Вплив прогеніторних клітин ембріона щура на патофізіологічні механізми ураження нирок при ад`ювантному артриті Пірсона - Автореферат

Відомо, що одним з важких ускладнень ревматоїдного артриту є хронічний гломерулонефрит, прогресуючий характер розвитку якого закономірно призводить до загибелі нефронів, формування хронічної хвороби нирок з вислідом у хронічну ниркову недостатність (Гоженко А.І., 1987-2009, Кухарчук А.Л., 1996; Пішак О.В., 2002). Водночас вплив трансплантації стовбурових клітин на зазначені механізми розвитку і хронізації імунного запалення при ревматоїдному артриті, у тому числі нирках, залишається практично не зясованим. Серед таких варто звернути особливу увагу на зміни цитокінової регуляції імунної відповіді, протеолізу і фібринолізу, пероксидного окислення ліпідів і клітинної інфільтрації в нирках, оскільки останні при ревматоїдному артриті зазнають ураження найчастіше. Дисертація є фрагментом науково-дослідної роботи Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України “В експерименті та клініці визначити ефективність трансплантації стовбурових клітин, тканин ембріофетального і позафетального походження та тканинної терапії за Філатовим при імуно-і онкопатологічних процесах, панкрео-і колоногенних перитонітах, старінні та порушенні функції репродуктивної системи” (номер державної реєстрації 0107U01175). Зясувати механізми впливу трансплантації ембріональних прогеніторних клітин на перебіг хронічного запального процесу в нирках у щурів з експериментальним адювантним артритом Пірсона.Встановлено, що у щурів з артритом Пірсона рівень індукованого водного діурезу різко зменшується через 2 міс. спостереження, через 4 міс. зазнає підвищення відносно попереднього періоду досліду на 60 %, через 6 міс. знижується на 33 % та через 12 міс. зменшується ще на 21 % (табл. Уміст креатиніну в плазмі крові суттєво збільшується через 2 міс., через 4 міс. зменшується порівняно з показниками попереднього періоду дослідження на 21 %, проте через 6 міс. підвищується на 21 %, а через 12 міс. зростає ще на 39 %. Концентрація в сечі іонів натрію, яка різко зростає через 2 міс., через 4 міс. зменшується відносно показників попереднього періоду дослідження майже втричі, через 6 міс. знову підвищується у 2,3 разу та через 12 міс. збільшується ще на 54 %. Екскреція іонів натрію, котра також значно перевищує контроль через 2 міс. спостереження, через 4 міс. зменшується на 42 % і досягає контрольних величин, однак надалі, через 6 міс., збільшується на 60 %, а через 12 міс. набуває максимальних величин, перевищуючи показники попереднього періоду експерименту на 21 %. Концентрація в сечі іонів калію відповідає контролю через 2 міс., через 4 міс. досліду зменшується у 2,3 разу відносно такої у попередній період спостереження, через 6 міс. зростає на 84 % та через 12 міс. збільшується ще на 47 % і знову досягає контрольного рівня.Введення щурам повного адюванта Фрейнда а апоневроз правої задньої кінцівки викликає розвиток функціонально-біохімічних ознак ушкодження нирок, що виявляються через 2 місяці, дещо зменшуються через 4 та досягають максимального розвитку на 12 місяць розвитку експериментального артриту Пірсона. У щурів з експериментальним артритом в нирках пошкоджуються клубочки (гіпотрофія та некроз), що обумовлює зменшення швидкості клубочкової фільтрації одночасно із канальцями (зерниста дистрофія з некробіозом епітеліоцитів і лізосом ядер), в яких зменшується реабсорбція води та натрію. У патогенезі захворювання нирок приймають участь процеси перекисного окислення ліпідів, про що свідчить збільшення вмісту дієнових конюгатів та малонового діальдегіду, максимально через 12 місяців спостереження. У механізмах імунного пошкодження нирок важливу роль має збільшення у нирках прозапальних цитокінів (інтерлейкінів 2, 12, інтерферона ? та фактора некрозу а) і їх дисбаланс з протизапальними (інтерлейкіни 4, 6, 10 та фактор трансформуючого росту).

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

У дисертації представлені теоретичне узагальнення і нове рішення наукової задачі - обґрунтування ефективності трансплантації ембріональних прогеніторних клітин при експериментальному адювантному артриті на основі зясування впливу ембріональних прогеніторних клтин на основні патогенетичні механізми ураження нирок.

1. Введення щурам повного адюванта Фрейнда а апоневроз правої задньої кінцівки викликає розвиток функціонально-біохімічних ознак ушкодження нирок, що виявляються через 2 місяці, дещо зменшуються через 4 та досягають максимального розвитку на 12 місяць розвитку експериментального артриту Пірсона.

2. У щурів з експериментальним артритом в нирках пошкоджуються клубочки (гіпотрофія та некроз), що обумовлює зменшення швидкості клубочкової фільтрації одночасно із канальцями (зерниста дистрофія з некробіозом епітеліоцитів і лізосом ядер), в яких зменшується реабсорбція води та натрію. Зростання протеїнурії (загальної та стандартизованої) підтверджує пошкодження клубочків і канальців.

