Современные методы оценки иммунного статуса животных - Реферат

Реферат на тему: «Современные методы оценки иммунного статуса животных, их характеристика, особенности».2 Специфические показатели иммунного статуса и методы их определенияКонцепция иммунологического образа болезни, обосновывающая существование для каждого заболевания и его вариантов своих измененных параметров, а также ориентировка на вид и вариант иммунного статуса, позволяет использовать небольшую группу главных диагностических показателей в каждом конкретном случае. Лабораторная диагностика иммунодефицита (ИД) основывается на определенной последовательности, алгоритме действий, используемых при оценке иммунного статуса. Фенотипирование лимфоцитов, в настоящее время, проводиться с помощью моноклональных антител (МАТ) к CD-антигенам в реакции иммунной флуоресценции с учетом результатов на люминисцентном микроскопе или проточном цитометре. Для анализа популяций и субпопуляций лимфоцитов помимо методов иммунофлюоресценции с суспензией лимфоцитов можно использовать разработанные нами стабильные иммунодиагностикумы на основе моноклональных антител, позволяющие фенотипировать лимфоциты в лейкосуспензии с регистрацией при обычной световой микроскопии. Если же CD3 -Т-лимфоцитов в крови ниже 40% или после болезни их содержание в течении 1 месяца не приходит в норму - это расценивается как Т-клеточный иммунодефицит и необходимо проведение иммунокоррекции или иммунотерапии под контролем иммунограммы.Для характеристики фенотипа клеток используются различные маркеры: - рецепторы, связывающие эритроциты, бактерии, вирусы, иммуноглобулины, гормоны и т.д. Хотя метод Е-РОК считается устаревшим, в принципе он позволяет достоверно судить об уровне зрелых Т-лимфоцитов, хотя и не выявляет Т-клетки с низкоаффинными рецепторами к ЭБ. Однако модификация метода путем обработки ЭБ папаином или нейроаминидазой, «разрыхляющими» мембраны эритроцитов и расщепляющими некоторые вещества, позволяет выявлять всю популяцию Т-клеток, сопоставимую с определением методом проточной цитометрии. Использование определения «активных» Т-лимфоцитов, связывающих ЭБ при 37°С, принесло меньше информации изза неясности сущности феномена и его связи с конкретными, ныне известными, субпопуляциями Т-клеток. Все же этот метод в определенной степени детектирует гетерогенность фенотипа Т-клеток и иногда указывает на связь с тяжестью патологического процесса при снижении их уровня.При микроскопии вокруг клеток, связавших антитела, имеется ореол окрашенного хромогена. Использование фиксированных мазков с клетками не является оптимальным, т.к. клетки могут терять некоторые молекулы при фиксации. лимфоцит фенотипирование фагоцитоз иммунный Принцип метода заключается в том, что парамагнитные полистерольные микрочастицы (диаметр 4,5 мкм), конъюгированные с моноклональными антителами к CD4 и CD8 антигенам, связываются с клетками, имеющими эти антигены и после 10 мин инкубации осаждаются на магнитном сепараторе, а несвязавшиеся - удаляются. удаляют моноциты, для чего к крови добавляют 25 мкл анти-CD14 частиц (Dynabeads), инкубируют 10 мин при магнитном сепараторе, а затем отсасывают надосадочную жидкость (НЖ) с лимфоцитами к двум разным порциям НЖ без моноцитов добавляют по 25 мкл анти-CD4 и на магнитном сепараторе Dynal MPC лимфоциты, связавшие осажденные клетки, ресуспензируют в лизирующем растворе уксусной кислоты для разрушения эритроцитов (5 мкм при комнатной температуре)В норме при определении Т-и В-лимфоцитов и их субпопуляций с помощью МАТ авторы приводят значительно отличающиеся показатели нормы, в том числе и возрастной. У 6-10% здоровых людей имеются в норме значительные отклонения показателей от средних величин: у 9% людей количество лимфоцитов 42% у 8% лиц, ЕК>20% у 3% людей и т.д. Уровни субпопуляций лимфоцитов изменяются при стрессе, физической нагрузке, при всех заболеваниях, под влиянием лечения различными препаратами. У детей раннего возраста имеется физиологический лимфоцитоз и связанный с ним отличающийся состав субпопуляций лимфоцитов. Однако, как правило, динамика субпопуляций лимфоцитов в крови больных отражает тяжесть течения заболевания и по их составу можно осуществлять его прогнозирование.1) Оценивается поглотительная и переваривающая активность гранулоцитов с определением фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа. Фагоцитарный индекс (ФИ) - это количество фагоцитов, участвующих в фагоцитозе (норма - 60-80%). Оценка показателей через разные промежутки времени позволяет оценить динамику фагоцитоза. Переваривание бактерий можно оценивать путем посева лизатов лейкоцитов на питательные среды и подсчета выросших колоний. Переваривание кандид (киллинг): оценивают киллинг в % убитых клеток через 30 и 60 мин минут инкубации.Факторы системы комплемента, b-лизины, интерфероны, маннан-связывающий белок, дефензины и белки острой фазы воспаления (СРБ, фибриноген, сывороточный амилоид, a2 - макроглобулин) служат первой линией защиты от патогенов и их недостаточность может быть причиной инфекции.

Содержание

Введение

1. Оценка иммунного статуса при иммунодефицитах

1.1 Принципы иммунофенотипирования лимфоцитов

1.2 Иммунофенотипирование лимфоцитов иммуноферментным методом

1.3 Особенности фенотипа лимфоцитов в норме и при заболеваниях

2. Оценка фагоцитоза и факторов врожденного иммунитета