверждалось исследованиями Республиканской ветлаборатории. Очевидно, что вирус эктимы «открывал ворота» размножения возбудителя некробактериоза и других секундарных инфекций.
Проведенные клинико-эпизоотологические исследования позволили подтвердить общие закономерности развития эпизоотического процесса инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота и отметить некоторые особенности его зонального проявления.
2.2 Выделение, изучение биологических свойств и идентификация микрофлоры из пораженных конечностей при некробактериозе крупного рогатого скота, некробактериозе и копытной гнили овец
На втором этапе исследований был проанализирован видовой спектр микроорганизмов, участвующих в развитии патологического процесса инфекционных болезней конечностей КРС и овец. Патологический материал для исследований был получен из хозяйств Московской, Рязанской, Тверской, Тульской, Костромской и других областей Российской Федерации, Ставропольского края и Республики Киргизия.
Обобщенные результаты исследований всех проб патологического материала иллюстрируют табл. 1 и 2, где суммарно, по частоте их выделяемости, показаны все представители патогенной, условно-патогенной и сапрофитной микрофлоры, которые удалось идентифицировать в патологическом материале в процентном соотношении к общему числу исследованных проб.
Сравнительный анализ полученных результатов позволяет констатировать тот факт, что в указанных регионах из пораженных конечностей овец постоянно выделяли несколько групп микроорганизмов. В (69-82% случаев) изолировали споровый почвенный микроорганизм C. perfringens тип А (присутствующий в инфицированных ранах, один из основных возбудителей газовой гангрены человека и энтеротоксемии животных) и возбудитель копытной гнили овец D. nodosus (72-79%) случаев. В связи с трудностью его выделения в большинстве случаев для диагностики заболевания и идентификации D. nodosus использовали феномен «Бевериджа». В эту группу также включили возбудитель некробактериоза F. necrophorum (9-39% случаев).
Вторую большую группу микроорганизмов, постоянно выделяемых при инфекционных болезнях конечностей, составили пиогенные кокки: Streptococcus pyogenes (31-43%случаев), Staphylococcus aureus (26-42% случаев), Actinomyces pyogenes (9-12% случаев), а также представители родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Enterococcus.
В третью группу микроорганизмов, постоянно изолируемых из пораженных копыт, вошли условно-патогенные и сапрофитные бактерии, такие как Escherichia coli (28-38% случаев), Proteus vulgaris (20-33% случаев), Prevotella melaninogenicus (1-6% случаев) и микроорганизм Bacteroides fragillis, часто присутствующий в гнойных ранах человека и животных.
Остальные микроорганизмы, за исключением Clostridium septicum, выделялись непостоянно, при этом был отмечен тот факт, что из пораженных конечностей овец в Ставропольском крае и Республике Киргизия чаще выделяли споровые микроорганизмы, чем из патматериала от овец Центральной России. Поэтому постоянно выделяемый в небольших количествах Clostridium septicum, почвенный споровый микроорганизм, один из возбудителей газовой гангрены, брадзота и злокачественного отека (4 - 12 % случаев), а также спорадически выделяемые споровые микроорганизмы Clostridium perfringens типов С и D, Clostridium oedematiens и Bacillus cereus были условно отнесены в четвертую группу.
Подобный, во многом сопоставимый с результатами исследований патматериала от овец, видовой спектр микроорганизмов наблюдался и при некробактериозе КРС. Обобщенные результаты исследований пораженных конечностей КРС из тех же трех выше перечисленных регионов представлены в таблице 2.
Из данных таблицы 2, следует, что весь спектр микроорганизмов, выделенных из патматериала и идентифицированных при некробактериозе конечностей КРС, можно условно разделить на несколько групп.
В первую группу вошли наиболее часто выделяемые микроорганизмы Clostridium perfringens т. А (68-75% случаев) и возбудитель некробактериоза КРС Fusobacterium necrophorum (63-71 % случаев).
Во вторую группу, как и при болезнях конечностей овец, вошли наиболее часто выделяемые пиогенные микроорганизмы Streptococcus pyogenes (24-42%случаев), Staphylococcus aureus (18-28% случаев), Actinomyces pyogenes (9-15% случаев), Pseudomonas aeruginosa (3-9% случаев).
