Разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в производственной упаковке (ампуле) - Автореферат

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ Работа выполнена в Федеральном здравоохранения Ставропольском противочумном институте государственном учреждении научно-исследовательском Научный руководитель: доктор медицинских наук, Будыка Дмитрий Александрович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Яговкин Эдуард Александрович доктор медицинских наук Базиков Игорь АлександровичС другой стороны, изменение параметров вакцины чумной живой сухой касается не только густоты вакцинной суспензии, что отражается на количественном соотношении микробных клеток и стабилизатора, но и уменьшенного объема вакцины в ампуле. Цель исследования: разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человеко-доз в производственной упаковке, соответствующей качественным требованиям регламента производства для чумной вакцины (№1542-04) и имеющей экономический эффект при одновременной иммунизации небольших групп людей. Определить в эксперименте качественные преимущества вакцины чумной живой сухой с концентрацией микробных клеток в суспензии 1·1010 - 4·1010, разлитой в объеме 1 мл в ампуле, перед коммерческим препаратом. Разработать и внедрить в производство вакцины чумной живой сухой на этапе сведения и разлива методологию получения препарата с меньшим числом подкожных (внутрикожных) человеко-доз в ампуле (20-50), отвечающей качественным требованиям нормативной документации. Впервые отработана и внедрена в биотехнологию производства вакцины чумной живой сухой и соответственно в нормативную документацию концентрация микробных клеток в вакцинной суспензии (1-4) · 1010 в объеме 1мл в ампуле.Материалом для выполнения диссертационной работы служили: коммерческая и экспериментальная вакцины чумные живые сухие из штамма ЕВ (13 серий), приготовленные в производственном отделе и научно-производственной лаборатории чумных вакцин Ставропольского НИПЧИ. Получение экспериментальных серий вакцины чумной живой сухой производили следующим образом: в матрацы с 300 мл агаровой среды засевали по 5 мл двухсуточной субкультуры штамма ЕВ в количестве 108 м.к./мл среды. Полученную бакмассу смывали глютаминовым (10% сахарозы, 1% желатины, 1,5% глютаминово-кислого натрия, 0,5% тиомочевины и 0,05% пептона) или тиомочевиновым (10% сахарозы, 1% желатины, 1% тиомочевины) стабилизаторами (СЖГТП и СЖТ), доводили оптическую концентрацию вакцинной суспензии до 1-4•1010 м.к./мл, разливали по 1 мл, замораживали в течение 1 сут при минус 50 °С и лиофилизировали в установке LZ-45 18-20 ч при температуре подогрева материала, не превышающей 28 °С. Экспериментально-производственные серии вакцины чумной живой сухой с расчетным, десятикратно сниженным числом доз в ампуле, готовили в процессе производственного выпуска коммерческого препарата вакцины чумной живой сухой, согласно требованиям регламента производства "Вакцина чумная живая сухая" № 1542-04 с соответствующими поправками на этапе получения микробной суспензии.Сравнительная характеристика жизнеспособности экспериментальных (33,4 1,3)% и контрольных (26,8 0,6)% образцов чумной вакцины показала, что во все исследуемые сроки этот показатель был достоверно выше у вакцины со сниженной концентрацией микробных клеток. Это послужило основанием для разработки биотехнологии и получения экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле в условиях производственного цикла. Тарасевича) с меньшим, по сравнению с регламентированным, количеством доз в ампуле в условиях производства вакцины в АКМ-Ш поверхностным методом выращивания с использованием всех регламентированных технологических этапов (действующая нормативная документация (НД), и отличающихся тем, что на этапе сведения вакцинной суспензии концентрацию микробных клеток доводили у части суспензии до параметров (1-4) · 1010 м.к. в 1 мл путем дополнительного внесения расчетного количества стабилизатора. Результаты показали соответствие по изучаемым параметрам экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой действующей НД. При этом, с пролонгированием процесса сушки для экспериментально-производственных серий вакцины с объемом микробной суспензии в ампуле 1,0 мл вакцин до 26 0 часов (регламентированное время), существенно уменьшалась потеря в массе при высушивании таблетки, составив 1,02 0,23% вместо 2,65 0,07% у коммерческой вакцины, но жизнеспособность этой вакцины оставалась на прежнем уровне, не снижаясь после 18 час лиофилизации.Впервые разработана производственная биотехнология вакцины чумной живой сухой с содержанием 20-50 человеко-доз в ампуле, полностью соответствующей требованиям регламента производства для чумной вакцины (№1542-04). Использование на этапе сведения вакцины, выращенной на плотных питательных средах в АКМ-Ш, добавляемого расчетного количества глютаминового или тиомочевинового стабилизатора обеспечивает получение вакцинной суспензии, содержащей 1-4 · 1010 м.к.