3. Пошкодження нирок призводить до порушення екскреторної функції з розвитком ретенційної азотемії та здатності регулювати іонний гомеостаз, що виявляється у гіпонатріємії та гіпокаліємії.

4. Важливими механізмами ушкодження нирок при експериментальному артриті є активація протеолізу низько- та високомолекулярних білків та неферментативного фібринолізу в тканині нирок через 2 і особливо 6, 12 місяців розвитку захворювання.

5. У патогенезі захворювання нирок приймають участь процеси перекисного окислення ліпідів, про що свідчить збільшення вмісту дієнових конюгатів та малонового діальдегіду, максимально через 12 місяців спостереження.

6. У механізмах імунного пошкодження нирок важливу роль має збільшення у нирках прозапальних цитокінів (інтерлейкінів 2, 12, інтерферона ? та фактора некрозу а) і їх дисбаланс з протизапальними (інтерлейкіни 4, 6, 10 та фактор трансформуючого росту).

7. Введення щурам з експериментальним артритом Пірсона ембріональних прогеніраторних клітин нормалізує функціональний стан нирок із відновленням швидкості клубочкової фільтрації та канальцевого транспорту води і натрію, нормалізацією екскреторної та іонорегулюючої функції.

8. Ембріональні прогеніторні клітини у щурів з експериментальним артритом в нирках нормалізують протеоліз низько- і високомолекулярних білків, колагеноліз, фібриноліз та пероксидне окислення ліпідів. Одночасно зменшується вміст вивчених прозапальних цитокінів та їх дисбаланс з протизапальними, відновлюється гістологічна структура нирок.

9. Результати дослідження є експериментальним патогенетичним обґрунтуванням використання ембріональних прогеніраторних клітин у терапії гломерулонефриту при експериментальному артриті Пірсона.

1. Кухарчук О. Л. Ембріональні плюрипотентні прогеніторні клітини, молекули МНС, апоптоз та імунологічна толерантність / О. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сірман // Трансплантологія. - 2003. - Т. 4, № 1. - С. 221-223. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

2. Кухарчук О. Л. Вплив алотрансплантації ембріональних плюрипотентних прогеніторних клітин на інтенсивність ліпопероксидації та протеолізу в суглобах щурів з адювантним артритом Пірсона / О. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сірман // Укр. ревматол. журн. - 2003. - № 2 (12). - С. 45-49. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

3. Сірман В. М. Вплив алотрансплантації ембріональних плюрипотентних прогеніторних клітин на іонорегулювальну функцію нирок у щурів з адювантним артритом Пірсона / В. М. Сірман, О. Л. Кухарчук // Вісн. наук. досл. - 2003. - № 4. - С. 90-93. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

4. Сірман В. М. Характеристика змін функціонального стану нирок у динаміці експериментального адювантного артриту Пірсона / В. М. Сірман, О. Л. Кухарчук // Бук. мед. вісник. - 2004. - Т. 8, № 4. - С. 109-115. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

5. Сірман В. М. Вплив алотрансплантації ембріональних плюрипотентних прогеніторних клітин на інтенсивність фібринолізу в суглобах щурів з адювантним артритом Пірсона / В. М. Сірман, О. Л. Кухарчук // Медицина сегодня и завтра. - 2004. - № 1. - С. 72-78. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

6. Кухарчук О. Л. Вплив тканинної терапії на нестимульовану генерацію IL-4, IL-6, IL10, IL2,INF-?, TNF-?, IL-1?, IL-12, IL-1RA, Rantes лімфоцитами щурів з адювантним артритом Пірсона / О. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сірман // Клін. та експерим. патологія. - 2004. - Т. ІІІ, № 2 (ч. 2). - С. 371-372. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

7. Кухарчук А. Л. Регенеративная медицина: направления, достижения, проблемы и перспективы развития. Часть І: Принципы и методы / А. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Укр. мед. часопис. - 2004. - № 2 (40). - С. 70-79. (Здобувач провів аналіз літературних джерел, підготував матеріал до публікації).

8. Кухарчук А. Л. Регенеративная медицина: направления, достижения, проблемы и перспективы развития. Часть ІІ: Стволовые пространства / А. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Укр. мед. часопис. - 2004. - № 3(41). - С. 99-107. (Здобувач провів аналіз літературних джерел, підготував матеріал до публікації).

9. Пат. 72310 Україна, МПК7 A 12 K 38/18, G 12 N 5/06. Спосіб переінсталяції системи контролю антигенного гомеостазу організму ссавця за Кухарчуком-Радченком-Сірманом / Кухарчук О. Л., Радченко В. В., Сірман В. М. ; заявник і патентовласник ТОВ “КРС-медичні технології”. - № 20022097178 ; заявл. 03.09.02 ; опубл. 15.02.05, Бюл. № 2. (Здобувачу належить участь у проведенні патентного пошуку, розробці способу, аналізі результатів дослідження, оформленні заявки).