Представителями третьей группы так же, как и при инфекционных заболеваниях конечностей овец, являлись условно-патогенные и сапрофитные микроорганизмы Escherichia coli (36-43% случаев), Proteus vulgaris (16-24% случаев). К этой группе могли быть отнесены непостоянно выделяемые представители родов Propionibacterium, Prevotella, Eubacterium, Flavobacterium, а также Bacteroides fragillis.
Четвертую группу составили споровые микроорганизмы: постоянно выделявшиеся в малых количествах Clostridium septicum (6 - 10 % случаев), непостоянно выделявшиеся Clostridium oedematiens, Bacillus cereus, Bacillus subtilis. При этом споровые микроорганизмы из патматериала от КРС и овец, чаще выделяли в Ставропольском крае и в Республике Киргизия. Проведенные исследования позволили констатировать факт наличия широкого спектра видов микроорганизмов, участвующих в патогенезе инфекционных болезней конечностей овец и КРС, что подтверждает данные многих ученых (Самоловов А.А., 1988; Балабанов В.А., 1971; Гришаев Н.Е., 1971; Сидорчук А.А. и др. 1999, 2006) о важной роли микробных ассоциаций в этиологии некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец. Они также позволяют несколько иначе посмотреть на этиологию и патогенез некробактериоза крупного и мелкого рогатого скота и копытной гнили овец.
Таблица 1 Результаты исследований патологического материала от овец, взятого из хозяйств Центральной России, Ставропольского края и Республики Киргизия
№ п/п Идентифицированные микроорганизмы % от числа исследованных проб
1 Clostridium perfringens т. А 69 - 82
2 Dichelobacter (Bacteroides) nodosus 72 - 79
3 Streptococcus pyogenes 17 - 43
4 Staphylococcus aureus 36 - 42
5 Escherichia coli 28 - 38
6 Fusebacterium necrophorum 9 - 39
7 Proteus vulgaris 20 - 33
8 Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes 10 - 12
9 Klebsiella pneumoniae 10
10 Treponema spp. 9
11 Peptostreptococcus anaerobius 8
12 Enterococcus 7 - 8
13 Prevotella (Bacteroides) melaninogenicus 1 - 6
14 Clostridium perfringens т. С 2 - 5
15 Clostridium septicum 4
16 Clostridium oedematiens 3 - 4
17 Clostridium perfringens т. D 3
18 Bacteroides fragilis 2 - 3
19 Bacillus cereus 2 - 3
20 Arachnia propionicus 2
21 Flavobacterium spp. 1
22 Sarcina spp. 1
Таблица 2 Результаты исследований 213 проб патологического материала от крупного рогатого скота, взятого из хозяйств Центральной России, Ставропольского края и Республики Киргизия
№ п/ПИДЕНТИФИЦИРОВАННЫЕ микроорганизмы% от числа исследованных проб
Полученные результаты позволили сделать вывод, что представители гнойно-раневой микрофлоры (C. perfringens, S. aureus, A. pyogenes) в ассоциации с D. nodosus и F. necrophorum значительно усиливают вирулентность последних, позволяя им действием своих ферментов значительно быстрее преодолевать защитные барьеры организма животного и вызывать тяжелые поражения конечностей и внутренних органов, часто приводя к летальному исходу.
Поэтому, на другом этапе исследований были отобраны следующие микроорганизмы: F. necrophorum, D. nodosus, C. perfringens т. А, S. aureus, A. pyogenes для изучения их биологических свойств.
При этом учитывались как культурально-морфологические свойства штаммов F. necrophorum, D. nodosus, C. perfringens т. А, S. aureus, A. pyogenes, так и их биохимические показатели, включая протеолитические и гемолитические, токсигенные, вирулентные и антигенные свойства.
