Влияние ионов металлов на карбоангидразоподобную активность внешних водорастворимых белков PsbP и PsbQ фотосистемы 2 - Дипломная работа

III. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. В процесс образования кислорода также принимают участие: ион Ca2 ; один или два иона Cl-. Предполагается, что в обеспечении этими ионами в процессе сборки водоокисляющего комплекса, а также в их сохранении в нормально функционирующей ФС-2 участвуют внешние водорастворимые белки ВОК PsbP и PsbQ. 2.Карбоангидразная активность фотосистемы 2 2.1 Карбоангидразная активность ФС-2 высших растений и её свойства 2.2 Носители карбоангидразной активности в ФС-2 высших растений 3. Получение и очистка белков PsbP и PsbQ 7. Измерение концентрации белка 10. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АТФ- аденозинтрифосфат БК- бикарбонат ВОК - водоокисляющий комплекс КА- карбоангидраза(ы) КА-активность-- карбоангидразная активность КП-активность- карбоангидразоподобная активность НАДФ- никотинамидадениндинуклеотидфосфат П680- первичный донор электрона в фотосистеме 2 ПААГ- полиакриламидный гель РЦ- реакционный центр ССК2- основной светособирающий комплекс переферической антенны фотосистемы 2 Фео- феофитин ФС-1- фотосистема 1 ФС-2- фотосистема 2 Хл- хлорофилл ЭДТА- этилендиаминтетраацетат ЭТЦ- электрон-транспортная цепь BBY- фрагменты тилакоидных мембран, обогащённые фотосистемой 2 (выделенные согласно (Berthold et al., 1981)) CР43 - белок антенны ядерного комплекса ФС2 CР47 - белок антенны ядерного комплекса ФС2 D1 - интегральный белок РЦ ФС2 D2 - интегральный белок РЦ ФС2 DCBQ- 2,6-дихлор-п-бензохинон HСО3- - ион бикарбоната; MES - (N-морфолино)этансульфоновая кислота Mn4CaO5-кластер - неорганическое ядро ВОК ФС2 PsbP и PsbQ- водорастворимые белки ВОК ФС2высших растений и зеленых водорослей с молекулярными массами 23 кДа и 17 кДа, соответственно Tris-2-амино-2-гидроксиметил-пропан-1,3-диол QA - первичный хиноновый акцептор электрона в ФС2 QB - вторичный хиноновый акцептор электрона в ФС II .ВВЕДЕНИЕ Фотосинтез - процесс образования богатых энергией органических веществ из веществ энергетически бедных - углекислого газа и воды. Фотосинтетическое окисление воды происходит в ФС-2 в неорганическом ядре, состоящем из ионов Ca и Mn, стабилизированном тремя внешними водорастворимыми белками: PsbO, PsbP, PsbQ. Известно, что тилакоиды имеют как минимум два источника КА активности в ФС-2. Возник интерес действию других металлов на КА активность, например, входящих в КА или имеющих сходный радиус с теми металлами, для которых уже показана активность, либо установить действие тяжелых металлов. Для достижения данной цели мы выделили несколько задач: 1) Выделить фотохимически активные фрагменты тилакоидных мембран хлоропластов, обогащенных ФС-2 из листьев гороха (PisumsativumL. cv. Moscowski 559); 2) Выделить из них белки водоокисляющего комплекса - PsbPи PsbQ; 3) Установить влияние ионов двухвалентных металлов на карбоангидразоподобную активность белков PsbPи PsbQ; III.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Выделение частиц ФС-2 из тилакоидов по методу schiller и dau (2005 г) Осаждают тилакоиды из раствора на центрифуге (6000g, 20 мин) и ресуспендируют в среде с бетаином (25 мМ HEPES (pH 6,0), 15 мМ NaCl, 10 мМ MgCl2, 1 М глицин-бетаина) до концентрации ~ 2,2 мг/мл.