Эффективность применения рекомбинантных белков p30 и р72 вируса африканской чумы свиней при исследовании антителообразования при различных формах течения болезни. Установление источников персистенции вируса при проведении эпизоотологического мониторинга.
РЕКОМБИНАНТНЫЕ БЕЛКИ В изучении африканской чумы свиней Казакова Анна Сергеевна аспирантСтатья посвящена анализу эффективности применения рекомбинантных белков p30 и р72 вируса африканской чумы свиней (АЧС) при исследовании антителообразования при различных формах течения болезни, а также уровня антител к вирусу АЧС в сыворотках крови животных при остром и хроническом течении болезни методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (непрямого ТФ ИФА) Африканская чума свиней (АЧС) - вирусная болезнь, характеризующаяся высокой летальностью и контагиозностью, сверхострым, подострым, острым и хроническим течением. Белки p22, p12 и p54 - трансмембранные: р22 выявляется на плазматической мембране инфицированных клеток на раннем этапе репродукции вируса, а р12 и р54 являются поздними белками [11]. Ложноотрицательные результаты в иммунологических реакциях при выявлении антигенов совпадают с пиком титра специфических антител к вирусу АЧС. Сконструированные продуценты рекомбинантных белков р30 и р72 вируса АЧС позволили получать их очищенные препараты, которые в дальнейшем были использованы для выявления антител к вирусу АЧС в сыворотках крови животных при остром и хроническом течении болезни методом непрямого ТФ ИФА.Продуцент рекомбинантного р72 был получен посредством направленного клонирования ПЦР-продукта гена B646L, кодирующего белок р72 вируса АЧС штамма Magadi в плазмиде PET23b (Novagen) [3]. При подборе основных параметров сенсибилизации планшет было экспериментально установлено, что оптимальным условием сорбции рекомбинантного белка р30 является сенсибилизация на ЗФР с PH 7,0-7,2 в течение 2 часов при температуре 37 °С или в течение 15 часов при 4 °С в дозе 100-150 нг на лунку, а рекомбинантного белка р72 - сенсибилизация на ФБР с 2М мочевины с PH 8,0 в течение 4 часов при температуре 37 °С или в течение 15 часов при 4 °С, в дозе 250-300 нг на лунку. С целью определения чувствительности метода непрямого ТФ ИФА на основе рекомбинантных белков вируса АЧС для выявления антител планшеты сенсибилизировали различными препаратами антигенов. Таким образом, испытания рекомбинантных белков р30 и р72 в качестве диагностических антигенов показали их специфичность при выявлении антител в референс-сыворотках крови свиней к вирусу АЧС I, II, III, IV серотипов. Затем отбирали кровь на 5-10 сутки после заражения и селезенку от павших животных и исследовали наличие антител к белкам р72 и р30 вируса АЧС методом непрямого ТФ ИФА.В результате исследований были получены рекомбинантные клоны E.coli, стабильно экспрессирующие р30 и р72 вируса АЧС. Их использование в ТФ ИФА в 4-8 раз повышает чувствительность метода и позволяет выявлять специфические антитела к вирусу АЧС у животных с 5-7 суток после заражения.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
