Участь інтернейронів гіпокампу в епілептогенезі ФЛС бета1-/--мутантных мышей - Автореферат

Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наукНауковий керівник: доктор біологічних наук, професор ДЗЕРЖИНСЬКИЙ Микола Едуардович, Київський національний університет імені Тараса Шевченка, завідувач кафедри цитології, гістології та біології розвитку Офіційні опоненти: доктор біологічних наук, старший науковий співробітник КВІТНИЦЬКА-РИЖОВА Тетяна Юріївна, Інститут геронтології АМН України, завідувач лабораторії морфології і цитології доктор медичних наук ГРАБОВИЙ Олександр Миколайович, Національний медичний університет імені О.О. Захист дисертації відбудеться “14” жовтня 2002 р. о 12.00 год. на засіданні спеціалізованої Вченої ради Д 26.001.38 при Київському національному університеті імені Тараса Шевченка за адресою: 03022, Київ, проспект академіка Глушкова, 2, біологічний факультет Київського національного університету імені Тараса Шевченка, ауд.215.За результатами численних досліджень ключова роль в процесі генерації епілептичної активності при скроневій епілепсії у людини відводиться гіпокампу, в якому, за даними аутопсійних аналізів, виявляється суттєвий рівень дегенерації в нейронних популяціях з втратою пірамідних нейронів зон СА1, САЗ та інтернейронів шару поліморфних клітин зубчатої звивини. Так, було зясовано, що епілепична активність, індукована, наприклад, інєкціюванням каїнової кислоти, спричинює втрату інтернейронів шару поліморфних клітин (Mathern et al., 1995; Buckmaster et al., 1997), втрату соматостатин-вмісних (Robbins et al., 1991; Buckmaster et al., 1997) та парвалбумін-вмісних клітин (Sloviter, 1991) в шарі поліморфних клітин зубчатої звивини гіпокампу. Метою даного дослідження було зясувати характер, послідовність та стартові чинники епілептогенних змін в ключовій для скроневої епілепсії популяції інтернейронів шару поліморфних клітин зубчатої звивини гіпокампу трансгенних мишей з видаленим геном фосфоінозитид-специфічної фосфоліпази С класу b1 (ФЛСВ1-/-), визначити локалізацію фосфоінозитид-специфічної фосфоліпази С класу b1 (ФЛСВ1) в нейронах гіпокампу в нормі та характер функціональних порушень, спричинених її вилученням з системи внутрішньоклітинної сигналізації. Зясувати характер змін в проекціюванні кошикових клітин та гранулярних клітин зубчатої звивини гіпокампу ФЛСВ1-/-мишей з посиленням епілептичної активності та вплив репроекціювання на стан збуджувально-гальмівного балансу в нейронній мережі зубчатої звивини епілептично трансформованого гіпокампу. Виявити характер змін експресії нейротропного фактору BDNF (brain-derived neurotrophic factor), їх вплив на нейроактивний профіль нейронних популяцій зубчатої звивини гіпокампу ФЛСВ1-/-мишей та роль в регуляції збуджувально-гальмівного балансу в зубчатій звивині епілептичного гіпокампу.Підрахування кількості клітин в популяції інтернейронів шару поліморфних клітин зубчатої звивини гіпокампу проводили у 8 послідовних зрізах (загальний обсяг 400 мкм) гіпокампу кожної тварини. З метою визначення характеру локалізації ФЛСВ1 в нервових клітинах нормального гіпокампу та підтвердження факту повного генетичного вилучення гена ФЛСВ1 була застосована імуногістохімічна детекція ФЛСВ1 (поліклональні антитіла проти ФЛСВ1; 1:200, POSTECH, Республіка Корея), а для виявлення сталості популяції пірамід гіпокампних полів СА1-СА2, нейронів stratum oriens, stratum radiatum та stratum lacunosum moleculare, а також гранулярних клітин зубчатої звивини гіпокампу та аналізу епілоптогенних змін в ній-імуногістохімічне визначення кальбіндіну D28k (моноклональні анти-кальбіндин D28k антитіла; 1:3000, Sigma, США). З метою виявлення епілептогенних змін в проекціюванні гранулярних нейронів зубчатої звивини гіпокампу (мутантних мишей (Р15 (n=10), Р35 (n=10), Р45 (n=10) та контрольних (Р15 (n=10), Р35 (n=8), Р45 (n=7)) була застосована техніка гістохімічної детекції Zn у терміналях моховитих волокон, а для зясування характеру галудження та проекціювання аксонів ГАМКЕРГІЧНИХ нейронів зубчатої звивини гіпокампу (а саме, кошикових клітин)-техніка подвійного імуногістохімічного виявлення ГАМК та комплексу нейрофіламентних протеїнів (поліклональні анти-ГАМК (1:3000, Sigma, США) та моноклональні проти-комплексу нейрофіламентних протеїнів (1:50, Zymed, США) антитіла, АВС система (Large volume LSAB universal kit, peroxidase, DAKO, США), 3,3’-діамінобендизин (DAB substrat kit for peroxidase, Vector, США)). Для виявлення епілептогенних змін рівня BDNF в нейронах гіпокампу застосовували імуногістохімічну детекцію BDNF-протеїну (поліклональні анти-BDNF антитіла; 1:100; Promega, США) в гіпокампі контрольних (Р15 (n=8), P35 (n=8), P45 (n=9)) та мутантних (Р15 (n=9), P35 (n=9), P45 (n=9); перфузія 24 год після останнього судомного нападу) мишей.

2. Основний зміст роботи