В результате проведенных исследований были описаны свойства: 17 штаммов F. necrophorum, в том числе 10 музейных и 7 вновь выделенных, проведена их типизация и отобраны 4 штамма биотипа «А» для дальнейших экспериментов; 5 штаммов С.perfringens т. А, в том числе 2 музейных и 3 вновь выделенных, из них отобраны 2 штамма; 8 штаммов S. aureus, в том числе 3 музейных и 5 вновь выделенных. Для последующих исследований отобрали 2 штамма; 15 штаммов А. pyogenes, в том числе 5-и музейных и 10-и вновь выделенных. Из этого количества отобрали 5 наиболее перспективных для дальнейших исследований штаммов; 7 штаммов D.nodosus. из которых были отобраны 4 штамма.
Изучение биологических свойств и отбор штаммов позволили перейти к экспериментам, подтверждающим значение ассоциаций указанных микроорганизмов в этиологии инфекционных боленей конечностей.
2.2.1 Экспериментальное подтверждение значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезней конечностей
С этой целью провели подтитровку культур F. necroforum, А. pyogenes, S. aureus на кроликах и определили LD50 для каждой культуры. После определения LD50 был поставлен основной опыт по подтверждению значения ассоциаций микроорганизмов на кроликах массой 2,0-2,5 кг, где животных заражали культурами F. necrophorum, А. pyogenes, S. aureus и различными вариантами смеси этих культур. Результаты исследований продемонстрировали, что при одинаковом количестве инфекционного материала, использованного для заражения животных, в дозе 4 LD50 кролики, зараженные ассоциациями микроорганизмов в различных вариациях, погибали значительно быстрее по сравнению с животными, зараженными монокультурами. Два кролика, зараженные монокультурами, на период наблюдения остались живыми. На вскрытии животных, зараженных ассоциациями, отмечали поражения, характерные для септического процесса: множественные кровоизлияния во внутренние органы, очаги некроза и абсцессы. Результаты повторного эксперимента, полностью совпали с результатами первого опыта.
На селективных средах из отдельных органов удалось реизолировать и идентифицировать исходные культуры микроорганизмов F. necrophorum, А. pyogenes, S. aureus. Заболевание у кроликов, зараженных ассоциациями, протекало остро, и через 2 - 3 дня животные погибали. На вскрытии отмечали поражения внутренних органов, характерные для сепсиса. Выделение и идентификация культур подтверждали чистоту экспериментов.
На втором этапе исследований для подтверждения значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии заболеваний конечностей был поставлен опыт на овцах результаты которого отображает таблица 3.
Таблица 3 Степень проявления болезни в зависимости от состава микробной ассоциации
№ группы Заражающая культура и штамм Колво овец Сроки наблюдения и характер поражения конечностей овец
5 D. nodosus, F. necrophorum (2 шт.) 3 2/л 1/с 3/с 3/с 3/с
6 D. nodosus, F.necrophorum, A. pyogenes S.aureus , C.perfringens т. А 3 3/с 1/с 2/т 1/с 2/т 1/с 2/т
*-числитель - количество заболевших животных, знаменатель - тяжесть поражений: л - легкая степень поражения копытец; с - средняя степень поражения копытец; т - тяжелая степень поражения копытец.
Для постановки опыта использовали 12 овец и 6 баранов 1,5 - 2 летного возраста. Всех животных разделили на 6 групп по 3 овцы в каждой. Для заражения использовали 36 часовые культуры F. necrophorum, А. pyogenes, S. aureus в дозах, составляющих 20 LD50 для кроликов массой 2,5 - 3 кг. В опыте также использовали 12 часовую культуру C. perfringens т. А штамма 28 в дозе 100 LD50 для морских свинок массой 250 г. Культуру D. nodosus штамм ПП82/90 использовали в дозе 50 млрд. м.т.
Заражение осуществляли путем втирания инфекционного материала в скарифицированный свод межкопытной щели с последующим наложением тампона, содержащего инфекционный материал и повязки.
