Вплив кверцетину (корвітину) на функціональну активність нейтрофілів та ендотеліоцитів за умов хронічної гіперімунокомплексемії - Автореферат

Гіперімунокомплексний синдром (ХГІС) супроводжує в клінічній практиці такі захворювання як васкуліти, альвеоліти, ревматоїдний артрит, системний червоний вовчак, гломерулонефрити тощо (Драннік Г.М., 1999, Ройт А., 2000, Sell S., 1996) Попри велику кількість вивчених механізмів розвитку імунокомплексного ушкодження судин та внутрішніх органів, науково-дослідні роботи останнього часу засвідчують, що в основі розвитку ХГІС лежать також порушення процесів синтезу оксиду азоту (NO) та розвиток внутрішньоклітинного оксидативного стресу, індукторами якого можуть бути як активні форми кисню, так і активні форми азоту (Сагач В.Ф., Маянский А.Н., 2004, Gomez-Cuerrero C., 2002; Kanashiro Підтвердження імунорегуляторної ролі NO в імунокомплексних процесах, його впливу на взаємодію ефекторних та мішеневих клітин за цих умов, послужило поштовхом для зясування участі NO-залежних механізмів у розвитку нейтрофільно-ендотеліальних взаємодій за умов ХГІС (Окауама N., 1998; MCINTYRE T., 2003). Дисертаційна робота є фрагментом планової міжкафедральної науково-дослідної роботи на тему “Імуно-ендотеліально-епітеліальнозалежні механізми в розвитку гіперімунокомплексного синдрому в експерименті і клініці”, яка виконувалась на кафедрах клінічної імунології та алергології, патологічної фізіології та ендоскопії і малоінвазивної хірургії Львівського національного медичного університету ім. Проаналізувати вплив корвітину на процеси синтезу оксиду азоту та циклічних нуклеотидів у ендотеліоцитах, нейтрофілах та сироватці крові в нормі та за умов ХГІС. Уперше досліджено вплив корвітину за умов in vitro на показники синтезу NO та рівня циклічних нуклеотидів у нейтрофілах та ендотеліоцитах інтактних і дослідних тварин при їх сумісній інкубації, що проявлялось його селективним інгібуючим впливом на активність INOS та підвищенням рівнів ЦАМФ і ЦГМФ, як в нейтрофілах, так і в ендотеліоцитах.У процесі дослідження використано 280 тварин, яких розподіляли на групи: перша - інтактні щури, які отримували плацебо і служили контролем; друга - тварини із змодельованим ХГІС; третя - інтактні щури, які отримували корвітин; четверта - щури з ХГІС, які отримували корвітин. Результати дослідження засвідчують, що в нейтрофілах, при їх інкубації з ендотеліальними клітинами інтактних тварин, спостерігається зниження на 40% вмісту NO2-аніонів (Р<0,01) та зниження активності INOS (на 53%) (Р<0,01), тоді як вміст стабільних метаболітів NO і активність ферментів NO-синтаз у ендотеліальних клітинах, за цих умов, не змінювалися. У той час як за умов інкубації нейтрофілів та ендотеліоцитів тварин із ХГІС у нейтрофілах різко, в 9 разів, підвищується рівень NO2-аніонів (Р<0,01) та спостерігається тенденція до збільшення активність INOS. Очевидно за умов ХГІС підвищення синтезу NO в активованих нейтрофілах прямо або опосередковано призводить до порушення процесів синтезу NO в ендотеліальних клітинах і може спровокувати порушення функціональної здатності ендотелію та ушкодження судин унаслідок розвитку нітрозативного стресу в цих клітинах, що призводить до гальмування фізіологічної регуляторної функції NO та прояву його цитотоксичної дії. Дослідження дії корвітину in vitro на процеси синтезу NO в нейтрофілах та ендотеліоцитах інтактних тварин показали його вплив на зниження активності INOS (Р<0,05), без впливу на активність CNOS, зменшення на 47% вмісту NO2-(Р<0,05) та на 69% - NO3-аніонів (Р<0,05), зниження рівня ЦАМФ (Р<0,05) та підвищення рівня ЦГМФ (Р<0,05) лише у нейтрофілах.Інкубація нейтрофілів та ендотеліоцитів із корвітином за умов in vitro в експерименті характеризувалась його стабілізуючим впливом на функціональну активність нейтрофілів, а саме: збільшенням фагоцитарної активності (в 1,5 рази), гальмуванням кисневозалежних (у 2 рази) та стимульованних кілінгових процесів (у 2 рази). Корвітин в умовах in vitro проявляє інгібуючий вплив на активність INOS в нейтрофілах (в 3,5 рази) і ендотеліоцитах (в 4 рази) без вірогідного впливу на активність CNOS, що свідчать про селективний інгібуючий вплив корвітину на активність INOS, особливо за умов ХГІС. Розвиток ХГІС супроводжувався посиленням NO-залежних та кисневозалежних процесів, що характеризувалось зменшенням вмісту нітрит-і нітрат-аніонів у нейтрофілах та ендотеліоцитах, зростанням (у 9 разів) рівня нітрат-аніону в сироватці крові, активацією INOS, зниженням активності CNOS у нейтрофілах та ендотеліоцитах, активацією окисно-відновних процесів та активності мієлопероксидази.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

