Определение методами рентгеноструктурного анализа пространственной структуры 6-ти комплексов фермента SAICAR-синтазы и структурного механизма его каталитического действия. Выявление места и характера связывания всех субстратов в активном центре фермента.
При низкой оригинальности работы "Пространственная структура комплексов и механизм каталитического действия фермента SAICAR-синтазы Saccharomyces cerevisiae", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Пространственная структура комплексов и механизм каталитического действия фермента SAICAR-синтазы Saccharomyces cerevisiae Работа выполнена в Институте кристаллографии имени А.В. Официальные оппоненты: доктор физико-математических наук Лунин Владимир Юрьевич (Институт математических проблем биологии РАН) доктор химических наук Демидкина Татьяна Викторовна (Институт молекулярной биологии РАН)Работа посвящена структурно-функциональному исследованию методами рентгеновской кристаллографии белков малоизученного фермента SAICAR-синтазы. Фермент участвует в многоступенчатом синтезе пуриновых нуклеотидов, играющих важнейшую роль в синтезе нуклеиновых кислот и других метаболических реакциях в живых организмах. Цель работы заключалась в определении методами рентгеноструктурного анализа пространственной структуры 6-ти комплексов фермента SAICAR-синтазы и предложении структурного механизма его каталитического действия. Впервые определены пространственные структуры комплексов фермента SAICAR-синтазы с аспарагиновой кислотой, с аденозинтрифосфатом, с аналогами субстратов AICAR и янтарной кислотой, тройного комплекса с ATP, AICAR и янтарной кислотой, а также с продуктом реакции, SAICAR. Сравнительный анализ структур исследованных комплексов выявил существование «открытой» и «закрытой» форм молекулы фермента, и позволил предложить стереохимическй механизм действия фермента.Кристаллы остальных комплексов получены сокристаллизацией с субстратами из растворов, содержащих белок в концентрации 24-30 мг/мл, 1 М сульфата аммония, 0.04 М аспарагиновой кислоты в 0.5 М Tris-HCL буфере, PH 7.5. Кристаллы всех комплексов SAICAR-синтазы принадлежат к пространственной группе симметрии P212121, содержат одну молекулу в независимой части ячейки и имеют сходные параметры элементарной ячейки (табл. Анализ разностных синтезов электронной плотности показал, что молекула субстрата аспарагиновой кислоты (аспартата) связана в междоменной полости с петлей 39-45, принадлежащей первому домену, и с остатками из первой спирали (остатки 260-270) третьего домена (рис. Анализ карт разностной электронной плотности в исследованных комплексах показал, что в молекуле SAICAR-синтазы есть два места связывания молекулы ATP, на рис. Анализ разностной электронной плотности позволил определить, что молекула янтарной кислоты в (SS AICAR SUC) располагается напротив молекулы AICAR, в месте связывания аспарагиновой кислоты в комплексе (SS ASP) (Рис.3, место А).
План
2. Краткое содержание диссертации
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
