Дослідження використання різних поживних середовищ (DMEM, Ham-F-10, M-199, DME/Ham-F-12) для дозрівання і наступного запліднення in vitro яйцеклітин свиноматок. Шляхи підвищення повноцінності мейотичного дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок.
При низкой оригинальности работы "Вплив різних культуральних середовищ на мейотичне дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок з наступним їх заплідненням in vitro", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
При традиційних способах відтворення з всього величезного фонду яйцеклітин свиноматок (в яєчниках знаходяться десятки тисяч ооцитів) використовується лише мінімальна частина загального запасу, а переважна більшість клітин залишається в яєчниках, підлягає атрезії і у відтворенні участі не бере. Розробка і вирішення проблеми дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів, запліднення in vitro яйцеклітин та раннього ембріонального розвитку дозволить не тільки отримувати необхідну кількість зародків свиней, а й в більш повній мірі використовувати потенційний запас гамет самиць, що закладений в яєчниках. Встановити ефективність використання різних поживних середовищ для дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок. При виконанні роботи використовували біотехнологічні (дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів, запліднення in vitro яйцеклітин, культивування зигот і зародків), морфологічні (оцінка яєчників, ооцитів, яйцеклітин, сперматозоїдів та ембріонів за морфологічними показниками) і цитогенетичні (аналіз мейотичного дозрівання гамет самиць та дроблення зародків) методи досліджень. Дослідження виявили можливість дозрівання поза організмом в різних поживних середовищах ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок з наступним їх заплідненням in vitro і отриманням ембріонів.Використання поживних середовищ DMEM, Ham-F-10, M-199, DME/Ham-F-12 як базових для приготування культуральних середовищ дозволяє в умовах in vitro у гамет свиноматок відновити і завершити їх мейотичне дозрівання та отримати після запліднення in vitro і подальшого культивування зародки свиней. Культуральні середовища, виготовлені на основі поживних середовищ DMEM, Ham-F-10, M-199, DME/Ham-F-12, зумовлюють різну ефективність дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок. Рівень дозрівання гамет свиноматок до метафази-2 мейозу в середовищах М-199 (66,1%) і Ham-F-10 (60,3%) був вищим (P<0,05), а кількість клітин з хромосомними порушеннями (відповідно 14,3 і 12,1%) нижчою (P<0,001), ніж у середовищах DME/Ham-F-12 (56,2 і 23,3%) і DMEM (43,8 і 29,7%). Культивування гамет свиноматок поза організмом в середовищі М-199, поповненому клітинами гранульози в концентрації 1-3х106 клітин/мл, забезпечує більш оптимальні умови для їх дозрівання.
Вывод
1. Використання поживних середовищ DMEM, Ham-F-10, M-199, DME/Ham-F-12 як базових для приготування культуральних середовищ дозволяє в умовах in vitro у гамет свиноматок відновити і завершити їх мейотичне дозрівання та отримати після запліднення in vitro і подальшого культивування зародки свиней.
2. Культуральні середовища, виготовлені на основі поживних середовищ DMEM, Ham-F-10, M-199, DME/Ham-F-12, зумовлюють різну ефективність дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок. Рівень дозрівання гамет свиноматок до метафази-2 мейозу в середовищах М-199 (66,1%) і Ham-F-10 (60,3%) був вищим (P<0,05), а кількість клітин з хромосомними порушеннями (відповідно 14,3 і 12,1%) нижчою (P<0,001), ніж у середовищах DME/Ham-F-12 (56,2 і 23,3%) і DMEM (43,8 і 29,7%).
3. Культивування гамет свиноматок поза організмом в середовищі М-199, поповненому клітинами гранульози в концентрації 1-3х106 клітин/мл, забезпечує більш оптимальні умови для їх дозрівання.
4. Стадії метафази-2 мейозу через 42-45 годин культивування досягають 58,3-62,1% ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок. Збільшення терміну культивування не призводить до збільшення кількості дозрілих клітин.
5. Метод надрізу видимих антральних фолікулів яєчників свиноматок порівняно з методом аспірації дозволяє отримувати з яєчника більшу (P<0,001) загальну кількість ооцитів (73,1-76,4 проти 17,7-19,8) та кількість ооцит-кумулюсних комплексів придатних для культивування (33,2-36,9 проти 12,1-13,4).
6. Рівень дроблення зародків (22,2%) і їх подальшого розвитку (58,3%) після запліднення in vitro яйцеклітин свиноматок вищий (P<0,001) при використанні середовища М-199 для дозрівання гамет самиць.
7. Застосування при заплідненні in vitro змішаної сперми від різних кнурів підвищує (P<0,01) дроблення клітин на 3,8-22,5%.
ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ
1. Для вдосконалення методу дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок рекомендуємо використовувати поживні середовища M-199 і Ham-F-10 як базові культуральні середовища та додавати до них клітини гранульози в концентрації 1-3х106 клітин/мл.
2. Для підвищення запліднення яйцеклітин свиноматок рекомендуємо застосовувати змішану сперму від різних кнурів на товарних фермах та в наукових установах, що займаються питаннями біотехнології відтворення сільськогосподарських тварин.
3. Результати досліджень можуть бути використані при викладанні лекцій з біотехнології, генетики, морфології, біології розвитку та відтворення сільськогосподарських тварин у ВУЗАХ країни.
Список литературы
1. Гончарук О.П., Собко Ю.М., Гузеватий О.Є. Деякі морфологічні особливості яєчників і ооцитів свиноматок// Вісник Білоцерківського державного аграрного університету: Зб. наук. праць.- 1997.- Вип.2.-Ч.1.- С.146-149.
2. Гончарук О.П., Гузеватий О.Є. Використання різних поживних середовищ при культивуванні ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок// Вісник Білоцерківського державного аграрного університету: Зб.наук. праць.-1997.- Вип.3.- Ч.1.- С.228-231.
3. Гузеватий О., Гончарук О., Собко Ю. Динаміка дозрівання in vitro ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок// Тваринництво України.-1998.- N 1.- С.12-13.
4. Гузеватий О.Є., Гончарук О.П. Запліднення in vitro яйцеклітин свиноматок, що дозріли в різних культуральних середовищах// Вісник Білоцерківського державного аграрного університету: Зб. наук. праць.-1999.- Вип.8.- Ч.2.- С.53-57.
5. Гузеватий О.Є., Гончарук О.П. Запліднення in vitro яйцеклітин свиноматок змішаною спермою від різних кнурів //Вісник Білоцерківського державного аграрного університету: Зб. наук. праць.- 2000.- Вип.14.- С.28-31.
6. Гончарук О.П. Временные параметры мейотического созревания in vitro ооцит-кумулюсных комплексов свиноматок// Тезисы региональной конференции молодых ученых и специалистов.- Оренбург.- 1997.- Ч.2.-С.85-86.
7. Гончарук О.П., Гузеватый О.Е. Некоторые особенности культивирования in vitro ооцит-кумулюсных комплексов свиноматок// Интенсификация производства продукции животноводства в Республике Беларусь.- Жодино, 1998.- С.94.
8. Гончарук О.П. Використання клітин гранульози при культивуванні ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок //Молоді вчені - тваринництву.- К.: Аграрна наука, 2000.- С.95-97.
9. Гузеватый О.Е., Собко Ю.М., Гончарук О.П. Некоторые особености созревания и оплодотворения in vitro ооцит-кумулюсных комплексов свиноматок //Актуальные проблемы биологии в животноводстве.- Боровск, 2000.- С.393-394.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
