Вплив пептидного комплексу тимуса – тималіну та природного пептидного комплексу нирок на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові за фізіологічних умов та модуляції активності їх внутрішньоклітинних регуляторних систем - Автореферат

У підтримці кількісного гомеостазу тканин, що постійно оновлюються (регенерують), поряд із процесами проліферації й диференціювання велику роль відіграє природна, програмована загибель клітин, що отримала назву апоптоз [Kerr et all., 1972; Afford S. et all., 2000; Дьяченко А.А., Дьяченко А.Г., 2001]. Як показали результати багатьох досліджень, апоптоз має велике значення в процесах, що забезпечують нормальний розвиток та функціонування клітин імунної системи, а порушення процесів клітинної загибелі може приводити до виникнення патологічних станів і захворювань, що супроводжуються дегенеративними та проліферативними змінами. Вивчити вплив комплексу пептидів тимуса - тималіну та природного пептидного комплексу нирок на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові за фізіологічних умов. Вивчити вплив комплексу пептидів тимуса - тималіну та природного пептидного комплексу нирок на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові за умов модулювання активності кальцієвої регуляторної системи. Вивчити вплив комплексу пептидів тимуса - тималіну та природного пептидного комплексу нирок на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові при активації протеїнкінази С, накопичення в клітинах ЦАМФ.Для дослідження впливу комплексу пептидів тимуса - тималіну (Россия, Санкт-Петербург, ЗМП) та природного пептидного комплексу нирок на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові за фізіологічних умов тварин було розділено на такі групи: 1 група - інтактна; 2 - контрольна (тваринам внутрішньомязово вводили 0,05 мл стерильного фізіологічного розчину натрію хлориду); 3 та 4 групи - дослідні (тваринам внутрішньомязово вводили 0,1 мг/кг тималіну та 0,1 мг/кг ППКН відповідно протягом 5 днів). 2 Вплив тималіну і ППКН за умов звязування позаклітинного кальцію при дії ЕДТА Контрольні клітини (інкубація 24 години) (n=6) Клітини, оброблені ЕДТА (n=6) Клітини, оброблені тималіном (n=6) Клітини, оброблені ППКН (n=6) Клітини, оброблені ЕДТА та тималіном (n=6) Клітини, оброблені ЕДТА та ППКН (n=6) 2,5 x 10-2 M ЕДТА 0,12 мкг/мл тималін 0,12 мкг/мл ППКН 2,5 x 10-2 M ЕДТА; 0,12 мкг/мл тималін; 2,5 x 10-2 M ЕДТА; 0,12 мкг/мл ППКН 3 Вплив тималіну і ППКН за умов дії кальцієвого іонофору А 23187 Контрольні клітини (інкубація 24 години) (n=6) Клітини, оброблені іонофором (n=6) Клітини, оброблені тималіном (n=6) Клітини, оброблені ППКН (n=6) Клітини, оброблені іонофором та тималіном (n=6) Клітини, оброблені іонофором та ППКН (n=6) 2х10-7 М іонофор 0,12 мкг/мл тималін 0,12 мкг/мл ППКН 2х10-7 М іонофор; 0,12 мкг/мл тималін 2х10-7 М іонофор; 0,12 мкг/мл ППКН 5 Вплив тималіну і ППКН за умов накопичення в клітинах ЦАМФ при дії теофіліну Контрольні клітини (інкубація 24 години) (n=6) Клітини, оброблені теофіліном (n=6) Клітини, оброблені тималіном (n=6) Клітини, оброблені ППКН (n=6) Клітини, оброблені теофіліном та тималіном (n=6) Клітини, оброблені теофіліном та ППКН (n=6) 10-3 М теофілін 0,12 мкг/мл тималін 0,12 мкг/мл ППКН 10-3 М теофілін; 0,12 мкг/мл тималін 10-3 М теофілін; 0,12 мкг/мл ППКН 6 Вплив тималіну і ППКН за умов дії дексаметазону Контрольні клітини (інкубація 24 години) (n=6) Клітини, оброблені дексаметазоном (n=6) Клітини, оброблені тималіном (n=6) Клітини, оброблені ППКН (n=6) Клітини, оброблені дексаметазоном та тималіном (n=6) Клітини, оброблені дексаметазоном та ППКН (n=6) 10-7М дексаметазон 0,12 мкг/мл тималін 0,12 мкг/мл ППКН 10-7М дексаметазон; 0,12 мкг/мл тималін 10-7М дексаметазон; 0,12 мкг/мл ППКНПептидні комплекси тималін та природний пептидний комплекс нирок виявляють модулюючий вплив на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові: проявляють антиапоптотичні властивості при активації процесів апоптозу та проапоптотичні - при їх гальмуванні. Комплексне вивчення процесів апоптозу з використанням індукторів та інгібіторів апоптозу, застосуванням морфологічних, імуноцитохімічних, молекулярно-біологічних методів дозволяє провести аналіз процесів апоптозу з урахуванням стадій його розвитку: від рецепції до внутрішньоклітинних змін. Пептидний комплекс тимуса - тималін і ППКН за фізіологічних умов діють на лімфоцити периферійної крові як активуючий сигнал, при цьому підвищується готовність клітин до апоптозу, але внаслідок підсилення експресії Bcl-2 та зростання показника стійкості лімфоцитів периферійної крові до апоптозу, апоптотичні процеси не отримують подальшого розвитку.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Пептидні комплекси тималін та природний пептидний комплекс нирок виявляють модулюючий вплив на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові: проявляють антиапоптотичні властивості при активації процесів апоптозу та проапоптотичні - при їх гальмуванні.

