Разработка мишеней для терапии колоректального рака на основе функциональной геномики - Автореферат

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наукРабота выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении "Медико-генетический научный центр" Российской академии медицинских наук Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет им.А.И. Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Первый Московской государственный медицинский университет им. Защита состоится "____"________ 2013г. в _____ часов на заседании Диссертационного ученого совета Д 001.016.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении "Медико-генетический научный центр" Российской академии медицинских наук (115478, Москва, ул. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения "Медико-генетический научный центр" Российской академии медицинских наук по адресу: 115478, Москва, ул."Выключение" генов - ингибиторов апоптоза и генов, участвующих в контроле целостности генома, должно приводить к запрограммированной гибели раковой клетки, особенно в условиях индукции апоптоза при воздействии химиопрепарата. Исследование таких генов имеет как фундаментальное значение, с точки зрения выявления функции генов в норме и при злокачественной трансформации, так и практическое значение, заключающееся в создании новых лекарственных средств. Задачи исследования: 1) На модели культивируемых клеток колоректального рака с мутацией в гене АРС с использованием малых интерферирующих РНК изучить значение экспрессии гена c-MYC для жизнеспособности раковых клеток. Выявлено, что ингибирование функциональной активности гена c-MYC с помощью малых интерферирующих РНК приводит к апоптотическому эффекту в клетках колоректального рака с мутацией в гене АРС, но не эффективно для клеток рака этой локализации без мутации в гене АРС. На основании исследования профилей экспрессии генов в клетках колоректального рака с мутацией в гене АРС выявлены потенциальные мишени терапевтического воздействия - гены Birc3, Birc7 и MCM4.В предшествующих экспериментах показано, что через 24 и 48 часов после введения оксалиплатина происходит повышение экспрессии генов, отвечающих на оксалиплатин (Seetharam R. et al., 2010). Изучен функциональный ответ генов на оксалиплатин для выявления потенциальных генов-мишеней, ингибирование которых должно давать наибольший эффект гибели раковых клеток. Нас интересовали гены, отвечающие на химиопрепаты, содержащие платину, в особенности на оксалиплатин. В сформированную панель вошли гены: гены BIRC - семейства (baculoviral IAP repeat-containing proteins) - из группы ингибиторов апоптоза (Birc2, Birc3, Birc4, Birc5, Birc7) (Fulda S et al., 2012), ингибитор каспазы 8 - FLIP (FLIP, длинная и короткая изоформы) (FLIP, SCFL, LF) (Mannhold K. et al., 2010), гены семейства Bcl-2 (Bcl-2, Bcl-XL) (Portt L. et al., 2011); Рис.11 Сводная диаграмма объединяющая эффекты апоптоза (доля апоптотических клеток,%) в контрольных образцах, при ингибировании отдельных генов Birc3, Birc7 и МСМ4 и их комбинаций ничем не обработанные клетки клетки, обработанные МИРНК со случайной последовательностью нуклеотидов клетки, обработанные оксалиплатином 1 МКМ клетки, обработанные МИРНК со случайной последовательностью нуклеотидов оксалиплатин 1 МКМ. клетки, обработанные оксалиплатином 5 МКМ клетки, обработанные МИРНК со случайной последовательностью нуклеотидов оксалиплатин 5 МКМ. апоптотический эффект от подавления гена Birc3 апоптотический эффект от подавления гена Birc7 апоптотический эффект от подавления гена МСМ4 апоптотический эффект от подавления комбинации генов Birc3 Birc7 апоптотический эффект от подавления комбинации генов Birc3 MCM4 апоптотический эффект от подавления комбинации генов Birc7 MCM4Показано, что ингибирование с помощью МИРНК гена с-MYC, активирующегося вследствие мутации в гене АРС в культуре клеток колоректального рака НТ-29, приводит к апоптозу клеток на уровне 15-17 %. В культуре клеток колоректального рака Сасо2 без мутации в гене АРС, уровень экспрессии гена с-MYC существенно ниже и при его ингибировании апоптоз практически не развивается. Показано, что ингибирование малыми интерферирующими РНК генов Birc3, Birc7 и MCM4 при 5 МКМ оксалиплатина приводит к апоптозу клеток колоректального рака НТ-29 на уровнях 40%, 50% и 60%, соответственно.