Трансплантация аутологичных клеток костного мозга для лечения длительно незаживающих язв желудка - Автореферат

ФГУ Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наукРабота выполнена в ФГУ Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий Научные консультанты: Академик РАН и РАМН, доктор медицинских наук, профессор Валерий Иванович Шумаков доктор медицинских наук, профессор Нина Андреевна Онищенко Официальные оппоненты: доктор медицинских наук Сергей Николаевич Шурыгин доктор медицинских наук, профессор Геннадий Николаевич Сушкевич доктор медицинских наук, профессор Игорь Михайлович ИльинскийДля клеточной трансплантации используют гемопоэтическую или стромальную фракции клеток аутологичного костного мозга (КМ), которые содержат стволовые и прогениторные клетки [Kusmartsev S. et al., 1998; Terrazas L. et al., 2001; Caplan Эффективность стромальной фракции клеток КМ, обусловлена не только тем, что эти клетки секретируют широкий спектр цитокинов и ростстимулирующих факторов, но и тем, что являясь предшественниками мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), они способны активно пролиферировать в культуре, дифференцироваться в мезенхимальные клетки других фенотипов и непосредственно участвовать в процессах восстановительной регенерации поврежденных тканей [Потапов И.В и др., 2005; Amado L. et al., 2005; Parekkadan B. et al., 2007; Caplan В этой связи, для улучшения результатов лечения через устранение дизрегуляции иммунной системы при ЯБ стали использовать пептиды селезенки, доставляемые в организм больного путем экстракорпорального подключения донорской свиной селезенки (ЭКПДС) или в виде нативных пептидов из селезенки свиньи (Спленопид) [Васильченков А.В., 2006] и клеток КМ (Миелопид) [Михайлова Л.П., 1998]. Отработать технологию выделения клеток из аутологичного костного мозга, идентифицировать в культуре получение мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) и показать целесообразность их предварительного культивирования у животных с хроническими язвами желудка для восстановления функциональной и биорегуляторной активности этих клеток. Установить предпочтительность использования прекультивированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток перед мононуклеарными клетками аутологичного костного мозга в качестве более эффективного средства патогенетической терапии у больных с длительно незаживающими аутоиммунными язвами желудка и двенадцатиперстной кишки.При моделировании ДНЯЖ и лечении этих язв клетками аутологичного костного мозга всего было израсходовано 100 крыс. Животных выводили из эксперимента на 10, 20 и 30 сутки после трансплантации клеток и соответственно в эти же сроки изучали динамику заживления язвенного дефекта, а также проводили оценку эффективности клеточной терапии ДНЯЖ. Для подтверждения роли иммунопатогенетических механизмов в развитии длительно незаживающих язв у больных и установления корреляций с иммунопатогенетическими механизмами при моделировании аутоиммунных язв желудка в эксперименте, нами было проведено электронно-микроскопическое и иммуноморфологическое изучение слизистой оболочки желудка (СОЖ) и двенадцатиперстной кишки у 53 пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, обследовавшихся в эндоскопическом отделении ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Росмедтехнологий. Используя иммуногистохимическое исследование активности различных популяции клеток лимфоидного ряда в биоптатах СОЖ из зоны язвенного дефекта мы подтвердили связь гибели фибробластов в СОЖ с цитотоксическим действием активированных лимфоцитов, в частности, была выявлена экспрессия в собственной пластинке СОЖ большого количества CD8 - Т клеток, число которых преобладало по сравнению с CD4 (3:1); около 40% CD8 клеток представляли собой NK - клетки. В группе с трансплантацией ММСК КМ через 10 суток отмечается не только уменьшение площади язвенного дефекта, но и его глубины, а также очищение дна язвы от некротических масс и уменьшение воспаления вокруг язвы.Трансплантация прекультивированных аутологичных клеток костного мозга - мононуклеарных клеток и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в зону язвенного дефекта является эффективным методом лечения длительно незаживающих аутоиммунных язв желудка, так как ускоряет процесс восстановительной регенерации в зоне язвенного дефекта и корригирует иммунопатологические изменения в организме, ликвидируя тем самым условия для их возникновения. Разработанная модель длительно незаживающей аутоиммунной язвы желудка у крыс является адекватной экспериментальной моделью для изучения иммунопатологических механизмов развития язвенной болезни и для оценки эффективности лечения длительно незаживающих язв методами клеточной трансплантации, так как воспроизводит основные местные иммунопатологические изменения, возникающие в зоне язвенного дефекта у больных.