Вплив низьких температур на деякі біофізичні та біохімічні характеристики фолікулярної рідини яєчника людини - Автореферат

Захист відбудеться „__20_”_лютого__2007 року о 13-30_ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 64.242.01 в Інституті проблем кріобіології і кріомедицини НАН України за адресою: 61015, м. Отримані в роботі дані дозволяють зробити висновок, що розмір фолікулів, з яких виділяється фолікулярна рідина, достовірно впливає на її склад. Стан прооксидантно-антиоксидантного балансу фолікулярної рідини людини після швидкого заморожування і довгострокового зберігання (впродовж 12 місяців) при температурі-196ОС, а також при подальшому гіпотермічному зберіганні деконсервованих зразків протягом 12 годин при температурі ЧОС істотно не змінюється. Деконсервована фолікулярна рідина в концентрації 10%, яка була введена до складу середовища для інкубації сперміїв при використанні методу "спливання", достовірно підвищує кінетичні властивості сперміїв людини при астенозооспермії. Методом гель-хроматографии установлено, что фолликулярная жидкость из малых фолликулов содержит несколько больше белковых фракций с молекулярной масой выше 120 КД и меньшее количество низкомолекулярных белков и пептидов с молекулярной масой менее 10 КД, по сравнению с ФЖ, выделенной из больших фолликулов.Використовували два режими заморожування: швидке охолодження зі швидкістю 300-400°С/хв, яке здійснювалося шляхом безпосереднього занурення зразків у рідкий азот, і двохетапне охолодження, при якому зразки витримували в парах рідкого азоту протягом 20 хв на відстані 15 см над дзеркалом азоту, а потім занурювали в рідкий азот. Стан прооксидантно-антиоксидантного балансу ФР людини визначали за вмістом гідроперекису ліпідів методом Асакава в середовищі, що містить 0,2 М гліцинового буферу (РН 3,6?; 0,3 ММ FECL3; 0,3 ММ іонолу). Глутатіонпероксидазну активність реєстрували при температурі 37°С за допомогою двопроменевого спектрофотометра Specord UV VIS на довжині хвилі 340 нм у середовищі, що містить 50 ММ калій-натрій фосфатного буфера (РН 7,4), 1ММ ЕДТА, 0,15ММ NADPH, 1ММ GSH, 0,5 Е./мл дріжджової глутатіонредуктази, 0,4ММ Н2О2 або 1,2 ММ гідроперекису кумолу. Глутатіон-s-трансферазну активність у ФР людини визначали спектрофотометрично за утворенням продукту кон?югації у середовищі, що містить 0,1 М калій-фосфатного буферу (РН 6,5), 5ММ GSH, 1 ММ ХДНБ, на довжині хвилі 340 нм. Розділення білків за молекулярною масою у 36 зразках ФР, які було отримано з великих і малих фолікулів до і після низькотемпературного консервування, здійснювали методом гель-хроматографії на колонці з сефадексом G-200 (висота колонки 22 см, діаметр 2 см).В дисертаційній роботі представлено теоретичне і експериментальне узагальнення наукової проблеми, спрямованої на вивчення біофізичних, і біохімічних властивостей, а також біологічної активності фолікулярної рідини яєчника людини, виділеної з фолікулів різного розміру при екстракорпоральному заплідненні до та після заморожування-відігрівання. Швидке заморожування-відігрівання фолікулярної рідини людини та її зберігання протягом одного року при температурі-196ОС статистично достовірно не впливають на вміст стероїдних гормонів у ній і не змінюють її гормональний склад. Встановлено, що стан прооксидантно-антиоксидантного балансу фолікулярної рідини людини після швидкого заморожування та довгострокового зберігання (12 місяців) при температурі-196ОС, а також при подальшому гіпотермічному зберіганні деконсервованих зразків протягом 12 годин при температурі ЧОС істотно не змінюється.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

В дисертаційній роботі представлено теоретичне і експериментальне узагальнення наукової проблеми, спрямованої на вивчення біофізичних, і біохімічних властивостей, а також біологічної активності фолікулярної рідини яєчника людини, виділеної з фолікулів різного розміру при екстракорпоральному заплідненні до та після заморожування-відігрівання. Перспектива застосування біологічно активної фолікулярної рідини в експериментальних та клінічних дослідженнях визначила необхідність оптимізації метода її кріоконсервування.

1. На основі отриманих даних розроблено технологічно простий, ефективний спосіб кріоконсервування фолікулярної рідини яєчника людини.

2. Швидке заморожування-відігрівання фолікулярної рідини людини та її зберігання протягом одного року при температурі -196ОС статистично достовірно не впливають на вміст стероїдних гормонів у ній і не змінюють її гормональний склад.

3. Встановлено, що стан прооксидантно-антиоксидантного балансу фолікулярної рідини людини після швидкого заморожування та довгострокового зберігання (12 місяців) при температурі -196ОС, а також при подальшому гіпотермічному зберіганні деконсервованих зразків протягом 12 годин при температурі ЧОС істотно не змінюється.

4. Показано, що розмір фолікулів, з яких виділяється фолікулярна рідина, достовірно впливає на вміст білків та деяких гормонів і цитокінів в цій рідині.

5. Густина, РН і осмотичний тиск фолікулярної рідини людини після її заморожування-відігрівання при температурі -196ОС статистично достовірно не змінюються, тоді як динамічна вязкість кріоконсервованої ФР збільшується приблизно на 40%.

6. Деконсервована ФР у концентрації 10% додана до складу середовища для інкубації сперміїв при використанні методу "спливання" достовірно підвищує кінетичні властивості спреміїв людини на 10-40%, залежно від нормо- або патоспермії та підвищує ефективність інсемінації при штучному заплідненні.

7. Розморожена фолікулярна рідина у складі середовища культивування сприяє виживанню ембріональних фібробластів, клітин кумулюсу і гранульози in vitro.

1. Яковлева О.О., Геродес Г.Г. Вплив низькотемпературного зберігання на стабільність вмісту стероїдних гормонів у фолікулярній рідині яєчника людини // Проблеми кріобіології. - 2004. - №1. ? С.83-89.

2. Яковлева О.О., Юрченко Г.Г., Крамар М.Й., Геродес Г.Г. Вплив кріоконсервованої фолікулярної рідини яєчника людини на кінетичну активність сперміїв // Проблеми кріобіології. - 2004. - №4.- С.51-56.

3. Грищенко В.І., Яковлева ОО., Петренко О.Ю., Никітченко Ю.В. Стан вільнорадикального окислення фолікулярної рідини яєчника людини після довготривалого кріоконсервування // Міжнародний медичний журнал. -2005.- №1.- Т. 11.-С. 86-91.

4. Пат. №11355 Україна, МПК А61К35/52. Спосіб виділення рухливої фракції сперміїв з еякуляту людини / В.І. Грищенко, О.О. Яковлева, Н.Н. Чуб, М.Й. Крамар (ІПКІК НАН України). №200506396; Заявл. 29.06.2005; Опубліковано 15.12.2005.- Бюл. №12.

5. Яковлева О.О. Вивчення деяких біофізичних параметрів фолікулярної рідини яєчника людини до і після дії низьких температур // Проблеми кріобіології. -2005.- Т. №15.- №3.- С. 473.

Размещено на .ru