Все животные на протяжении опыта содержались в клетках с сухими полами. За животными установили наблюдение в течение 15 дней. Через 3 дня после заражения у всех животных были сняты повязки с инфекционным заражающим материалом и проведен первый осмотр конечностей всех зараженных овец. В последующем осмотры провели на 7, 11 и 15 дни после заражения. Результаты представлены в таб. 4. В опыте отмечали 3 степени поражения и характеризовали их как: Л - легкая степень поражения; общее легкое угнетение, снижение аппетита, животные иногда поднимают больную конечность в покое, при движении - слабо выраженная хромота. При осмотре: выпадение волос в межкопытной щели, гиперемия и отечность кожи свода межкопытной щели, повышение местной температуры;
С - средняя степень поражения; общее легкое угнетение, гиподинамия, снижение аппетита, выраженная хромота при движении, в покое животное держит больную конечность приподнятой. При осмотре: в области свода межкопытной щели гиперемия, отечность, наличие эрозий и язв, покрытых сероватым экссудатом с ихорозным запахом, повышение местной температуры;
Т - тяжелое поражение; те же клинические признаки поражений, как и при средней тяжести (с), а также поражение основы кожи пяточных частей внутренних стенок копыт и гнойное воспаление основы кожи подошвы, отслоение рогового башмака. Из таблицы 4 видно, что заражение овец монокультурами микроорганизмов не всегда вызывало их заболевания или отмечали в основном легкую степень поражения. Животные, зараженные ассоциациями микроорганизмов, заболели уже на 3 - е сутки после заражения.
В этом случае отмечали среднюю степень поражения у всех зараженных, а у двух баранов отмечена впоследствии тяжелая степень поражения копыт и начато их досрочное лечение. Эксперименты, проведенные на кроликах и овцах, позволили сделать вывод о том, что избранная ассоциация микроорганизмов значительно сильнее угнетает защитные системы организма и в короткие сроки вызывает более тяжелые поражения конечностей животных по сравнению с воздействием монокультур тех же организмов, входящих в состав ассоциаций.
Эти эксперименты подтвердили правомочность концепции создания ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей копытных животных.
2.3 Определение оптимальных соотношений антигенов в ассоциированных вакцинах. Изучение конкуренции антигенов в организме животных, привитых ассоциированными вакцинами
С целью определения оптимальных концентраций антигенов для конструирования ассоциированных вакцин были изготовлены инактивированные формалином антигены D.nodosus, F.necrophorum, C.perfringens т. A, S. aureus, A. pyogenes в концентрациях 10, 20, 40 млрд. микробных клеток в мл , которыми иммунизировали 36 овец 1,5 - 2 летнего возраста. По уровню гуморальных антител в РА подбирали оптимальные концентрации для составления опытных серий ассоциированных вакцин. В результате проведенных исследований были установлены следующие концентрации антигенов для составления опытных серий ассоциированных вакцин: F. necrophorum и D.nodosus 20 млрд. м.т./мл,S.aureus, C. perfringens т. А, A. pyogenes - 30 - 40 млрд. м.т./мл. Конкуренцию антигенов изучали также на овцах, которых прививали моновакцинами из указанных штаммов на ГОА адъюванте и экспериментальной ассоциированной вакциной с этим же адъювантом. Количество каждого антигена в ассоциированной вакцине и моновакцинах было одинаковым. О наличии или отсутствии конкуренции антигенов судили по титру специфических агглютининов и токсиннейтрализующих антител. Результаты исследований приведены в табл. 4.
Исследования позволили установить факт отсутствия конкуренции указанных антигенов в организме привитых овец. Уровни антител, стимулируемых каждой валентностью (антигеном) ассоциированной вакцины в сравнении с уровнем антител, стимулируемых моновакцинами, были примерно одинаковыми и даже несколько большими у ассоциированной вакцины по некоторым валентностям.
Проведенные исследования позволили перейти к изготовлению опытных серий ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и некробактериоза КРС и их испытаниям в неблагополучных по этим болезням овцеводческих и животноводческих хозяйствах.
2.4 Испытания опытных образцов ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и некробактериоза КРС. Разработка схемы применения ассоциированных вакцин
Испытание опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с масляным адъювантом, провели в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» и отечественной моновакциной против копытной гнили овец в совхозе «Кузнецовский» Тверской области. В свою очередь, в совхозе «Мир» Рузаевского района Республики Мордовия испытывались несколько вариантов инактивированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с различными адъювантами и антигенным составом. Аналогично в совхозе «им. Кирова» Балашихинского района Московской области были испытаны несколько вариантов инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с лечебной и профилактической целями, включая вариант вакцины с иммуномодулятором «Гликопин» (ГМДП), в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» на 170 головах крупного рогатого скота.
