Розробка живильних середовищ для культивування культур клітин - Автореферат

АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наукРобота виконана в Інституті ветеринарної медицини Української академії аграрних наук. Науковий керівник кандидат біологічних наук Кучерявенко Олексій Олександрович, Інститут ветеринарної медицини УААН, завідувач лабораторії лептоспірозу сільськогосподарських тварин із музеєм штамів мікроорганізмів, заступник директора з питань науки. Офіційні опоненти: доктор ветеринарних наук, старший науковий співробітник Прискока Віктор Андрійович, Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів, завідувач відділу експертизи і стандартизації; Захист відбудеться "4 "жовтня 2002 р. о 10 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.004.03 в Національному аграрному університеті за адресою: 03041, м.За кордоном та в країнах ближнього зарубіжжя виготовляють широкий спектр живильних середовищ для культивування культур клітин, вірусів, бактерій. Великої уваги при роботі з культурами клітин заслуговують ферментативні гідролізати білків, оскільки продукти гідролізу в складі живильних середовищ забезпечують високий індекс проліферації клітин. Середовища на їх основі прості в приготуванні, дешеві (коштовний набір окремих амінокислот в них замінений набором амінокислот, отриманих в результаті ферментативного гідролізу білка) і в значній мірі забезпечують стандартні умови культивування клітин. Після виготовлення першого середовища на основі ферментативного гідролізату лактоальбуміну багато дослідників займалися розробкою ферментативних гідролізатів із іншої білкової сировини як тваринного, так і рослинного походження (Сергєєв В. А., 1988, Матюшина Л. В., Строгов С. Е., 1989, Пригода А. С., 1990, Єфремова Л. В., Іванов І. В., 1991, Телішевська Л. Я., 1993, Наумець З. П., Бусол В. А., Стеценко В. І., Кучерявенко Л. І., Герман В. В., 1997, Мартинець Л. Д., 1998 та ін.). Культивування культур клітин виконують в основному на живильних середовищах з вмістом сироватки крові великої рогатої худоби.Лінію ПТП вивели дослідним шляхом із тестикулів поросят-гнотобіотів, а культури СНЕВ, КТП та ВНК-21 використовували із колекції культур клітин ІВМ УААН. Для визначення здатності живильного середовища гемогідролізату та сироватки крові великої рогатої худоби забезпечувати ріст культур клітин використовували методи біологічного контролю. Розробляючи умови гідролізу білків крові великої рогатої худоби, основну увагу звертали на вибір відповідного методу гідролізу, підбір фермент-субстратного співвідношення, визначення ступеня розбавлення субстрату, встановлення тривалості гідролізу, дотримання певного температурного режиму та РН. Таким чином, було встановлено, що для проведення гідролізу необхідно дотримуватись таких умов: розбавлення субстрату розчином Хенкса проводити у співвідношенні 1:2; використовувати для гідролізу 35-45% ферментного препарату, приготовленого із підшлункової залози та 4,0-5,0 г трипсину на 1 дм3 кровяної маси; проводити гідроліз 2-3 доби при температурі 38-42°C та концентрації водневих іонів 7,4-7,8. Таким чином, провівши дослідження по отриманню ферментативного гідролізату згустків крові великої рогатої худоби, вважаємо за доцільне відмітити, що даний гідролізат може бути використаний як повноцінна основа живильного середовища, призначеного для культивування різних тваринних культур клітин, а самі клітини, які виросли на цих середовищах, здатні забезпечити репродукцію вірусу хвороби Тешена.Розроблено та запропоновано для практики культуральне живильне середовище - ферментативний гідролізат білків крові (ФГБК) великої рогатої худоби. Визначені оптимальні умови проведення ферментативного гідролізу білків крові великої рогатої худоби: розбавлення субстрату розчином Хенкса у співвідношенні 1:2; концентрація ферментативного препарату - 35-45%, трипсину 4-5 г/дм3 кровяної маси; температура гідролізу 38-42?С; початкове значення РН суміші, яка гідролізується 7,4 - 7,8; тривалість гідролізу - 2-3 доби. Живильні середовища на основі 5-і 7,5%-го ФГБК, при культивуванні первинних та перещеплюваних культур клітин, забезпечують накопичення біомаси життєздатних клітин і продуктивний їх ріст. За морфологічною характеристикою моношару, строками формування та індексом проліферації клітин препарат не поступається ГЛА та синтетичному живильному середовищі 199. Середовища на основі ФГБК, поряд із імпортними препаратами на основі чистих амінокислот і гідролізатів білків, використовуються як підтримуючі при репродукції вірусу хвороби Тешена.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