Взаємодія аутологічних лімфоцитів з клітинами меланоми: реалізація протипухлинного ефекту - Автореферат

Вивчення взаємодії пухлинних і імунокомпетентних клітин є однією з головних проблем сучасної онкології, оскільки взаємодія цих клітин це складний, взаємозалежний процес, результатом якого може бути як розвиток ефективної імунологічної відповіді, так і прогресія злоякісного процесу. Важливе значення у реалізації протипухлинної дії лімфоцитів при їх взаємодії з пухлинними клітинами відіграють біологічні особливості цих клітин [Бережная Н.М., 2001]. Біологічні особливості та функціональна активність пухлинних клітин різного гістогенезу і лімфоцитів в значній мірі визначаються тим, які поверхневі рецептори або внутрішньоклітинні антигени вони експресують. Вивчення експресії рецепторів на пухлинних та лімфоїдних клітинах дозволяє виявити деякі особливості фенотипу пухлинних клітин та лімфоцитів, а також зясувати роль цих особливостей для реалізації протипухлинної дії лімфоцитів. Таким чином, зазначене вище обумовлює проведення досліджень спрямованих на вивчення ролі експресії CD25, CD54 та ядерного антигена проліферуючих клітин лімфоцитами та клітинами меланоми для взаємодії цих клітин, а також корекції протипухлинної дії лімфоцитів імуномодулятором - мієлопептидом-2.Для відтворення моделі меланоми В16 пухлинні клітини вводили мишам підшкірно (по 7х105 пухлинних клітин на тварину). Пухлинні клітини та лімфоцити периферичної крові одержані від 25 хворих на меланому шкіри з різними стадіями захворювання (15 хворих з І і ІІ стадіями, 10 хворих з ІІІ і IV стадіями), що знаходилися на стаціонарному лікуванні у науково-дослідному відділенні пухлин опорно-рухового апарату Інституту онкології АМН України. Протипухлинну дію лімфоцитів людини і мишей оцінювали по пригніченню росту пухлинних клітин при їх сумісному культивуванні з лімфоцитами в дифузійних камерах. Дифузійні камери з пухлинними клітинами і лімфоцитами культивували на протязі 5 діб у культуральному середовищі RPMI-1640 (“Sigma”, США) з додаванням 10% ембріональної телячої сироватки (“Сангва”, Україна) при температурі 370С та насиченні повітря 5% СО2 в 24-луночних планшетах (“Nunclon”, Данія). При вивченні експресії зазначених вище антигенів лімфоцитами регіонарних і віддалених лімфатичних вузлів мишей в динаміці росту меланоми В16 було встановлено, що для неактивованих лімфоцитів лімфатичних вузлів інтактних мишей характерне знижене число лімфоцитів, що експресували ядерний антиген проліферуючих клітин (40,1±2,4%), CD25 (21,3±2,7%) і CD54 (15,2±4,3%).Встановлено, що в динаміці росту меланоми В16 знижується кількість лімфоцитів, які експресують CD54 і ядерний антиген проліферуючих клітин, в регіонарних та віддалених лімфатичних вузлах. Протипухлинна дія лімфоцитів регіонарних і віддалених лімфатичних вузлів мишей з меланомою В16 асоціюється із збільшенням кількості лімфоцитів та зниженням кількості пухлинних клітин, які експресують ядерний антиген проліферуючих клітин; протипухлинна дія лімфоцитів віддалених лімфатичних вузлів асоціюється з високою кількістю CD54-позитивних клітин.5.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Робота присвячена проблемі взаємодії аутологічних лімфоцитів різної локалізації (ЛПК, регіонарні та віддалені лімфатичні вузли) з клітинами меланоми людини та мишей, вивченню ролі експресії ядерного антигена проліферуючих клітин, CD25, CD54 у реалізації протипухлинної дії лімфоцитів та можливої корекції вказаної взаємодії мієлопептидом-2.

1. Найбільш характерним для клітин меланоми В16 є зниження кількості CD54-позитивних клітин і підвищення кількості клітин, які експресують ядерний антиген проліферуючих клітин, у динаміці росту пухлини.

2. Встановлено, що в динаміці росту меланоми В16 знижується кількість лімфоцитів, які експресують CD54 і ядерний антиген проліферуючих клітин, в регіонарних та віддалених лімфатичних вузлах.

3. Показано, що при рості меланоми В16 знижується протипухлинна дія лімфоцитів регіонарних і особливо віддалених лімфатичних вузлів при їх взаємодії з пухлинними клітинами.

4. Протипухлинна дія лімфоцитів регіонарних і віддалених лімфатичних вузлів мишей з меланомою В16 асоціюється із збільшенням кількості лімфоцитів та зниженням кількості пухлинних клітин, які експресують ядерний антиген проліферуючих клітин; протипухлинна дія лімфоцитів віддалених лімфатичних вузлів асоціюється з високою кількістю CD54-позитивних клітин.5. Відсоток CD54-позитивних пухлинних клітин у хворих на меланому збільшується на ІІІ і IV стадіях пухлинного процесу і асоціюється із стадією захворювання, що може мати прогностичне значення.

