Характеристика біотехнології отримання ембріонів in vitro, напрямки та перспективи її вдосконалення. Умови середовища культивування ооцит-кумулюсних комплексів. Впровадження біоритмічно осцилюючих параметрів культивування біологічних мікрооб’єктів.
При низкой оригинальности работы "Розробка технології культивування ооцит-кумулюсних комплексів in vitro за осциляції рН і температури середовища їх дозрівання", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Результат розвитку біологічного обєкта-процесу не лише запрограмований, а визначається й впливом зовнішніх умов середовища. А тому можна сподіватися на успішне застосування біоритмічної осциляції РН і температури як факторів, що стимулюють ріст і розвиток ОКК. Напередодні культивування середовище розливали по скляних камерах, по 0,7 мл й нашаровували на нього вазелінову олію, теж по 0,7 мл. Через 24 год. культивування ОКК їхній діаметр вимірювали повторно й визначали процент його відносного приросту за формулою Броді [8]: процент відносного приросту = 2 х 100 х [(М2 - М1)] / [(М2 М1)], де М1 - діаметр ОКК до культивування, М2 - діаметр ОКК через добу культивування. Останні продували сумішшю СО2 з повітрям, яка надавала середовищу мінімальний РН у 7,2 од. й уставляли в термостат або термоосцилятор залежно від того, який варіант культивування здійснювали - лише осциляцію РН, чи й осциляцію температури.Розроблено технологію культивування in vitro ОКК у середовищі, температуру якого піддають осциляції в діапазоні від 37°С до 39°С з 40-хвилинним періодом. Розроблено технологію культивування in vitro ОКК у середовищі, РН якого піддають осциляції в діапазоні від 7,2 од. до 8,1 од. з періодом в одну добу.
Вывод
Розроблено технологію культивування in vitro ОКК у середовищі, температуру якого піддають осциляції в діапазоні від 37°С до 39°С з 40-хвилинним періодом. Розроблено технологію культивування in vitro ОКК у середовищі, РН якого піддають осциляції в діапазоні від 7,2 од. до 8,1 од. з періодом в одну добу. Було показано, що немає достовірної відмінності між процентами приросту діаметра ОКК за постійної та осцилюючої температури. Доведено, що немає достовірної вдмінності між процентами приросту діаметра ОКК за постійного та осцилюючого РН. Хоча експериментально нами показано, що осцилюючі умови культивування не гірші за постійні, наведені літературні дані, й наше відповідне обґрунтування, беззаперечно свідчать про перспективність використання саме осцилюючих умов як неспецифічних факторів, що стимулюють ріст і розвиток ОКК in vitro.
Враховуючи перспективи подальших досліджень, вважаємо, що потрібно дослідити вплив застосування осцилюючих РН і температури на запліднення in vitro дозрілих in vitro ооцитів та на подальший розвиток отриманих у такий спосіб ембріонів. Адже чим довше продовжуватиметься культура за осцилюючих РН і температури, тем більшою буде імовірність того, що збільшиться відмінність між результатами культивування за постійних умов, з одного боку, та за осцилюючих, з іншого, імовірно, - на користь осцилюючих умов.
Список литературы
1. Денисюк П.В. Принципиально новый метод культивирования доимплантационных эмбрионов млекопитающих / П.В. Денисюк, Н.А. Мартыненко // Доповіді НАН України. - 1995. - №11. - С. 148-149.
2. Денисюк П.В. Вплив РН середовища на розвиток in vitro доімплантаційних ембріонів свині: автореф. дис. на здобуття наук. ступеня канд. біол. наук: спец. 03.00.13. «Фізіологія людини і тварин» / П.В. Денисюк. - Х., 1997. - 25 с.
3. Денисюк П.В. Теоретичні та експериментальні основи осциляторного способу утримання птахів і ссавців / П.В. Денисюк, О.Г. Чирков // Наук. вісн. ЛНАВМ ім. С.З. Ґжицького. - 2004. - Т. 6, №3, Ч. 3. - С. 42-52.
4. Пат.10067 А, Україна, клас 5 С12 N5/00 Спосіб культивування доімплантаційних ембріонів ссавців поза організмом / Денисюк П.В.; заявник і патентоутримувач Інститут свинарства УААН. - №93111621; заявл. 23.04.1993; опубл. 30.09.1996, Бюл. №3.
5. Пат. 46186 А, Україна, клас 6 А61М1/14, C/12N5/06. Спосіб примусової осциляції РН середовища культивування біологічних мікрообєктів / Денисюк П.В.; заявник і власник патенту Інститут свинарства УААН. - №98094883; заявл. 17.09.1998; опубл. 15.05.2002, Бюл. №5.