Таблица 4 Результаты сравнительного испытания ассоциированной вакцины и моновакцин
Сроки исследований Средние титры в РА и РН Средние титры в РА и РН моновакцины. ассоциированная вакцина
D. nodosus F. necrophorum S. aureus A. pyogenes C.perfringens т. А D. nodosus F. Necrophorum S. aureus A. pyogenes C.perfringens т. А До вакцинации, 1-я вакцинация 1:60 ±5 1:80 ±5 1:70 ±5 1:50 ±0 - 1:80 ±5 1:80 ±5 1:70 ±5 1:50 ±0 -
Через 1 мес после 1-й вакцинации, 2-я вакцинация 1:200 ±0 1:480 ±40 1:200 ±0 1:60 ±5 0,24 1:280 ±40 1:1920 ±200 1:240 ±20 1:60 ±5 0,88
Через 2 недели после 2-й вакцинации 1:960 ±30 1:1660 ±0 1:360 ±20 1:160 ±10 0 1:1600 ±0 1:3840 ±800 1:480 ±40 1:240 ±10 1,72
Через 1 мес после 2-й вакцинации 1:480 ±40 1:2240 ±300 1:400 ±0 1:360 ±20 0,5 1:1040 ±80 1:2240 ±300 1:480 ±4 1:480 ±40 -
Через 2 мес после 2-й вакцинации, 1:400 ±0 1:1920 ±180 1:320 ±20 1:150 ±10 - 1:960 ±30 1:1920 ±200 1:360 ±20 1:200 ±0 -
Через 3 мес после 2-й вакцинации 1:150 ±10 1:960 ±30 1:150 ±10 1:50 ±0 - 1:720 ±20 1:1600 ±0 1:280 ±40 1:80 ±5 -
Впоследствии, лучшим вариантом вакцины против некробактериоза КРС было привито все поголовье (1347 коров) этого хозяйства. Другой вариант (эмульгированной) опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС был испытан на 381 голове КРС в совхозе «Луховский» Октябрьского района г. Саранска. В дальнейшем в совхозе «Барыбино» опытно-промышленной серией инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с ГОА адъювантом, было привито 32 коровы различными дозами этого препарата. В этом хозяйстве были исследованы также некоторые параметры иммунитета, стимулируемого этой вакциной.
В результате проведенных исследований было установлено, что вакцинация животных инактивированными ассоциированными вакцинами против инфекционных заболеваний конечностей овец и некробактериоза КРС является эффективным методом борьбы с этими болезнями. Их эффективность оказалась выше, чем у Югославской ассоциированной вакцины «Памавак» и эмульгированной моновакцины против копытной гнили овец. В итоге, в качестве адъюванта был выбран 3% ГОА как менее реактогенный по сравнению с масляным и дешевый. Наиболее эффективной оказалась двукратная иммунизация животных с интервалом 28 - 30 дней при подкожном введении в области коленной складки для КРС и в области нижней трети шеи для овец в дозах по 5 мл на 1 голову животного.
Срок иммунитета, стимулируемого этими вакцинами не превышал 6 месяцев, поэтому перспективной являлась однократная реиммунизация через 5-6 месяцев после второй вакцинации для поддержания иммунитета у привитых животных.
Инактивированная ассоциированная вакцина против инфекционных заболеваний конечностей овец получила название «Овикон», а инактивированная ассоциированная вакцина против некробактериоза конечностей КРС - «Нековак».