10. Пат. 72584 Україна, МПК7 A 61 K 38/18, G 12 N 5/06. Спосіб попередження відторгнення ало- та ксенотрансплантатів шкіри / Сірман В. М., Кухарчук О. Л., Радченко В. В. ; заявник і патентовласник ТОВ “КРС-медичні технології”. - № 20022097352 ; заявл. 10.09.02 ; опубл. 15.03.05, Бюл. № 3. (Здобувачу належить участь у проведенні патентного пошуку, розробці способу, аналізі результатів дослідження, оформленні заявки).

11. Пат. 72796 Україна, МПК7 С 12 N 5/06. Спосіб отримання життєздатних ембріональних плюрипотентних клітин за допомогою колагенази / Сірман В. М., Кухарчук О. Л., Радченко В. В. ; заявник і патентовласник ТОВ “КРС-медичні технології”. - № 20022097445 ; заявл. 13.09.02 ; опубл. 15.04.05, Бюл. № 4. (Здобувачу належить участь у проведенні патентного пошуку, розробці способу, аналізі результатів дослідження, оформленні заявки).

12. Кухарчук А. Л. Эмбриональные плюрипотентные прогениторные клетки, иммунологическая толерантность, аутоиммунные заболевания и старенне организма / А. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Трансплантологія. - 2003. - Т. 4, № 1. - С. 225-228. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

13. Сірман В. М. Вплив алотрансплантації ембріональних плюрипотентних прогеніторних клітин на пероксидне окислення ліпідів та інтенсивність тканинного фібринолізу в суглобах щурів з адювантним артритом Пірсона / В. М. Сірман // Медицина третього тисячоліття : Перший Міжн. Конгрес-круїз, 10-14 жовтня 2003 р. - Одеса-К., 2003. - С. 190-192.

14. Кухарчук О. Л. Переінсталяція системи контролю антигенного гомеостазу організму з точки зору імунологічної теорії старіння / О. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сірман // Україна наукова’ 2003 : наук.-практ. конф., 16-20 червня 2003 р. : матеріали конф. - Дніпропетровськ-Харків, 2003. - Т. 13 (Біологія). - С. 41-43 (Здобувач аналіз і узагальнення літературних даних та результатів дослідження, підготував матеріали до публікації).

15. Kukharchuk A. Influence of Pluripotenr Progenetion Embrionik Cells on the Transplent Against the Host Reaction by Bone Marrow Xenotransplantation in the Experiment. Cells, Embrio, Nobe Marrov, Transplantation, Proteolisis / O. Kukharchuk, V. Radchenko, V. Sirman // Xenotransplantation : Includes Abstracts of the VII Congr. of the IXA, Glascow, UK, 30 sept.-4 oktob. 2003. - 2003. - Vol. 10, № 5. - P. 525. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

16. Кухарчук А. Л. Старение, стволовые пространства и иммунная система / А. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Intern. J. on Immunorehabil. / Физиология иммунной системы : І Всерос. конф., 11-14 октября 2003 г. - 2003. - Т. 5, № 2. - С. 9. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

17. Кухарчук О. Л. Вплив алотрансплантації ембріональних плюрипотентних прогеніторних клітин на інтенсивність тканинного фібринолізу у внутрішніх органах щурів з адювантним артритом Пірсона / О. Л. Кухарчук, В. М. Сірман // Динаміка наукових досліджень "2003 : ІІ Міжнар. наук.-практ. конф., 20-27 жовтня 2003 р. : матеріали конф. - Дніпропетровськ-Луганськ-Чернівці. - 2003. - Т. 15 (Медицина). - С. 63-65. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).

18. Оптимизация методики получения суспензии плюрипотентных прогениторных эмбриональных клеток / Н. В. Винарская, А. Л. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Динаміка наукових досліджень ’2004 : ІІІ Міжнар. наук-практ. конф., 21-30 червня 2004 р. : матеріали конф. - Дніпропетровськ : Наука і освіта, 2004. - Т. 58 (Клінічна медицина). - С. 5-7. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів).

19. Kukharchuk O. L. Intravenous administration of embryonic pluripotent progenitor cells, prior incubated with cells of transplanted organs, facilitates allografts engrafts engraftment in rats / O. L. Kukharchuk, V. V. Radchenko, V. M. Sirman // The 3RD Intern. Congr. on Immunosupres, December, 8-11, 2004 : scientific program abstracts. - San Diego, Califirnia, 2005. - P. 187 (Здобувач провів дослідження, підготував матеріали до публікації).

20. Kukharchuk O. Embrionic pluripotent progenitor cells (eppc) induce the central immunological tolerance in rats and mice / O. Kukharchuk, V. Radchenko, V. Sirman // The Intern. J. of Artificial Organs. - 2005. - № 4. - P. 316. (Здобувач провів дослідження, підготував матеріали до публікації).

21. Кухарчук О. Л. Вплив тканинної терапії за Філатовим на локальне імунне запалення у щурів з ревматоїдним артритом / О. Л. Кухарчук., В. М. Сірман, А. О. Кухарчук // Бюлетень VIII читань ім. В. В. Підвисоцького, 28-29 травня 2009 р. : матеріали. конф. - Одеса, 2009. - С. 227. (Здобувач провів дослідження, аналіз і узагальнення результатів, підготував матеріали до публікації).