6. Пат. 62419 Україна, МПК (2011.01) A01 63/00. Спосіб культивування поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів (ОКК) за температури, осцилюючої з одногодинним періодом / Корчан Н.О., Денисюк П.В.; заявник і власник патенту Інститут свинарства ім. О.В. Квасницького НААН України. - № u201101851; заявл. 17/02/2011; опубл. 25.08.2011. Бюл. №16.
7. Пат. 68013 Україна, МПК (2012.01), 02N 5/00, А61М 1/00. Застосування примусової біоритмічної осциляції РН середовища культивування поза організмом як способу, призначеного для збільшення міри розростання ооцит-кумулюсних комплексів (ОКК) / Корчан Н.О., Денисюк П.В.; заявник і власник патенту Інститут свинарства і агропромислового виробництва НААН України. - № u 2011 10439; заявл. 29.08.2011; опубл. 12.03.2012, Бюл. №5.
8. Brody S. Bioenergetics and growth. With special reference to the efficiency complex in domestic animals / Brody S. - N.Y.: Hafner, 1945. - 1023 p.
9. Cooke S. Objective assessment of temperature maintenance using in vitro culture techniques / S. Cooke, J.P.P. Tyler, G. Driscoll // J. of Assisted Reprod. and Genetics. - 2002. - Vol. 19, №8. - P. 368-375.
10. Ju J.C. Nuclear and cytoskeletal alterations of in vitro matured porcine oocytes under hyperthermia / J.C. Ju, J.K. Tseng // Mol. Reprod. and Dev. - 2004. - Vol. 68, Is. 1. - P. 125133.
11. Koike T. In vitro culture with a tilting device in chemically defined media during meiotic maturation and early development improves the quality of blastocysts derived from in vitro matured and fertilized porcine oocytes / T. Koike, K. Matsuura, K. Naruse, H. Funahashi // J. Reprod. Dev. - 2010. - Vol. 56, №5. - P. 552 - 557.
12. Effects of in vitro fertilization conditions on preimplantation development and quality of pig embryos / D.B. Koo, Y.J. Kim, I. Yu et al. // Anim. Reprod. Sci. - 2005. - Vol. 90, Is. 12. - P. 101-110.
13. Krisher R.L. Oocyte Physiology and Development in Domestic Animals / Krisher R.L. - John Wiley & Sons, 2013. - 248 c.
14. Marangos P. Ca2 oscillations at fertilization in mammals are regulated by the formation of pronuclei / P. Marangos, G. Fitzharris, J. Carroll // Development. - 2003. - Vol. 130. - P. 1461-1472.
15. Ozil J.P. Role of calcium oscillations in mammalian egg activation: experimental approach /
16. Ozil J.P. Egg activation events are regulated by the duration of a sustained [Ca (2 )] (cyt.) signal in the mouse / J.P. Ozil, S. Markoulaki, S. Toth et al. // Dev. Biol. - 2005. - Vol. 282. - P. 39-54.
17. Petters R.M. Culture of pig embryos / R.M. Petters, K.D. Wells // J. Reprod. Fertil. - 1993. - Suppl. 48. - P. 61-73.
18. Saunders C.M. PLC zeta: a sperm - specific trigger of Ca (2 ) oscillations in eggs and embryo development / C.M. Saunders, M.G. Larman, J. Parrington et al. // Development. - 2002. - Vol. 129, N. 15. - P. 3533-3544.
19. Shi D.S. Effects of temperature gradients on in vitro maturation of bovine oocytes / D.S. Shi, B. Avery, T. Greve // Theriogenology. - 1998. - Vol. 50, №4. - P. - 667-674.
20. Suzuki H. Influence of incubation temperature on meiotic progression of porcine oocytes matured in vitro / H. Suzuki, Y. Takashima, K. Toyokawa // J. Mamm. Ova Res. - 2001. - Vol. 18. - P. 8-13.
21. Tseng J.K. In vitro thermal stress induces apoptosis and reduces development of porcine /
J.K. Tseng, P C. Tang, J.C. Ju // Theriogenology. - 2006. - Vol. 66 (5). - P. 1073-1082.
22. Heat shock at the germinal vesicle breakdown stage induces apoptosis in surrounding cumulus cells and reduces maturation rates of porcine oocytes in vitro / Y. Yuan, Z.D. Hao, J. Liu et al. // Theriogenology. - 2008. - Vol. 70. - Is. 2. - P. 168 - 178.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
