Роль ендоплазматичного ретикулуму у регуляції внутрішньоклітинної Са2 -сигналізації та функціонування ацинарних клітин підщелепної слинної залози - Автореферат

ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ІВАНА ФРАНКААвтореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук Робота виконана у Львівському національному університеті імені Івана Франка Міністерства освіти і науки України. Федірко Наталія Вікторівна, Львівський національний університет імені Івана Франка Захист відбудеться “26 ”грудня 2005 року о 1500 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради К 35.051.14 у Львівському національному університеті імені Івана Франка за адресою: 79005, м. З дисертацією можна ознайомитись у науковій бібліотеці Львівського національного університету імені Івана Франка за адресою: 79005, м.Зокрема, секреція рідкого компоненту слини ацинарними клітинами підщелепної слинної залози знаходиться виключно під холінергічним контролем, який опосередковується шляхом підвищення концентрації іонізованого кальцію у цитоплазмі ([Са2 ]i) клітин (Putney, 1986; Baum et al., 1993; Cook et al., 1999; Skryma, 2000). Мета роботи полягала у вивченні функціонування Са2 -транспортних систем внутрішньоклітинних депо Са2 в ацинарних клітинах підщелепної слинної залози та зясуванню особливостей їх регуляції. Вивчити роль мітохондрій у регуляції [Са2 ]і-сигналізації в ацинарних клітинах підщелепної слинної залози. Вперше проведено комплексне дослідження механізмів функціонування Са2 -каналів мембрани ЕР ацинарних клітин підщелепної слинної залози щурів та їх взаємодії з іншими Са2 -транспортними системами. Вперше проведено реєстрацію зміни [Са2 ]ЕР в ацинарних клітинах підщелепної слинної залози при активації INSP3-чутливих рецепторів та досліджено механізми модуляції їх активності.Отже, зміни слиновиділення in vivo та вмісту кальцію у клітинах in vitro свідчать про те, що холінергічна стимуляція слиновиділення підщелепною слинною залозою опосередковується змінами Са2 -гомеостазу в ацинарних клітинах. Оскільки секреція екзокринними клітинами ініціюється підвищенням [Са2 ]і, опосередкованим, в основному, вивільненням Са2 з ЕР, то для дослідження функціонування Са2 -транспортних систем внутрішньоклітинних органел ми пермеабілізували ПМ клітини з використанням неіонних детергентів дигітоніну та b-есцину. Динаміка змін сумарного вмісту кальцію у клітинах та секреції ними білка мала дзвоноподібний вигляд з максимумом при концентрації дигітоніну 20-50 мкг/мл протягом перших 5 хв його дії. Виявилось, що після спустошення депо тапсигаргіном АХ (5 мкмоль/л) викликав додаткове підвищення сумарного вмісту кальцію ще на 38 ± 3 % (р<0,01; n=8) в інтактних клітинах (рис.3А) і зменшення ще на 38 ± 7 % (р<0,01; n=9) - у пермеабілізованих (рис.3Б), яке повністю елімінувалось гепарином - блокатором INSP3-чутливого вивільнення Са2 . У зафарбованих фура 2/AM клітинах тапсигаргін викликав підвищення [Ca2 ]і, максимальне на 20 хв дії, яке у кальцієвмісному середовищі було платоподібним з амплітудою 112 ± 11 нмоль (n=8, рис.4), а у безкальцієвому - транзиєнтного характеру (амплітуда 51 ± 14 нмоль/л (n=6).У дисертації відповідно до поставленої мети та завдань проведено дослідження функціонування Са2 -транспортних систем мембран внутрішньоклітинних органел ацинарних клітин підщелепної слинної залози та зясовано механізми вивільнення Са2 з ЕР, що дозволяє значно розширити уявлення про роль ЕР у Са2 -сигналізації та функціонуванні секреторних клітин слинних залоз. На основі аналізу змін параметрів слиновиділення in vivo та сумарного вмісту кальцію in vitro показано, що холінергічна стимуляція призводить до кальційзалежних змін у функціонуванні ацинарних клітин підщелепної слинної залози щурів. Виявлено, що в ацинарних клітинах підщелепної слинної залози функціонують два типи INSP3-чутливого депо Са2 : тапсигаргінчутливе та тапсигаргін-нечутливе.