Клетки трофобласта как потенциальные источники генетической информации для реализации в акушерской практике скрининговых подходов к неинвазивной пренатальной диагностике. Использование метода градиентного центрифугирования и магнитной сепарации.
При низкой оригинальности работы "Выделение клеток плода, циркулирующих в крови матери, для неинвазивной пренатальной диагностики", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Обобщая этот опыт можно заключить, что главные трудности в получении надежных и воспроизводимых результатов генетического исследования лежат как в выборе наиболее подходящих типов фетальных клеток, так и оптимальных способов их обогащения, детекции, захвата, применения технологий микроманипуляций с клетками [13, 14]. Клетки, не связавшие MICROBEADS (негативные по CD45), удаляли промыванием колонки МАКС-буфером как негативную фракцию, которую подвергали дальнейшему исследованию. С одного слайда вырезали и катапультировали до 10 клеток, удовлетворяющих критериям отбора - каждый фрагмент мембраны с клеткой в отдельную ПЦР-пробирку. Среднее число выделенных клеток в 800 мкл буфера составило 1,05±0,12?108 клеток (среднее ±SE), что соответствовало средней концентрации ~ 1?108 клеток/мл. Сортировку проводили согласно рекомендациям производителя с заданными параметрами (диаметр сопла - 85 мкм, маска чистоты - «Single Cell Precision», в камере сбора клеток - устройство для сортировки на предметные стекла) до полного расходования пробы, что соответствовало индивидуальным колебаниям общего числа событий от 853 тыс. до 1,38 млн. Среднее число клеток-кандидатов, удовлетворяющих критериям CD45-HLA-G anti-TBA , отсортированных на предметные стекла с каждой пробы, составило 37,6±5,38 клеток.
Список литературы
1. Tabor A, Alfirevic Z. Update on procedure-related risks for prenatal diagnosis techniques // Fetal DIAGNTHER. - 2010. - Vol. 27 (1). - P. 1-7
2. Серов В.Н., Горин В.С., Жабин С.Г., Горин Р.В., Маркдорф А.Г., Шин А.П. Новые методические подходы в пренатальной диагностике хромосомных заболеваний (обзор литературы) // Проблемы репродукции. - 2000. - №2. - С. 11-18.
3. Буяновская О.А., Глинкина Ж.И., Каретникова Н.А., Бахарев В.А. Молекулярно-генетические методы в пренатальной диагностике хромосомных аномалий // Акушерство и гинекология. - 2012. - №8., Т.1 - С. 3-9.
4. Nicolaides K.H., Syngelaki A., Gil M., Atanasova V. and Markova D. Validation of targeted sequencing of single-nucleotide polymorphisms for noninvasive prenatal detection of aneuploidy of chromosomes 13, 18, 21, X, and Y // Prenatal Diagnosis. - 2013. - V.33, 6. - Р. 575-579.
5. Пантюх К.С., Шубина Е.С. Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидий плода, основанная на секвенировании внеклеточной ДНК крови беременной женщины // Акуш. и гин. - 2015. - №8. - С. 5-11.
6. Сухих Г.Т., Каретникова Н.А., Баранова Е.С., Шубина Е.С., Коростин Д.О. и др. Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидий методом высокопроизводительного секвенирования (NGS) группе женщин высокого риска // Акуш. и гин. - 2015. - №4. - С. 5-11.
7. Екимова Е.В., Екимов А.Н., Алексеева М.Л. Роль молекулярных методов диагностики в преимплантационном скрининге эмбрионов (обзор литературы) // Проблемы репродукции. - 2012. - №6. - С. 56-59.
8. Allyse M, Minear MA, Berson E, Sridhar S, Rote M, Hung A, Chandrasekharan S. E Noninvasive prenatal testing: a review of international implementation and challenges. International journal of women"s health, 2015, 7:113-26.
9. Christensen B, Philip J, Kolvraa S, Lykke-Hansen L, Hom I. Fetal Cells in Maternal Blood: A Comparison of Methods for Cell Isolation and Identification. // Fetal Diagnosis and Therapy, 2005; 20:106-112.
10. Purwosunu Y, Sekizawa A, Koide K, Okazaki S, Farina A, Okai T. Clinical potential for noninvasive prenatal diagnosis through detection of fetal cells in maternal blood. Taiwanese journal of obstetrics & gynecology, 2006, 45 (1):10-20.