Комплексне вивчення процесів апоптозу з використанням індукторів та інгібіторів апоптозу, застосуванням морфологічних, імуноцитохімічних, молекулярно-біологічних методів дозволяє провести аналіз процесів апоптозу з урахуванням стадій його розвитку: від рецепції до внутрішньоклітинних змін.

За фізіологічних умов у лімфоцитах периферійної крові контроль блокади та активації апоптозу знаходяться в динамічній рівновазі, про що свідчить майже однаковий рівень експресії Р53 і Bcl-2 та наявність клітин з експресією CD 95 і фрагментацією хроматину.

Пептидний комплекс тимуса - тималін і ППКН за фізіологічних умов діють на лімфоцити периферійної крові як активуючий сигнал, при цьому підвищується готовність клітин до апоптозу, але внаслідок підсилення експресії Bcl-2 та зростання показника стійкості лімфоцитів периферійної крові до апоптозу, апоптотичні процеси не отримують подальшого розвитку.

Тималін і ППКН в умовах перерозподілу внутрішньоклітинного кальцію під дією іонофору та кальцій-хелатуючих речовин виявляють регуляторний вплив: гальмують подальший розвиток процесів апоптозу лімфоцитів периферійної крові за рахунок активації антиапоптотичного фактора Bcl-2

Тималін і ППКН запобігають розвитку дексаметазон-індукованого апоптозу лімфоцитів периферійної крові шляхом підвищення активності Bcl-2 та вірогідного зниження експресії Р53.

Тималін і ППКН ефективно перешкоджають розвитку каскаду апоптотичних реакцій лімфоцитів периферійної крові, викликаних активацією протеїнкінази С, шляхом зниження рівня експресії CD 95 у 3 рази.

Тималін та ППКН в умовах накопичення в клітині ЦАМФ пригнічують процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові за рахунок активації Bcl-2.

Пептидний комплекс тимуса - тималін і ППКН проявляють регуляторну дію на процеси апоптозу активованих фітогемаглютиніном лімфоцитів периферійної крові за фізіологічних умов та дії апоптоз-стимулюючих чинників, запобігаючи його розвитку шляхом підвищення експресії Bcl-2.

Пептидний комплекс тимуса - тималін та ППКН вірогідно підсилюють процеси елімінації трансформованих Т-клітин шляхом активації в них процесів апоптозу, але не впливають на процеси апоптозу трансформованих В - клітин, такі пептиди здатні звязуватися з молекулами ГКГС-I класу, що можуть брати участь в реалізації їх дії.

1.Ножинова О.А., Весніна Л.Е., Губенко І.Я., Беркало Л.В., Кайдашев І.П. Дія пептидного комплексу тимусу - тималіну на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові в умовах звязування позаклітинного кальцію//Проблеми екології та медицини.-1999.-Т.3.,N.6.-С.51-53.

