Роль адреномедуллина и его рецепторов в функционировании эндотелиальной клетки человека (в норме и при некоторых патологиях) - Автореферат

Роль адреномедуллина и его рецепторов в функционировании эндотелиальной клетки человека (в норме и при некоторых патологиях) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наукРабота выполнена в ГУ "Научный центр медицинской экологии" Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения РАМН, Оксфордском Университете (г. Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор Гутник Игорь Нэрисович доктор медицинских наук, профессор Семинский Игорь Жанович доктор биологических наук Попкова София Марковна Защита состоится 26 октября 2007 г. в 14 часов на заседании Диссертационного Совета Д.001.054.01 при ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского Отделения Российской академии медицинских наук» по адресу: 664003, г Иркутск, ул. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского Отделения Российской академии медицинских наук»Одной из современных задач в “транслировании” (применении в практике для терапии человека) данных открытий в области исследования механизмов ангиогенеза и лимфангиогенеза на животных является проверка роли известных и новых факторов в биологии эндотелиальных клеток человека и выявление механизмов регулирующих экспрессию и функцию их рецепторов, а также определение их потенциальной роли в патогенезе опухолевых и сердечно-сосудистых заболеваний [Nikitenko et al., 2006]. В связи с этим неизвестными оставались как роль АМ и его рецепторов в тканях человека, так и возможности их использования для лечения раковых и других заболеваний [Nikitenko et al., 2006]. Трудности в данной области обусловлены отсутствием системного подхода в анализе экспрессии и функции факторов ангиогенеза и их рецепторов in vitro и in vivo в клетках и тканях человека. Исходя из этого, целью данного исследования являлось оценка роли пептида адреномедуллина (АМ) в биологии эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека и механизмов регулирующих экспрессию и функцию его рецепторов в норме и при некоторых патологиях на основе комплексного морфофункционального и молекулярно-генетического исследования. 7. исследовать роль адреномедуллина и его рецепторов в ангиогенезе при развитии раковых опухолей и патологических заболеваний органов репродукции, путем изучения экспрессии пептида и локализации функциональной формы CL рецептора в тканях человека в норме и при патологии (в опухолях почек и яичников и тканях саркомы Капоши).Нами были выбраны эндометрий и миометрий человека для разработки методов получения ЭКМР и изучения роли адреномедуллина, поскольку физиологический ангиогенез характерен для тканей матки и предварительные данные экспериментов проведенных в нашей лаборатории указывали на возможную роль данного пептида в этих тканях [Hague et al., 2000]. UEA1 селективно распознает эндотелиальные клетки непосредственно в тканях (Рисунок 2), путем связывания с фукозой на поверхности этих клеток. ЭКМР эндометрия имели морфологию типичную для клеток данного типа (Рисунок 2) с большим ядром, заметным контактным ингибированием в точках соприкосновения и отсутствием наползания клеток друг на друга при достижении конфлюенции. Фордом и коллегами [MCLATCHIE et al., 1998] было показано, что G-белок связывающий рецептор Calcitonin receptor-like receptor (CRLR, впоследствии переименованный в CALCRL ген и CL рецептор в соответствии с номенклатурой Геномного Проекта Человека и Фармакологического Союза, соответственно) путем формирования гетеродимера с одним из трех RAMPS (белков модифицирующих активность рецепторов) образует рецепторы для нескольких пептидов кальцитониновой группы. Поскольку специфическая экспрессия CALCRL гена наблюдается в эндотелиальных клетках (Рисунок 5), но промотер может быть активен и в других клетках [Ramadass et al.,2007], это подтверждает ранее вынесенное предположение, что организация (трехмерная структура) данного гена различается в транскрипционно-пермиссивных (ЭК) и непермессивных (неэндотелиальных клетках) человека.Путем использования лектина Ulex Europeus Agglutinin 1 (UEA1), связанного с магнитными шариками, разработаны методы выделения чистых популяций эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла эндометрия и миометрия матки человека, как органов в которых происходят процессы физиологического ангиогенеза, а также методы культивирования первичных культур данных клеток, позволяющие изучать роль ангиогенных и других факторов в их биологии. Доказана роль нового ангиогенного фактора адреномедуллина в биологии эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека путем демонстрации его влияния на пролиферацию и миграцию этих клеток, а также ингибирование апоптоза и регуляцию проницаемости эндотелиального монослоя. Продемонстрированы влияние гипоксии на активность промотера CALCRL гена человека и роль онкогенного вируса саркомы Капоши на экспрессию CL рецептора в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