2.5 Разработка методов контроля ассоциированных вакцин
За основу лабораторных методов контроля вакцин «Овикон» и «Нековак» брали существующие стандартные методики: отбор проб по ОСТ 10-07-001-93, определение внешнего вида визуально, определение стерильности согласно ГОСТ 28085-89 - «Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности». При этом в питательных средах с посевами и пересевами не должно быть визуальных признаков роста микрофлоры. Определение безвредности проводили также по стандартной методике, используя 10 белых мышей и двух кроликов, при подкожном введении в соответствующих дозах. Вакцины считали безвредными, если животные в течение 10 суток оставались живы и клинически здоровы. Допускалось образование в местах введения вакцин припухлостей различной величины. Принципиально важным и сложным стал вопрос о разработке методов контроля антигенной и иммуногенной активности ассоциированных вакцин «Овикон» и «Нековак» ввиду большого количества антигенов и анатоксинов входящих в их состав. Ранее, нами в качестве лабораторного контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец инактивированной эмульгированной был разработан метод определения антител в РА у вакцинированных кроликов. Предварительно нами были изучены вирулентные и иммуногенные свойства D. nodosus на лабораторных моделях. В результате исследований было установлено, что лабораторные животные (кролики, белые мыши, морские свинки и другие) не чувствительны к D. nodosus. При различных методах заражения и дозах культуры D. nodosus не вызывали заболевания и падежа лабораторных животных (Панасюк С.Д., 1982). Однако, нами было экспериментально установлено, что динамика накопления антител в крови вакцинированных кроликов в половинных дозах (от дозы овцы) повторяет динамику накопления агглютининов у привитых овец только на более низком уровне соответственно 1:720-1:880 и 1:2133-1:2533 на пике накопления. При этом коэффициент корреляции был в высокой степени положительным (r= 0,83- 0,99). Это позволило использовать кроликов в качестве лабораторной модели контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец ВИЭВ инактивированной эмульгированной (Панасюк С.Д. 1982, 1983). Предложенный метод прошел проверку на Орской и Армавирской биофабриках и надежно обеспечивал качество указанной вакцины до момента снятия ее с производства. Учитывая тот факт, что в состав вакцины «Овикон» входит антиген D. nodosus, мы использовали указанный метод контроля антигенной активности этой валентности на кроликах в тех же параметрах, как и у вакцины против копытной гнили овец. Более того, учитывая потерю вирулентных свойств культур F. necrophorum (быструю потерю вирулентных свойств культур при пересевах на жидких питательных средах и возможность образования L-форм). Нами были проведены сравнительные исследования по определению динамики антител у вакцинированных кроликов, овец и КРС. Результаты исследований показали, как для валентности D. nodosus, так и для валентности F. necrophorum имеется возможность использовать кроликов в качестве лабораторной модели для оценки антигенной активности вакцин. Корреляция титров агглютининов у вакцинированных кроликов и овец, а также у привитых кроликов и КРС была оч
Панасюк Д.И. Гельминты как резервуарные хозяева и инокуляторы возбудителей инфекционных и инвазионных заболеваний человека и животных / Панасюк Д.И., Панасюк С.Д. // Тр. лаборатории гельминтологии АН СССР - 1986 - №36 - С.212-221.
Панасюк С.Д. Эффективность ассоциированных вакцин против копытной гнили овец. / Панасюк С.Д., Сидорчук А.А., Караваев Ю.Д. // Мат. пленума секции паразитоценологии АН СССР - Витебск, 1988 - С. 19-21.
Сидорчук А.А. Роль ассоциаций анаэробных бактерий в патологии с с/х животных / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. // Мат. пленума секции паразитоценологии АН СССР - Витебск, 1988 - С 21-24.
Панасюк С.Д. Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезней конечностей овец и КРС / Панасюк С.Д., Сидорчук А.А.,Караваев Ю.Д., и др.// Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов -Тез. докл. Всесоюзной научной конференции Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов - М., 1991 - С.179-180.
Авторское свидетельство № 1835295 - Вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатого / Коромыслов Г.Ф., Панасюк С.Д., Сидорчук А.А. и др. Гос. реестр изобретений СССР - 13.10. 1992.
Сидорчук А.А. Система мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. // Ветеринария - 1994 - № 1 - С.12-14.
Панасюк С.Д. Некоторые аспекты иммунопрофилактики некробактериоза конечностей КРС с использованием ассоциированной вакцины "Нековак" / Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н., Сидорчук А.А., Устинова Г.И. // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Сб. науч. тр. Ульяновского СХИ - Ульяновск - 1995 - Часть 2 - 1995 - С. 42-46.