У дисертаційній роботі наведено узагальнення та нові підходи в оцінці розвитку оксидативних та нітрозативних механізмів у нейтрофілах та ендотеліальних клітинах за умов ХГІС та можливості корекції цих процесів шляхом застосування корвітину. Зроблено наукові та прикладні висновки, а саме: 1. Інкубація нейтрофілів та ендотеліоцитів із корвітином за умов in vitro в експерименті характеризувалась його стабілізуючим впливом на функціональну активність нейтрофілів, а саме: збільшенням фагоцитарної активності (в 1,5 рази), гальмуванням кисневозалежних (у 2 рази) та стимульованних кілінгових процесів (у 2 рази).

2. Корвітин в умовах in vitro проявляє інгібуючий вплив на активність INOS в нейтрофілах (в 3,5 рази) і ендотеліоцитах (в 4 рази) без вірогідного впливу на активність CNOS, що свідчать про селективний інгібуючий вплив корвітину на активність INOS, особливо за умов ХГІС.

3. Розвиток ХГІС супроводжувався посиленням NO-залежних та кисневозалежних процесів, що характеризувалось зменшенням вмісту нітрит- і нітрат-аніонів у нейтрофілах та ендотеліоцитах, зростанням (у 9 разів) рівня нітрат-аніону в сироватці крові, активацією INOS, зниженням активності CNOS у нейтрофілах та ендотеліоцитах, активацією окисно-відновних процесів та активності мієлопероксидази. Застосування корвітину призводить до врегулювання цих змін, що засвідчує його гальмуючий вплив на розвиток нітрозативного стресу особливо в нейтрофілах та сироватці крові.

4. Аналіз показників рівня ЦАМФ та ЦГМФ за умов ХГІС довів, що корвітин підвищує рівень ЦАМФ і ЦГМФ в ендотеліоцитах та нормалізує рівень ЦГМФ у нейтрофілах та сироватці крові в умовах як in vivo, так in vitro.

5. Застосування корвітину коригує морфологічний стан нейтрофілів та ендотеліоцитів, що підтверджує його цитопротекторну і мембраностабілізуючу дію за умов ХГІС.

6. Уобстежених хворих з стійким гіперімунокомплексним синдромом спостерігається послаблення захоплюючої здатності нейтрофілів (у 70%), порушення їх кілінгової (у 55,6% - спонтанного НСТ-тесту, у 38,9% - стимульованного НСТ-тесту) та комплементарної активності (у 71,1%), що є сприятливим фактором у його розвитку і формуванні та потребує терапевтичної корекції з перспективою використання корвітину.

