Промышленные технологии изготовления компонентов моно- и комплексных диагностикумов инфекционных заболеваний животных - Автореферат

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наукРабота выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» РАСХН Научный консультант: доктор биологических наук Клюкина Валентина Ивановна Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Цыбанов Содном Жамьянович; Защита состоится «26» декабря 2008 года в 10 часов на заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук Д 006.069.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский р.-н., пос.Оперативный анализ структуры заболеваний, определение этиологической роли каждого возбудителя в условиях ассоциативных форм инфекций предполагает использование ИФА как метода комплексной дифференциальной диагностики в составе поликомпонентных диагностических тест-систем. Несмотря на то, что диагностика многих моно - инфекций решена на уровне практического применения наборов ИФА, ветеринарная практика России не располагает диагностическими наборами для проведения комплексного дифференциального серологического мониторинга респираторных инфекций крупного рогатого скота. На основе иммунохимически охарактеризованных специфических реагентов разработан метод комплексного непрямого твердофазного ИФА для выявления специфических антител к антигенам вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС, РС и АВ инфекций в биологических жидкостях организма крупного рогатого скота и оптимизированы условия его проведения при исследовании сывороток крови животных, взятых в одном разведении. Результаты проведенных исследований позволили разработать «Методические рекомендации по определению уровня специфических антител к антигенам вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальной инфекции (РС), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), аденовирусной инфекции (АВИ) крупного рогатого скота в комплексной тест-системе иммуноферментного анализа (ИФА)», рассмотренные и одобренные 21 сентября 2007 года на методической комиссии ВНИТИБП и на секции «Ветеринарная биотехнология» ОВМ РАСХН, протокол №1; Временную инструкцию по изготовлению набора реагентов для определения уровня антител к антигенам вирусов парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи-болезни слизистых, респираторно-синцитиальной и аденовирусной инфекций крупного рогатого скота в иммуноферментном анализе и проект нормативной документации. Внедрение в практику ветеринарии иммуноферментного набора для определения уровня антител к антигенам вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи-болезни слизистой, респираторно-синцитиальной и аденовирусной инфекций позволит решить проблему массового серологического обследования поголовья КРС, составляющего основу мероприятий по ликвидации и предупреждению распространения данных заболеваний.Применение полиэлектролитов позволило получить антирабические сыворотки с титром специфических к вирусу бешенства антител к 6-му циклу введения вируса в 2-4 раза выше в сравнении с контролем. Изучение методом ИФА изменения спектра антирабических антител на разных стадиях иммунизации показало, что после 2-х циклов введения вируса в сыворотках крови барана и собаки титры антител к гликопротеину составили 1:800-1: 1600, к белкам нуклеокапсида-1:200-1:400. Для концентрирования РС-вируса также был использован принцип осаждения вируса высаливанием. Суммируя результаты экпериментов по концентрированию и очистке РС-вируса, штамм «Randall», репродуцированного в культуре клеток ЛЭК, можно заключить, что осаждение вируса ПЭГ с молекулярной массой 6000 Д в концентрации 7% наиболее оптимальный способ для первоначального концентрирования и очистки, так как при концентрировании в 100 раз позволяет, во-первых, удалить до 90% баласного белка при потере не более 7% инфекционных частиц вируса, во-вторых, работать единовременно с большим объемом вируссодержащей суспензии. Таким образом, получены препараты РС-вируса, штамм «Randall», репродуцированного в культуре клеток ЛЭК, которые использовались для изучения белкового состава вируса, выделения гликопротеинов, обладающих антигенной активностью, с целью синтеза иммуносорбента для выделения анти-РС антител из сывороток естественно переболевших животных.Применение эффективных современных отечественных полиэлектролитов в качестве адъювантов и иммуномодуляторов (полиоксидония и вегетана), при сравнении с применяемым ранее, способом получения антирабической сыворотки, выявило следующие преимущества: повышение активации иммунокомпетентных клеток, увеличения антителообразования у животных-продуцентов и повышение выхода и специфической активности антирабической сыворотки, сокращение сроков иммунизации с 90 до 62 дней, за счет исключения этапа подготовки животных к иммунизации и применения одновременных инъекций антигена и полиэлектролитов, и уменьшения расхода антигенного материала.