Гельминты и простейшие, резервуарные хозяева и возбудители гиперпаразитаных сочетанных инфекционных и инвазионных болезней / Панасюк Д.И., Панасюк С.Д., Ятусевич А.И., Ерхан Д.К. - Кишинев - "Штиинца", 1995 - 335 с.
Сидорчук А.А. Некоторые аспекты иммунопрофилактики некробактериоза конечностей КРС с использованием ассоциированной вакцины "Нековак" / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. и др. // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных. - Сб. науч. тр. МГАВМИБ - 1995 - С. 142-146.
Панасюк С.Д. Специфическая профилактика инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота и овец / Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н., Кириллов Л.В. и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ - 1996 - Т. 59 - С.76 - 82.
Панасюк С.Д. Перспективы специфической профилактики инфекционных болезней конечностей. Научные аспекты профилактики и терапии болезней сельскохозяйственных животных. Мат. науч. конф. Воронежского гос. аграрного университета им. К.Д. Глинки - Воронеж, 1996. - Часть 1 - С.192-193.
Панасюк С.Д. Новые препараты для профилактики конечностей у крупного и мелкого рогатого скота / Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н., Кириллов Л.В. и др. // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных. Сб. науч. тр. Ставропольской гос. с/х академии - Ставрополь, 1996 - С.24-26.
Проблемы симбиоценологии / Д.И. Панасюк, Панасюк С.Д., Максина Т.П. и др. - Нальчик, изд. Кабардино-Балкарской гос. с/х академии, 1997 - 304 с.
Патент №2098127. Ассоциированная вакцина "Нековак" против некробактериоза крупного рогатого скота / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И., Кружнов Н.Н., Коромыслов Г.Ф. - Гос. Реестр изобретений Российской Федерации - 10 декабря 1997.
Патент № 2098128. Ассоциированная вакцина "Овикон" против инфекционных заболеваний конечностей овец. / Панасюк С.Д., Кириллов Л.В., Кружнов Н.Н. и др. - Гос. Реестр изобретений Российской Федерации - 10 декабря, 1997.
Сидорчук А.А. Перспективы применения цинко-содержащих препаратов при инфекционных болезнях конечностей жвачных. / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кононов А.Н. // Вестник ветеринарии - Ставрополь, 1997 - №5 - т.3 - С. 78-81.
Панасюк С.Д. Иммунопрофилактика и терапия некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец с использованием ассоциированных вакцин "Нековак" и "Овикон" / Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н., Кириллов Л.В., Сидорчук А.А. и др. // Современное состояние и перспективы интеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформирования сельскохозяйственного производства. Тез. докл. международной конф. Прикаспийского ЗНИВИ - Махачкала, 1997г., С.77-79.
Геладзе В.Ш. Усовершенствование технологии изготовления ассоциированных вакцин против инфекционных заболеваний конечностей крупного рогатого скота "Нековак" и "Овикон". / Геладзе В.Ш., Панасюк С.Д., Сидорчук А.А. и др. // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных. Сб. научных трудов Ставропольской гос. с/х академии - Ставрополь, 1998 - С.25-26.
Сидорчук А.А. Состояние изученности и проблемы борьбы с некробактериозом КРС / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н., Устинова Г.И. // Мат. международного симпозиума зав. кафедрами эпизоотологией и инфекционных болезней - Кишинев, 1998 - С.70-73.
Коромыслов Г.Ф. Применение ликопида в качестве адъюванта при конструировании вакцин для профилактики инфекций / Коромыслов Г.Ф., Устинова Г.И., Панасюк С.Д. и др. // Современная вакцинология. Тез. докл. 2-й международной конференции, посвященной 100-летию Пермского НПО "Биомед". 1998 - С.45.
Сидорчук А.А. Некробактериоз КРС: применение вакцины "Нековак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с болезнью / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н. и др. // Тр. ВИЭВ - 1998 - т.78 - С.33-38.
Сидорчук А.А. Система мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС и копытной гнилью овец / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н. и др. // Ветеринария - 1999 - №6 - С.23-27.