11. Hatt L, Brinch M, Singh R, Moller K, Lauridsen RH, Uldbjerg N, Huppertz B, Christensen B, Kolvraa S. Characterization of fetal cells from the maternal circulation by microarray gene expression analysis-could the extravillous trophoblasts be a target for future cell-based noninvasive prenatal diagnosis? // Fetal Diagn Ther. 2014; 35 (3):218-27.
12. Calabrese G, Baldi M, Fantasia D, Sessa MT, Kalantar M, Holzhauer C, Alunni-Fabbroni M, Palka G, Sitar G: Detection of chromosomal aneuploidies in fetal cells isolated from maternal blood using single-chromosome dual-probe FISH analysis // Clin Genet, 2012, 82:131-139.
13. Mouawia H, Saker A, Jais JP, et al. Circulating trophoblastic cells provide genetic diagnosis in 63 fetuses at risk for cystic fibrosis or spinal muscular atrophy. Reprod Biomed Online 2012; 25:508-20.
14. Мусатова Е.В., Маркова Ж.Г., Витязева И.И., Шилова Н.В. Оценка возможности выделения клеток трофобласта из периферической крови и их анализа в условиях модельного эксперимента // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - №5. doi: 10.17513/spno.128-21840.
15. Nemescu D., Constantinescu D., Martiniuc V., Onofriescu M., Carasevici E. Detection of Nucleated Red Blood Cells in Maternal Circulation by Magnetic Sorting and in situ Hybridization. // GINECOEU 2011, 7 (1):15-18.
16. Zimmerlin L, Donnenberg VS, Donnenberg AD. Rare event detection and analysis in flow cytometry: bone marrow mesenchymal stem cells, breast cancer stem/progenitor cells in malignant effusions, and pericytes in disaggregated adipose tissue. // Methods Mol Biol 2011, 699:251-273.
17. Manoussaka MS, Jackson DJ, Lock RJ, Sooranna SR, Kumpel BM. Flow cytometriccharacterisation of cells of differing densities isolated from human term placentae and enrichment of villous trophoblast cells // Placenta. - 2005. - Vol.26 (4). - P. 308-318.
18. Миньженкова М.Е., Шилова Н.В., Маркова Ж.Г., Антоненко В.Г., Лебедев И.Н., Козлова Ю.О., Землякова В.В., Золотухина Т.В. Получение и применение динамических стандартных референсных интервалов для анализа результатов сравнительной геномной гибридизации // Генетика. - 2013. - Т. 49, №10. - С. 1229-1235.
19. van Wijk IJ, Griffioen S, Tjoa ML, et al. HLA-G expression in trophoblast cells circulating in maternal peripheral blood during early pregnancy. Am J Obstet Gynecol 2001; 184:991-7.
20. Lipinski M, Parks DR, Rouse RV, and Herzenberg LA. Human trophoblast cell-surface antigens defined by monoclonal antibodies. // Proc. Nati Acad. Sci. USA, 1981, Vol. 78, No. 8, pp. 5147-5150.
21. Ripani E, Sacchetti A, Corda D, Alberti S. Human Trop-2 is a tumor-associated calcium signal transducer. Int J Cancer. 1998; 76 (5):671-676.
22. Schroder J. Passage of leukocytes from mother to fetus. // Scand. J. Immunol, 1974, 3:369-373.
23. Rizzo R, Vercammen M, van de Velde H, Horn PA, Rebmann V. The importance of HLA-G expression in embryos, trophoblast cells, and embryonic stem cells. Cellular and molecular life sciences, 2011, 68 (3):341-52.
24. Лебедев И.Я., Черемных А.Д., Назаренко С.А., Светлаков А.В. Полногеномная амплификация ДНК: современные достижения и перспективы использования в преимплантационной генетической диагностике // Проблемы репродукции, 2005. - №5. - С. 60-67.
25. Kim S.H., Godfrey T., Jensen R.H. Whole genome amplification and molecular genetic analysis of DNA from paraffin-embedded prostate adenocarcinoma tumor tissue. J Urol 1999; 162: 1512-1518.
26. Zhang L., Cui X., Schmitt K. at al. Whole genome amplification from a single cell: implications for genetic analysis. PNAS 1992; 89: 5847-5851.
27. Rizzo R, Vercammen M, van de Velde H, Horn PA, Rebmann V. The importance of HLA-G expression in embryos, trophoblast cells, and embryonic stem cells. Cellular and molecular life sciences, 2011, 68 (3):341-52.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
