Розробка засобів та методів діагностики інфекційної бурсальної хвороби - Автореферат

Українська академія аграрних наук Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наукНа цей час у нашій країні відсутні експрес-методи індикації збудника інфекційної бурсальної хвороби, тому розробка й удосконалення методів діагностики є актуальною проблемою й потребує невідкладного вирішення. розробити технологію отримання та контролю компонентів діагностичного набору для індикації вірусу інфекційної бурсальної хвороби методом імунофлуоресценції; За допомогою загальноприйнятих вірусологічних методик проводили: виділення, культивування та накопичення вірусу ІБХ на чутливих лабораторних моделях; визначення інфекційної активності вірусу; вивчення пермісивності біологічних систем до вірусу та режимів культивування вірусу. Розроблено та відпрацьовано регламент одержання й контролю компонентів “Набору для діагностики інфекційної бурсальної хвороби методом імунофлуоресценції”. Уперше вірус ІБХ, штам УМ-93 було адаптовано до перещеплюваної лінії клітин легенів ембріона корови (ЛЕК).При вивченні чутливості первинно-трипсинізованих та перещеплюваних культур клітин до вірусу ІБХ, установлено, що рівень накопичення вірусу залежить від виду клітинної культури та пасажного рівня. При проведенні трьох прямих пасажів вірус не розмножувався в клітинах, про що свідчить відсутність цитопатичної дії вірусу та негативні результати РІФ. При вивченні впливу пасажного рівня вірусу на ступінь накопичення вірусної маси встановлено, що при проведенні послідовних пасажів вірусу ІБХ на лініях клітин ФЕК та ЛЕК відбувається спочатку збільшення титру вірусу до 3-4 пасажу, а потім зменшення накопичення вірусу з кожним послідуючим пасажем (табл. Після проведення 2 циклів культивування вірусу (кожний цикл складався з 3 пасажів на ЛЕК, 3 - на КЕ та знову 3 пасажів на ЛЕК) спостерігали збільшення накопичення вірусу в культурі ЛЕК до 5,4±0,3 lg ТЦД 50/см3. При вивченні умов та режимів культивування збудника ІБХ, штам УМ-93 в культурах клітин ЛЕК та ФЕК встановлено, що вихід вірусу був найвищим при зараженні в період енергійного розмноження клітин, при 100 % формуванні моношару клітин, і знижувався на 0,5-1,5 lg ТЦД 50/см3 при інфікуванні культур в стаціонарній фазі росту клітин.Уперше в Україні розроблено “Набір для діагностики інфекційної бурсальної хвороби методом імунофлуоресценції”. Реакція імунофлуоресценції з використанням компонентів запропонованого набору є специфічною, високочутливою, експресною та дозволяє проводити своєчасну та ефективну діагностику інфекційної бурсальної хвороби. Установлено, що методом імунофлуоресценції вірус інфекційної бурсальної хвороби виявляється в клітинах фабрицієвої сумки, нирок, селезінки через 18 годин після інфікування курчат та протягом 10-13 днів. Для діагностики інфекційної бурсальної хвороби методом імунофлуоресценції як матеріал для дослідження необхідно використовувати бурсу та нирки курчат, де вірус ІБХ накопичується і виявляється як на ранніх (18-20 годин після інфікування), так і на більш пізніх стадіях інфекційного процесу (10-13 днів після інфікування).