2.Ножинова О.А., Веснина Л.Э., Кайдашев И.П. Влияние пептидного комплекса тимуса на процессы апоптоза лимфоцитов периферической крови в условиях активации протеинкиназы С //Проблеми екології та медицини.-2000.-Т.4.,N.1.-С.26-29.

3.Ножинова О.А., Рябенко В.В., Губенко І.Я., Кайдашев І.П. Вплив пептидних комплексів нирок та тимуса (тималіна) на процеси апоптозу лімфоцитів периферійної крові//Імунологія та алергологія.-2000.-N.1.-С.63-66.

4. Кайдашев И.П., Ножинова О.А. Роль молекул MHC I класса на опухолевых Т-клетках в передаче пептидного сигнала// Імунологія та алергологія.-2002.-№2.-С.22-25

5. Ножинова О.А., Рябенко В.В., Кайдашев И.П. Влияние пептидных комплексов, выделенных из почек и тимуса, на апоптоз, инициированный дексаметазоном, в тимоцитах и лимфоцитах периферической крови// Экспериментальная онкология.-2002.-Т.24,№1.-С.69-71.

6.Ножинова О.А., Рябенко В.В. Вплив тканинних пептидів на активаційно-індукований апоптоз лімфоцитів периферійної крові//Материалы научно-практической конф.""Лекарства-человеку"".- Т.XV,№1-2.-Харьков.- 2001.- С.385-390.

7.Kaidashev I., Nozhinova O., Ryabenko V.,Vesnina L. The role of MHC peptides in the regulation of lymphocyte apoptosis //European journal of allergy and clinical immunology. XIXTHE Congress of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology: Abstract Book. Lisbon, Portugal. July 1-5 2000.-Vol.55 suppl.63.-P.72.

8.Кайдашев И.П., Боброва Н.А., Веснина Л.Э., Гейко О.А., Ножинова О.А., Рябенко В.В. Роль тканевых пептидов, экстрагированных из молекул главного комплекса гистосовместимости, в регуляции экспрессии поверхностных рецепторов и процессов апоптоза тимоцитов и лимфоцитов периферической крови //Аллергология и иммунология .Материалы III съезда иммунологов и аллергологов.- 16-20 сентября Сочи, Россия.- 2000.-Т.1,№.2.-С.119.

9.Возможность использования тканевых пептидов в терапии иммунопатологий, вызванных нарушением апоптоза иммуноцитов/Кайдашев И.П., Баштовенко О.А., Гейко О.А., Рябенко В.В., Ножинова О.А. и др.//Матер. IV съезда имммунологов и аллергологов СНГ 12-14 сентября Москва, Россия.- 2001.-Т.,№2.-С.16.

10. Kaidashev I.P., Noginova O.A., Ryabenko V.V.Peptides bound to MHC class I molecules induce signal transduction by these molecules// AAAAI 58th Annual Meeting. New York, USA, 2002/Allergy and Clinical Immunology.-2002.-Vol.109, №1.-P.355.

11. Влияние пептидных комплексов тимуса, почек и поджелудочной железы на процессы апоптоза лимфоидных клеток/ Ножинова О.А., Кайдашев И.П., Рябенко В.В., Беркало Л.В., Куценко Л.А. и др. // VI звітно-виборна та науково-практична конференція Українського товариства фахівців з імунології, алергології та імунореабілітації: Тези доповідей. Київ, 2002/Імунологія та алергологія.-2002.-№2.-С.76.

12. Noshinova O., Kaidashev I., Ryabenko V The influence of the drug preparations from methylxanthine group on processes of apoptosis of T-lymphocytes//“Allergy Asthma Clinical Immunology” 4th Central and Eastern European Conference. Lodz, Poland, 2002/Allergy Asthma Immunology.-2002.-Vol.7.suppl.2.-P.179

13. Рябенко В.В., Ножинова О.А., Капустянський Д.В Вплив регуляторних пептидів на процеси апоптозу клітин імунної системи// IV Міжнародний конгрес студентів і молодих вчених (матеріали конгресу). Тернопіль, 2000 - С.333.

14. Кайдашев І.П., Ножинова О.А., Рябенко В.В. Спосіб корекції функціонального стану лімфоцитів периферійної крові. Деклараційний патент України № 48797 А, 7 А61К38/00, заяв.14.12.01, опубл.15.08.02. Бюл.№8.