Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов listeria monocytogenes - Автореферат

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук СИСТЕМА АНАЛИЗА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ LISTERIA MONOCYTOGENESРабота выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения РАМН (г. Владивосток) и Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Научные консультанты: Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Сомов Георгий Павлович Доктор биологических наук Ермолаева Светлана Александровна Официальные оппоненты: Академик РАМН, д.м.н., профессор Сергиев Владимир Петрович Ведущая организация: ФГУН «Санкт-Петербургский Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Решение перечисленных вопросов, связанных с биологией и вирулентностью возбудителя листериоза, а также с закономерностями эпидемического процесса этой инфекции, может быть осуществлено на основе микробиологического и молекулярно-генетического мониторинга за возбудителем с применением эффективных методов диагностики и созданием современных систем для типирования штаммов листерий. Задачи исследования: Разработать комплекс методов и средств для выделения и идентификации бактерий рода Listeria из различных источников окружающей среды, получить коллекцию дальневосточных штаммов листерий. листериозный инфекция штамм генетический Впервые в сравнительном аспекте изучены гены, кодирующие факторы адгезии и инвазии - белки семейства интерналинов (INLA, INLB, INLC, INLE, INLG, INLH, INLF), белки ACTA, Auto у штаммов L. monocytogenes, выделенных на Дальнем Востоке и в Европейской части России из различных источников. Установлено, что штаммы L.monocytogenes, выделенные из эукариотических организмов, включая человека, имеют гены INLA, INLB, INLC, INLE, независимо от региона выделения; гены INLF, INLG, INLH являются штаммоспецифическими. Для L. monocytogenes, выделенных на территории РФ, характерны регион-специфическое распределение штаммов и поликлональность распределения штаммов внутри регионов (Европейская часть РФ, Дальний Восток).В начале работы были подобраны оптимальные питательные среды для изоляции и культивирования листерий, ингибиторы для приготовления селективной дифференциальной среды (патент РФ № 2184782), разработана индикаторная среда (патент РФ № 2303060) с целью эффективного выделения культур из разнообразных объектов окружающей среды, клинического материала, а также модифицированы среды для изучения свойств листерий - определение подвижности, ДНКАЗНОЙ и липазной активности, биохимических свойств. У культур L.monocytogenes, выделенных на Дальнем Востоке и в Европейской части России, не было найдено выраженных отличий и по биохимическим свойствам. Культуры L.monocytogenes, выделенные на Дальнем Востоке в большинстве ферментировали мелецитозу, арабинозу, крахмал и образовывали ацетилметилкарбинол, по сравнению с культурами листерий из Европейской части России. Выявлено, что чаще разлагали мелецитозу и образовывали ацетилметилкарбинол в реакции с метиловым красным L.monocytogenes в группах «Мертворожденные плоды» и «Грызуны», сахарозу - культуры из группы «Мертворожденные плоды» по сравнению с культурами листерий контрольной группы. Не было найдено статистически значимых отличий по ферментативной активности у культур L.monocytogenes, изолированных на Дальнем Востоке и в Европейской части РФ.Создана комплексная система анализа микробиологических и молекулярно-генетических свойств возбудителя листериоза, L.monocytogenes, включающая: (1) оригинальные селективные и дифференциальные питательные среды на основе отечественного сырья; (2) адаптированные и оптимизированные для отечественных условий методы микробиологической дифференциации; (3) экспресс-методы выявления и идентификации возбудителя листериоза, основанные на ПЦР, специфичной в отношении консервативных фрагментов генов патогенности; (4) систему типирования L.monocytogenes на основе мультилокусного секвенирования генов факторов патогенности, позволяющую дифференцировать эпидемически несвязанные между собой изоляты листерий с индексом дискриминации 0,982. Впервые показано, что среди изолятов L. monocytogenes из клинического материала, от грызунов и морских гидробионтов преобладают штаммы листерий, относящиеся к первой филогенетической линии; среди изолятов L. monocytogenes из продуктов питания доминируют штаммы, относящиеся ко второй филогенетической линии. Впервые установлено, что ген, кодирующий белок INLF, проявляет вариабельность в размере и последовательности нуклеотидов у L.monocytogenes, выделенных из разных источников; показано, что гены INLG и INLH не выявляются у большинства штаммов L.monocytogenes, изолированных из организма человека и животных.