Разработка условий роллерного органотипического культивирования in vitro для тканей глаза высших позвоночных. Исследование профиля экспрессии генов-маркеров дифференцировки до и после культивирования сетчатки и ретинального пигментного эпителия in vitro
При низкой оригинальности работы "Выявление и активация in vitro скрытых регенерационных потенций сетчатки глаза позвоночных животных", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Изучить влияние фактора роста фибробластов (FGF2) и митохондриального антиоксиданта SKQ1 на жизнеспособность, пролиферативную активность и изменение фенотипа клеток тканей глаза в условиях in vitro. культивирование vitro сетчатка пигментный Впервые показана возможность усиления выявленных регенерационных ответов с помощью антиоксиданта SKQ1 в сетчатке тритона, путем предотвращения гибели пролиферирующих и вновь образующихся дедифференцированных клеток, а в РПЭ крысы путем существенного снижения не только клеточной гибели, но и проявления патологических изменений в РПЭ, а именно ингибирования трансформации его клеток в макрофагальный фенотип. Среда культивирования для тканей глаза тритона состояла из среды 199 (70%), дистиллированной воды (30%), буфера HEPES (30 мкл на 100 мл среды), гентамицин сульфата (200 мкл на 100 мл среды) и 10%-ной эмбриональной бычьей сыворотки (10 мл на 100 мл среды); для тканей глаза крысы - среда ДМЕМ, 10%-ная эмбриональная телячья сыворотка (10 мл на 100 мл среды), L-глутамин (300 мг на 500 мл среды) и гентамицин, добавленный из расчета 500 мкл на 500 мл среды. При культивировании in vitro сетчатки и заднего сектора глаза тритона предшественник вводили в среду при очередной ее смене в концентрации, рекомендованной производителем (Sigma). Следует подчеркнуть, что наиболее яркой отличительной особенностью клеток РПЭ тритона от РПЭ крысы явилась способность части популяции, вымещаясь из слоя, формировать еще один - два ряда прилежащих депигментированных клеток, т.е. повторять поведение РПЭ при регенерации сетчатки тритона после удаления сетчатки или перерезки зрительного нерва in vivo.Разработаны условия органотипического 3D-культивирования in vitro сетчатки и пигментного эпителия глаза взрослых низших (тритон) и высших (крыса) позвоночных животных для длительного поддержания жизнеспособности, активации пролиферации и изменений фенотипа клеток. При отслойке сетчатки in vivo и при культивировании in vitro обнаружены процессы регенерации, выражающиеся в замещении погибающих клеток за счет пролиферирующих клеток ростовой зоны и мюллеровской глии, а также их последующей миграции в ядерные слои сетчатки. При добавлении антиоксиданта SKQ1 в среду культивирования сетчатки тритона пул малодифференцированных клеток увеличивается до 80% от общего числа клеток. При сравнении процессов, происходящих в ретинальном пигментном эпителии (РПЭ) тритона и крысы in vitro, наблюдается сходство, а именно выход части клеток из слоя и изменение их фенотипа в сторону макрофагального.
Вывод
Разработаны условия органотипического 3D-культивирования in vitro сетчатки и пигментного эпителия глаза взрослых низших (тритон) и высших (крыса) позвоночных животных для длительного поддержания жизнеспособности, активации пролиферации и изменений фенотипа клеток.
При отслойке сетчатки in vivo и при культивировании in vitro обнаружены процессы регенерации, выражающиеся в замещении погибающих клеток за счет пролиферирующих клеток ростовой зоны и мюллеровской глии, а также их последующей миграции в ядерные слои сетчатки. При добавлении антиоксиданта SKQ1 в среду культивирования сетчатки тритона пул малодифференцированных клеток увеличивается до 80% от общего числа клеток.
В сетчатке крысы in vitro происходят клеточные перемещения, пролиферация макрофагов и глиальных клеток. Клетки периферии сетчатки крысы (аналога ростовой зоны сетчатки тритона) - в пролиферативную фазу не входят. На клеточном уровне в фоторецепторах сетчатки крысы обнаружены транслокация рековерина и синтез МТДНК.
При сравнении процессов, происходящих в ретинальном пигментном эпителии (РПЭ) тритона и крысы in vitro, наблюдается сходство, а именно выход части клеток из слоя и изменение их фенотипа в сторону макрофагального.
В клетках слоя РПЭ тритона и крысы на фоне невысокой пролиферативной активности регистрируется экспрессия пронейральных маркерных белков.
Отличительным свойством РПЭ тритона при данном способе культивирования является способность к образованию 1-3 рядов дедифференцирующихся клеток раннего регенерата сетчатки.
ДНК-синтезирующая активность клеток РПЭ тритона увеличивается при добавлении в среду культивирования FGF2 или при снятии склеральной оболочки.
Присутствие антиоксиданта в среде культивирования РПЭ крысы не только снижает клеточную гибель, но и ингибирует трансформацию клеток РПЭ в сторону макрофагального фенотипа.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ (грант № 07-04-00273) и при использовании оборудования Центра коллективного пользования «По биологии развития на основе использования клеточных технологий и оптических методов» ИБР РАН.
Список литературы
Григорян Э.Н., Новикова Ю.П., Килина О.В., Филиппов П.П. Новый метод культивирования in vitro пигментного эпителия сетчатки в составе заднего сектора глаза взрослой крысы // Клеточные технологии и биологии и медицине. 2007. № 4. С. 207-215.
Новикова Ю.П., Поплинская В.А., Алейникова К.С., Григорян Э.Н. Исследование локализации и накопления клеток в S-фазе в сетчатке после искусственной отслойки от пигментного эпителия в глазах тритона Pleurodeles waltlii // Онтогенез. 2008. Т. 39. № 2. C. 143-150.
Новикова Ю.П., Алейникова К.С., Краснов М.С., Поплинская В.А., Григорян Э.Н. Клетки пигментного эпителия сетчатки глаз взрослых тритона и крысы в условиях органотипического культивирования in vitro // Изв. АН. Сер. биол. 2010. №3. С. 271-282.
Новикова Ю.П., Григорян Э.Н., Килина О.В., Филиппов П.П. Новый метод культивирования in vitro задней стенки глаза крысы для изучения состояния тканей при патологиях in vivo. // Сб. «Пролиферативный синдром в офтальмологии». Москва. МЗСР РФ и РГМУ. 2008. С. 20-22.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