6. Протипухлинна дія лімфоцитів хворих на меланому асоціюється з високим відсотком CD11b-позитивних лімфоцитів периферичної крові.

7. Мієлопептид-2 пригнічує ріст клітин меланоми людини і мишей з меланомою В16 та посилює протипухлинну дію аутологічних лімфоцитів лімфатичних вузлів мишей з пухлиною і ЛПК хворих при сумісному культивування лімфоцитів і пухлинних клітин у дифузійних камерах.

Винничук Ю.Д., Спивак С.И., Бережная Н.М. Экспрессия некоторых структур адгезии, пролиферации и активации на опухолевых клетках и лимфоцитах мышей линии C57BL/6 с меланомой В16 // Экспериментальная онкология. - 1999. - Т. 21, №3-4. - С. 227-231 (Самостійно проводила виділення пухлинних клітин і лімфоцитів, проводила імунофлуоресцентний аналіз; обробку отриманих результатів, приймала участь у написанні статті).

Бережная Н.М., Винничук Ю.Д., Спивак С.И., Толстопятов Б.А., Коноваленко В.Ф., Ковальчук Е.В. Влияние миелопептида-2 нарост опухолевых клеток и их взаимодействие с лимфоцитами in vitro // Экспериментальная онкология. - 2001. - Т. 23, №3. - С. 149-152 (Самостійно проводила виділення пухлинних клітин, лімфоцитів, досліджувала вплив МП-2 на ріст клітин меланоми В16 мишей, клітин меланоми хворих і їх взаємодію з лімфоцитами лімфатичних вузлів мишей, ЛПК, обробку отриманих результатів, приймала участь у написанні статті).

Співак С.І., Вінничук Ю.Д., Ковальчук О.В. Протипухлинна дія лімфоцитів (різної локалізації) мишей з перевивною МХ-рабдоміосаркомою та меланомою В16 // Вісник Київського національного університету ім. Т.Шевченка, Біологія. - 2000.- Вип. 32. - С. 24-26 (Самостійно отримувала клітини меланоми В16 та лімфоцити лімфатичних вузлів мишей лінії C57BL/6, досліджувала протипухлинну дію лімфоцитів мишей з меланомою В16; приймала участь у оформленні наукових результатів та написанні статті).

Співак С.І., Вінничук Ю.Д., Ковальчук О.В., Коноваленко В.Ф. Взаємодія пухлинних клітин та лімфоцитів хворих: значення адгезивних молекул // Вісник Київського національного університету ім. Т.Шевченка, Біологія. - 2001. - Вип. 34. - С. 15-17 (Самостійно виділяла пухлинні клітини і лімфоцити периферичної крові хворих на меланому, досліджувала експресію молекул адгезії та протипухлинну дію лімфоцитів; приймала участь у оформленні наукових результатів та написанні статті).

Бережная Н.М., Винничук Ю.Д. Взаимодействие лимфоцитов и опухолевых клеток под влиянием предварительной обработки миелопептидом-2 // Аллергология и иммунология. - 2003. - Т. 4, №1. - С. 12-15 (Самостійно проводила експериментальні дослідження: отримання клітин меланоми В16 і лімфоцитів лімфатичних вузлів мишей, обробку їх МП-2, вивчення взаємодії пухлинних клітин і лімфоцитів; приймала участь у оформленні наукових результатів і написанні статті).

Спивак С.И., Винничук Ю.Д. Значение экспрессии различных структур опухолевых и лимфоидных клеток для их взаимодействия в динамике роста опухоли // Тез. IV Української науково-практичної конференції з актуальних питань алергології та клінічної імунології. Імунологія та алергологія. - Київ, 1999. - №3. - С. 45.

Бережная Н.М., Винничук Ю.Д., Спивак С.И., Ковальчук Е.В., Коноваленко В.Ф. Взаимодействие лимфоцитов и опухолевых клеток: значение особенности опухоли. // Тез. ІІ съезда онкологов стран СНГ. - Киев, 2000 // Экспериментальная онкология.- 2000. - Т.22. - С. 217.

Бережна Н.М., Співак С.І., Вінничук Ю.Д., Ковальчук О.В. Клінічна інтерпретація антигенів CD25, CD71, CD5\на пухлинних клітинах та CD11b на лімфоцитах хворих саркомами та меланомою // Матеріали Х зїзду онкологів України. - Київ, 2001. - С. 33-34.

Винничук Ю.Д. Значение экспрессии CD25, CD54 лимфоцитами и опухолевыми клетками для взаимодействия этих клеток в динамике роста меланомы В16. // Тез. V конференції молодих онкологів України. - Київ, 2002. - С. 3.

Винничук Ю.Д. Влияние иммуномодулятора костномозгового происхождения миелопептида-2 нарост клеток меланомы и их взаимодействие с лимфоцитами // Тез. VI конференції молодих онкологів України. - Київ, 2003. - С. 12.