Панасюк С.Д. Значение ассоциаций анаэробных микроорганизмов в норме и патологии с/х животных / Панасюк С.Д. // Сб. науч. тр.ВГНКИ - 1999 - т.61 - С. 64-73.
Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе КРС. Рекомендации. Изд. 1-е / А.А. Сидорчук, Д.П. Аголори, Панасюк С.Д. и др. - М. 2000 - 14с.
Сидорчук А.А. Специфическая профилактика копытной гнили овец / Сидорчук А.А., Кононов А.Н., Панасюк С. // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных. Сб. науч. тр. Ставропольской гос. с/х академии - Ставрополь, 2001 - С. 34-36.
Сидорчук А.А. Применение вакцины "Нековак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с некробактериозом крупного рогатого скота / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н. и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ - 2001 - т.62 - С.108-113.
Кононов А.Н. Эпизоотология и специфическая профилактика копытной гнили овец в Ставропольском крае / Кононов А.Н., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н. и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ - 2001 - т.62, стр.113-117.
Геладзе В.Ш. Совершенствование промышленной технологии изготовления ассоциированных вакцин "Овикон" и "Нековак" / Геладзе В.Ш., Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. и др. // Совершенствование методов контроля, стандартизации ветеринарных препаратов. Тез. докл. Всероссийской науч. конф. - М., 2001. - С. 64-66.
Сидорчук А.А. Некробактериоз КРС: эффективность альтернативных методов лечения / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Кружнов Н.Н. и др. // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии. Материалы научно-практической конф. посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС - Краснодар, 2001 - т. 11 - С. 213-214.
Сидорчук А.А. Состояние и перспективы профилактики и ликвидации некробактериоза в России / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Зубкова А.Ю., Аголори Д.П. // Мат. методической и науч. конф. Сб. науч. тр. - М., 2001 - С. 135-136.
Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных. / Сидорчук А.А., Караваев Ю.Д., Кириллоа Л.В., Соломаха О.И., Панасюк С.Д., Семенова И.Н. - МСХ и П России, Департамент ветеринарии №13.41313-00 от 11.07.2000г.-М., 2001 - 9 с.
Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе КРС. Рекомендации Изд. 2-е / Сидорчук А.А., Аголори Д.П., Панасюк С.Д. и др. -М., -2001 - 14 с.
Сидорчук А.А. Некробактериоз: прошлое, настоящее и будующее / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. // Ветеринарная медицина - М. - 2002 С. 3 - 4.
Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе КРС. Рекомендации. Изд. 3-е / Сидорчук А.А., Аголори Д.П., Панасюк С.Д., и др. - М. - 2003 -14 с.
Сидорчук А.А. Некробактериоз КРС: применение вакцины «Нековак» в системе мероприятий по профилактике и борьбе с ним. / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. и др. // Инфекционные и протозойные болезни с/х животных рыб и пчел - Тр. ВИЭВ. .-2003 - Т.73.- С.187-192.
Панасюк С.Д. Специфична профилактика на инфекциозните копитни заболявания при едрия рогат добитьк и при овцете в Руската Федерация / Панасюк С.Д. // Ветеринаро-медицински новини.- София, 2003 - №6 - С.10-13.
Методические рекомендации по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец / Кононов А.Н., Дмитриев А.Ф., Заерко В.И., Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. и др. - М., -2004 - 19 С.
Сидорчук А.А. Проблемы борьбы с некробактериозом КРС в России / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии - Троицк, 2004 - С.149-150.
Сидорчук А.А. Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей крупного рогатого скота и овец в Российской Федерации / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д., Устинова Г.И. и др. // Ветертнарная служба Ставрополья.- 2005 - №3 -С.5-10.
ПАНАСЮКС.Д. Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей КРС и овец в Российской Федерации / Панасюк С.Д., Кириллов Л.В.,Сидорчук А.А. и др. //Сб. науч. тр. ВГНКИ - 2005 - Т.66 - С.265-279.
48. Сидорчук А.А. Проблемы борьбы с некробактериозом: заблуждения и реальность / Сидорчук А., Кириллов Л.В., Панасюк С.Д. и др. // Ветеринария - 2006 -№2-С.5-6.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