1. Чопяк В.В., Потьомкіна Г.О., Вальчук І.В. Ендотеліоцит: фізіологія та патологія // Серце і судини.-2004.-№1.-С.105-109.

2. NO-залежні та месенджерні процеси в нейтрофілах та ендотеліоцитах в умовах хронічної гіперімунокомплексемії та вплив на них біофлавоноїду кверцетину // Вальчук І.В., Чопяк В.В., Павлович С.І., Коцюруба А.В., Мойбенко О.О. // Серце і судини.-2005.-№4.-С.49-57.

3. Вальчук І.В. Ультраструктурна характеристика нейтрофільних гранулоцитів крові білих щурів при хронічній гіперімунокомплексемії та за умов застосування корвітину // Зб. наук. праць співробітників КМАПО ім. П.Л. Шупика.-Київ.-2005.-Вип.14-.Книга2.-С11-19.

4. Вальчук І.В., Чопяк В.В., Мойбенко О.О. Процеси синтезу оксиду азоту при хронічній гіперімунокомплексемії та їхні зміни під впливом кверцетину в умовах in vitro // Серце і судини.-2006.-№1.-С.50-57.

5. Гіперімунокомплексний синдром в експерименті та клініці / Чопяк В.В., Вальчук І.В., Гайдучок І.Г., Садляк О.В., Качмарська М.О., Никитюк Г.П. // Вісн. наук. дослідж.-2007.-№1.-С. 5-6.

6. Деклараційний патент на корисну модель 13287, Україна МПК А61К 31/33. Застосування корвітину як ендотеліопротектора за умов гіперімунокомплексного синдрому: Пат.13287 МПК А61К 31/33 / Чопяк В.В., Мойбенко О.О., Вальчук І.В., Качмарська М.О., Бідюк М.М., Любінець Л.А., Садляк О.В., Павлович С.І. (Україна).- № u200509991; Заяв. 24.10.2005; Опубл.15.03.06. Бюл.№3.- 2 с.

7. Застосування препарату “Корвітин” у хворих із гіперімунокомплексним синдромом / Чопяк В.В, Мойбенко О.О., Вальчук І.В., Павлович С.І. / Інформ. лист.-№ 227-2004.

8. NO-залежні та мієлопероксидазні механізми за умов гіперімунокомплексного синдрому в експерименті / Вальчук І.В., Чопяк В.В., Потьомкіна Г.О., Гаврилюк А.М., Колодяжна О.М., Каганяк В.Й. // Мат. Пленуму наукового товариства патофізіологів України.-Одеса.-Фізіол. журн.-2002.-Т.48, №4.-С.93-94.

9. Вальчук І., Синенький О. Нейтрофільно-ендотеліальні процеси метаболізму оксиду азоту за умов гіперімунокомплексного синдрому в експерименті // Мат. VI міжнародного медичного конгресу студентів та молодих учених.-Тернопіль.-2002.-С.306.

10. Вплив корвітину на ультраструктури синусоїдних гемокапілярів печінки білих щурів за умов хронічного гіперімунокомплексного процесу / Качмарська М.О., Чопяк В.В., Ковалишин В.І., Садляк О.В., Вальчук І.В. // IV національний конгрес патофізіологів України з міжнародною участю. - Чернівці. - Клін. та експер. патологія.-2004.-Т.3, №2.-С.363-364.

11. Вальчук І.В., Чопяк В.В. Синтез оксиду азоту в нейтрофілах білих щурів за умов норми і хронічної гіперімунокомплексемії // Установчий зїзд Українського товариства клітинної біології.-Львів.-2004.-С.287.

12. Чопяк В.В., Вальчук І.В., Садляк О.В. Вплив корвітину на рівень циклічних нуклеотидів у щурів за умов хронічної гіперімунокомплексемії // VIII науково-практична звітно-виборча конференція Українського товариства фахівців з імунології, алергології та імунореабілітації "Сучасні аспекти діагностики та лікування імуно- та алергопатології".-Київ.- Імунологія та алергологія.-2006.-№2.-С.127.