Розробка методу діагностики інфекційного ларинготрахеїту і хвороби Ньюкасла за допомогою флуоресцентних зондів - Автореферат

Українська академія аграрних наук Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наукЗахист відбудеться "22" червня 1999 р. о 17-00 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 64.359.01 при Інституті експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН (310023, Харків-23, вул. З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Інституту експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН (310023, Харків-23, вул. У роботі вперше досліджено накопичення вірусу інфекційного ларинготрахеїту і вірусу ньюкаслської хвороби при співкультивуванні на курячих ембріонах. Отримані результати вивчення особливостей культивування вірусу інфекційного ларинготрахеїту на курячих ембріонах були використані при конструюванні живої ліофілізованої вакцини зі штаму ВНДІХП-У проти інфекційного ларинготрахеїту. Показано, що метод флуоресцентних зондів дозволяє значно прискорити індикацію збудників інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби птиці у порівнянні з іншими лабораторними тестами.Серед інфекційних хвороб у птахівництві в цей час мають особливе економічне значення інфекційний ларинготрахеїт (ІЛТ) і ньюкаслська хвороба (НХ) (Макогон и др., 1985; Gork et al., 1989; King, 1996). Методи прискореної лабораторної діагностики інфекційних хвороб розвиваються на основі класичних схем вірусологічного аналізу, які зводяться до виділення ізоляту вірусу з наступною ідентифікацією за біологічними, морфологічними та антигенними властивостями. Застосування методу флуоресцентних зондів у порівнянні із стандартними реакціями (РГА, РЗГА, ІФА та ін.) прискорює термін діагностичних досліджень збудників інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби у 10-12 разів, що свідчить про його експресність і, відповідно, надає можливість ветеринарній службі своєчасно не тільки поставити діагноз, але й прогнозувати розвиток епізоотичної ситуації. Для індикації збудників інфекційного ларинготрахеїту і ньюкаслської хвороби в умовах науково-практичних лабораторій розроблено проект "Тимчасової настанови по діагностиці ІЛТ і НХ за допомогою флуоресцентних зондів". Культури клітин: СНЕВ (культура перещеплюваної лінії клітин нирки свиней); ППК-66б (культура перещеплюваної лінії клітин нирок поросят); ПСГК-30 (культура перещеплюваної лінії клітин нирки сибірського гірського козерогу); ФЕК (первинно трипсинізована культура фібробластів курячих ембріонів); ВНК-21 (культура перещеплюваної лінії клітин нирки новонародженого сірійського хом?ячка); ПК (культура перещеплюваної лінії клітин нирки великої рогатої худоби); Vero (культура перещеплюваної лінії клітин нирки зеленої мавпи); МК (культура перещеплюваної лінії клітин макаки-резуса); ПТ (культура перещеплюваної лінії клітин нирки телят); Hep-2 (культура перещеплюваної лінії клітин епітеліоїдного раку гортані людини); Hela (культура перещеплюваної лінії клітин епітеліоїдного раку шийки матки людини); RH (культура перещеплюваної лінії клітин нирки ембріона людини).Що стосується патогенності вірусу у відношенні до курячих ембріонів, слід відзначити, що при зараженні штамом Г реєстрували підвищення рівня загибелі ембріонів із збільшенням кількості проведених пасажів, та підвищенням інфекційного титру вірусу з 5,3 до 6,8 lg ЕІД 50/0,2 см?. При проведенні дослідів по співкультивуванню було встановлено, що макроскопічні зміни у вигляді великих і дрібних некротичних ділянок на хоріоналантоїсних оболонках, характерних для розвитку вірусу інфекційного ларинготрахеїту, визначали тільки у ембріонів, заражених вірусом інфекційного ларинготрахеїту нативним (5,3 lg ЕІД 50/0,2 см?) і у розведенні до 10-3 (2,3 lg ЕІД 50/0,2 см?). Як свідчать отримані дані, при інокуляції нативного вірусу інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби у розведеннях 100-10-5 коливання загибелі курячих ембріонів становили від 100 до 20%. Зокрема, при введенні суміші, яка включала вірус ІЛТ у розведенні 10-1-10-2 та вірус НХ - 10-3-10-5, загибель ембріонів не реєстрували. Після співкультивування вірусів інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби, матеріал з ембріонів досліджували у РЗГА для індикації збудників інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби, а при відсутності одного з антигенів, додатково - у ІФА і МФЗ, а також на КЕ після обробки матеріалу сироваткою, гомологічною виділеному вірусу.Застосування методу флуоресцентних зондів у порівнянні із стандартними тестами (реакції гемаглютинації, затримки гемаглютинації, імуноферментний аналіз та інші) значно прискорює термін діагностичних досліджень збудників інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби, що зумовлено його високою специфічністю та чутливістю, високою швидкістю отримання результатів, можливістю ідентифікації збудників ІЛТ та НХ при моно-і асоційованих інфекціях. Досліджено нові флуоресцентні зонди, серед яких за фотометричними показниками найбільш ефективним для діагностики інфекційного ларинготрахеїту та ньюкаслської хвороби є ДСП-13 у кінцевій концентрації 20 МКМ.