Выявление путей совершенствования вакцины чумной живой на этапах сведения, разлива и лиофилизации бактериальной суспензии. Сравнение образцов вакцины в зависимости от параметров суспензии по критериям жизнеспособности, термостабильности, иммуногенности.
При низкой оригинальности работы "Разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в производственной упаковке (ампуле)", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКОДОЗ В ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ УПАКОВКЕ (АМПУЛЕ)-иммунизирующая доза, защищающая 50% зараженных животных -живые микробные клетки -лаборатория биолого-технологического контроля-минимальное значениеМноголетний опыт использования вакцинации как средства специфической профилактики особо опасных инфекций свидетельствует о сохранении ее весомой роли (Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В., 2004). Один из таких препаратов представляет собой вакцину из штамма ЕВ чумного микроба. 6 вакцин, метод лиофильного высушивания не способен обеспечить полной и длительной стабилизации свойств биообъектов, в том числе и чумной вакцины. Цель исследования: разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человекодоз в производственной упаковке, соответствующей качественным требованиям регламента производства для чумной вакцины (№1542-04) и имеющей экономический эффект при одновременной иммунизации небольших групп людей. Разработать и внедрить в производство вакцины чумной живой сухой на этапе сведения и разлива методологию получения препарата с меньшим числом подкожных (внутрикожных) человекодоз в ампуле (20-50), отвечающей качественным требованиям нормативной документации.Многолетний опыт использования вакцинации как средства специфической профилактики особо опасных инфекций в системе противоэпидемических мероприятий свидетельствует о сохранении ее весомой роли (Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В., 2004). По характеру антигена и принципу его получения все вакцины классифицируются на живые и инактивированные. Алексеева (1997) отмечает возможность использования Ф1, выделенной из клеточной стенки чумного микроба по методу Бейкера, для усиления свойств вакцины в связи с ее нетоксичностью, возможностью получения в достаточно чистом виде и в большом количестве. Несмотря на наличие широкого спектра антигенов у чумного микроба, для создания новых вакцин, а также для усиления действия используемой в настоящее время вакцины, наиболее эффективными оказались капсульный антиген и полисахаридсодержащие антигены (Шмеркевич Д.Л., 1967; Дальвадянц С.М., 1990; Лешкович Л.И., 1975; Glosnicka R., 1980; Michel P. с соавт., 1992; Grosfeld H. с соавт., 2003). Анисимов (2001) отмечают, что штамм Y.pestis КМ 276 с синтезом основного протективного антигена возбудителя чумы-Ф1, повышенным относительно уровня продукции других - «балластных» антигенов, может служить основой для разработки новой вакцины живой чумной, как и штамм S.minnesota R595PAE1(KM 139), обеспечивающий стабильное наследование и экспрессию признака Fra, может служить основой для разработки новой рекомбинантной живой вакцины для оральной противочумной иммунизации.2.1 МатериалыМатериалом для выполнения экспериментальной части работы служили: коммерческая и экспериментальная вакцины чумные живые сухие из штамма ЕВ (20 серий), приготовленные в производственном отделе и научно-производственной лаборатории чумных вакцин Ставропольского НИПЧИ. Штамм ЕВ полностью соответствует регламенту производства вакцины чумной живой сухой (2004), его характеристика представлена в таблице 1. Животных содержали в стеклянных банках объемом 10-12 л по 1 морской свинке или по 8 белых мышей, или же в специальных ящиках. Питательные агары, применяемые для определения количеств живых микробных клеток в вакцине, должны обеспечивать без добавления стимуляторов рост чумных микробов штамма ЕВ на всех чашках с агаром, засеянных 10 микробными клетками. Вакцина должна быть безвредной при подкожном введении морской свинке массой (275 25) г под кожу бедра 1,5 х 1010 микробных клеток чумного микроба; не должна вызывать у животных потери массы к 6 сут после введения более чем на 1/5 и видимых патологоанатомических изменений в легких, свойственных специфическому инфекционному процессу (кровоизлияний, очаговКаждый этап изготовления чумной вакцины регламентирован нормативно-технической документацией (ФС, РП), но на практике наблюдается довольно широкая вариабельность значений ряда показателей (жизнеспособность, термостабильность, потеря в массе при высушивании, иммуногенность и т.д.) у различных товарных серий препарата. Концентрация микробных клеток в препарате вакцины чумной живой сухой, ресуспендированном в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида (общий объем в ампуле 2 мл), согласно действующей НД, должна быть в пределах от 5?1010 до 1?1011 в мл, что в среднем при допустимой жизнеспособности (не ниже 25 % живых м. к.) обеспечивает содержание от 100 до 200 подкожных доз в ампуле.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………….. 13 1.1 Современное состояние и перспективы совершенствования 13 эффективности чумных вакцин………………………………… 1.2 Оптимизация этапов биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой…………………………………………… 21 1.2.1 Некоторые вопросы управляемого культивирования биомассы вакцинного штамма ЕВ…………………………….. 21 1.2.2 Пути совершенствования биологических показателей вакцины чумной живой на этапах сведения, разлива и лиофилизации бактериальной суспензии……………………… 26
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ………………………………….. 33 2.1 Материалы………………………………………………………... 33 2.2 Методы исследования…………………………………………… 37
Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТА ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБОВ И ОБЪЕМА ВАКЦИННОЙ СУСПЕНЗИИ В АМПУЛЕ ………………… 44
Глава 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ
СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКОДОЗ В АМПУЛЕ ……………………………….. 54
2
4.1 Приготовление посевной культуры, засев маточной культуры в АКМ-Ш, условия культивирования вакцинного штамма чумного микроба………………………………………………… 54 4.2 Смыв бактериальной массы с поверхности агара с последующим приготовлением необходимой концентрации микробных клеток, разлив, лиофилизация вакцины………….. 58
4.3 Некоторые вопросы стабилизации вакtrialй суспензии в производстве вакцины ЕВ в зависимости от условий лиофилизации…………………………trial……………. 61
4.4 Оптимизация параметров вакцинной суспензии в биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой глубинным методом культивирования…………………………. 66
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАРАМЕТРОВ И ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКОДОЗ В АМПУЛЕ И КОММЕРЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА…………. 72
5.1 Сравнительная характеристика образцов вакцины чумной живой сухой в зависимости от параметров вакцинной суспензии по критериям жизнеспособности, термостабильности, иммуногенности………………………….. 72
5.2 Изучение реактогенности различных образцов вакцины чумной живой сухой…………………………………………….. 77
5.3 Оценка экономической эффективности вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человекодоз в ампуле 80 ЗАКЛЮЧЕНИЕ……………………………………………………………. 82 ВЫВОДЫ…………………………………………………………………… 91
3
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………….. 93
4
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
Ф1 -фракция 1 чумного микроба
DCL -абсолютно смертельная доза для экспериментальных зараженных животных
LD50 -доза микроба, вызывающая гибель 50% экспериментально зараженных животных
