Визначення ферментів, завдяки продукції яких клітини РС-12 гідролізують фібриновий згусток і фрагменти фібрину. Характеристика впливу продуктів деградації фібрину на швидкість проліферації, виживання, адгезію і напрямок диференціювання клітин РС-12.
Під дією прокоагулянтних факторів, що вийшли з кровообігу або асоційовані з клітинами, фібриноген перетворюється в позасудинний фібрин. Таким чином, взаємодія нервових клітин і фібринового матриксу є важливою темою досліджень, проте молекулярні механізми впливу фібрину і продуктів його деградації на нервові клітини вивчені мало. Однією з визнаних моделей є лінія РС-12, яка походить з хромафінних клітин наднирників щура і може диференціюватися в культурі в клітини, подібні до симпатичних нейронів (Greene and Tischler, 1976). Завданням нашої роботи було дослідити взаємодію і взаємний вплив цих клітин і фібрину. Предмет дослідження: вплив фібрину і продуктів його деградації на базові життєві функції клітин РС-12; рецептори, що опосередковують цей вплив.В дисертаційній роботі теоретично обґрунтовано та експериментально вирішено актуальне наукове завдання - зясування впливу фібрину та продуктів його деградації на клітини лінії РС-12, що є визнаною моделлю нервових клітин. В результаті виконання дисертаційної роботи встановлено, що клітини лінії РС-12 сприяють деградації фібринового згустку в культурі шляхом конститутивної секреції тканинного активатора плазміногену. Продукти деградації фібринового згустку впливають на показники життєдіяльності клітин РС-12: сприяють виживанню за несприятливих умов, підвищують рівень ?3-і ?5-субодиниць нікотинового ацетилхолінового рецептору, збільшують адгезію до підложки. Розчинні високомолекулярні фрагменти фібрину (М.в.>30 КДА), в тому числі очищені D, DD, E фрагменти, сприяють виживанню клітин РС-12, посилюють їх адгезивні властивості, проте гальмують їх проліферацію. D, DD і Е фрагменти фібрин(оген)у впливають на клітини РС-12 через ?v?3 інтегрини.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вывод
1. Незважаючи на інтенсивне дослідження впливу фібринового матриксу на клітини різного походження, молекулярні основи його взаємодії з нервовими клітинами залишаються мало вивченими. Накопичення позасудинного фібрину повязують з загостренням перебігу ряду хвороб нервової системи, проте в нейрохірургічних розробках набувають застосування клеї та біоконструкти на основі фібрину. В дисертаційній роботі теоретично обґрунтовано та експериментально вирішено актуальне наукове завдання - зясування впливу фібрину та продуктів його деградації на клітини лінії РС-12, що є визнаною моделлю нервових клітин.
2. В результаті виконання дисертаційної роботи встановлено, що клітини лінії РС-12 сприяють деградації фібринового згустку в культурі шляхом конститутивної секреції тканинного активатора плазміногену. При цьому утворюються високо- і низькомолекулярні фрагменти фібрину, характерні для плазмінового гідролізу.
3. Продукти деградації фібринового згустку впливають на показники життєдіяльності клітин РС-12: сприяють виживанню за несприятливих умов, підвищують рівень ?3- і ?5-субодиниць нікотинового ацетилхолінового рецептору, збільшують адгезію до підложки.
4. Низькомолекулярні фрагменти фібрину (М.в. 10 - 30 КДА) стимулюють проліферацію та виживання клітин, подовження їх нейритів і підвищення рівня ?3- і ?5- субодиниць нікотинового ацетилхолінового рецептору .
5. Розчинні високомолекулярні фрагменти фібрину (М.в.>30 КДА), в тому числі очищені D, DD, E фрагменти, сприяють виживанню клітин РС-12, посилюють їх адгезивні властивості, проте гальмують їх проліферацію.
6. Іммобілізовані D, DD і Е фрагменти фібрину сприяють проліферації клітин РС-12.
7. D, DD і Е фрагменти фібрин(оген)у впливають на клітини РС-12 через ?v?3 інтегрини. Взаємодія з D і DD фрагментами відбувається по RGD-залежному сайту (190-202 і 346-358) в ?-ланцюгу, а з Е фрагментом - через невідомий RGD-залежний сайт.
8. Виявлений характер взаємодій фрагментів фібрину і клітин РС-12 дозволяє пояснити позитивний вплив продуктів деградації фібрину на відновлення нервових клітин.
ПЕРЕЛІК НАУКОВИХ ПРАЦЬ, ОПУБЛІКОВАНИХ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ
1. Петрова Ю.І. Клітини РС-12 гідролізують фібриновий згусток шляхом продукції плазміногену та його тканинного активатора / Ю.І. Петрова, О.М. Савчук, О.М. Калашник, Т.М. Платонова, М.В. Скок, С. Седерхольм-Вільямс // Укр. біохім. журн. - 2004. - 76, № 2. - С.64-68.
2. Калашник О.М. Роль продуктів деградації фібринового згустка в регуляції життєвих функцій клітин лінії РС-12 / О.М. Калашник, Ю.І. Петрова, Т.М. Платонова, М.В. Скок, С. Седерхольм-Вільямс // Укр. біохім. журн. - 2005. - 77, № 5. - С. 37-44.
3. Чорна Н.Ю. Рецептори до фрагментів фібрину на нейроендокринних клітинах РС-12 / Н.Ю.Чорна, Ю.І. Петрова, О.М.Калашник, Т.М.Платонова, С. Седерхольм-Вільямс, М.В. Скок. // Біополімери і клітина. - 2008. - 24, № 4. - С. 294-299.
4. Петрова Ю.И. Влияние IL-6 и продуктов деградации фибринового сгустка на дифференцировку клеток РС-12 / Ю.И. Петрова, Е.Н. Калашник, М.В. Скок // IV научная конференция «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2000», Санкт-Петербург, 23-25 мая 2000 р. : Медицинская иммунология. - т.2, № 2. - 2000. - С. 134-135.
5. Petrova J.I. The effect of IL-6 and fibrin clot degradation products on PC-12 cell differentiation, proliferation and adhesion / J.I. Petrova, E.N. Kalashnik and M.V.Skok // 5th John Humphrey Advanced Summer Programmer and Lecture Series in Immunology “Immunology in Health and Disease”, September 15-21, 2000.: Abstract Book. - Pushchino, 2000. - P. 72.
6. Petrova J.I. The effect of fibrin clot and the products of its degradation on proliferation, adhesion and differentiation of PC-12 cells / J.I. Petrova, E.N. Kalashnik, N.E. Chorna, T.N. Platonova, M.V. Skok, S. Cederholm-Williams // Advances in molecular mechanisms of neurological disorders: ESN Conf., Perugia, (Italy), May 22-25, 2001. : J. Neurochem. - 2001. - 77, Suppl. 1. - P.51.
7. Petrova Y. The Effect of Fibrin Degradation Products on Neuroendocrine Cells / Petrova Y., Kalashnik O., Chorna N., Platonova T., Cederholm-Williams S. and Skok M // XXTH International Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis, Sydney, (Australia), August 6-12, 2005. : J. Thromb. Hemost. - V. 3, Suppl. 1. - 2005. - P. 1976.
8. Калашник О.М. Вплив продуктів деградації фібрину на життєві показники клітин РС-12 / О.М. Калашник // Актуальні проблеми біохімії та біотехнології-2005 : конф.-конк. молодих учених, 3-4 червня 2005. : Укр. біохім. журн. - 2005. - 77, № 5. - С.140.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
