Принципы создания новых форм лекарственных препаратов и биологически активных соединений солюбилизацией липосомами - Автореферат

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук ПРИНЦИПЫ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ФОРМ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СОЛЮБИЛИЗАЦИЕЙ ЛИПОСОМАМИРабота выполнена на кафедре биотехнологии Московской академии тонкой химической технологии им. Научный консультант: доктор химических наук, профессор, академик РАМН Швец Виталий Иванович Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор, член-корр. РАМН Северин Сергей Евгеньевич доктор химических наук, профессор Левашов Андрей Вадимович доктор химических наук, доцент Чупин Владимир Викторович Защита диссертации состоится «22» октября 2007г в 15 часов на заседании Диссертационного Совета Д 212.120.01 при Московской государственной академии тонкой химической технологии им.В настоящее время с лечением туберкулеза во всем мире сложилась столь неблагополучная ситуация, что Всемирная Организация Здравоохранения объявила в 2003г туберкулез глобальной угрозой жизни человека. В связи с тем, что микобактерия туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis)), вызывающая это заболевание, размножается в основном внутри клеток легочной ткани (макрофагов), представлялось целесообразным использовать такие лекарственные формы, которые были бы способны направленно транспортировать ПТП внутрь этих клеток. Перечисленные выше данные позволяют прогнозировать значительные преимущества липосомальных форм ПТП по сравнению с таблетированными, в связи с чем разработка таких форм представляется весьма актуальной. Она позволит увеличить растворимость ПТП, усилить их проникновение в макрофаги и возможно, окажет дополнительные эффекты, например, снизит токсичность или увеличит время пребывания препарата в организме. Впервые установлено, что бактериоцины, ингибирующие рост бактерий M. tuberculosis в культуральной среде, в липосомальной форме способны подавлять рост M. tuberculosis в макрофагах и увеличивать продолжительность жизни животных, зараженных M. tuberculosis.Для определения оптимальных условий гидролиза фосфолипидов использовали ОВ (система фосфолипиды/вода) и смешанные мицеллы (система детергент/фосфолипиды/вода). При изучении зависимости скорости гидролиза ФЛ разных классов (ФХ, смеси ФХ:ФЭ) от концентрации фосфолипида под действием фосфолипазы С установили, что в системе фосфолипиды/ вода эта зависимость имеет линейный характер (рис.1а). а) б) Стабильность и проницаемость для ионов кальция мембран ОВ, обработанных фосфолипазой С и фосфолипазой А2. ОВ разного липидного состава инкубировали с фосфолипазой С или фосфолипазой А2 и регистрировали во времени оба этих параметра, а также процент гидролиза фосфолипидов. Это означает, что транспорт Са2 внутрь синаптосом происходит по градиенту концентраций и регулируется потенциалом на мембране: в условиях покоя (среда, содержащая 145 ММ NACL, 5 ММ KCL) он незначителен, в условиях, когда трансмембранный потенциал мембран синаптосом близок к нулю (в среде 5 ММ NACL, 145 ММ KCL ) поток Са2 внутрь синаптосом вырастает в 2-3 раза (табл.1).Задачами данного этапа исследований явилась гидрофобизация этих белков путем получения белок-липидных комплексов с препаратами фосфолипидов разного состава и определение ингибирующей активности данных белков в составе комплекса. Исследовали процент связывания этих белков в комплексы с фосфолипидами в различных условиях и ингибирующую активность белков в составе комплексов в отношении трипсина. В связи с тем, что комплексы получали при РН 3,0, при расчете содержания отрицательно заряженных компонентов учитывалось РК фосфолипидов, равное 2,1 и то, что ряд фосфолипидов имеет несколько РК (ФК имеет имеет два РК, равные 2,1 и 7,2 соответственно, а РК1 и РК2 молекулы КЛ равны соответственно 3,0 и 7,4). На рис.6 представлена зависимость содержания исследуемых белков (масс%) в комплексах от содержания в липидных препаратах отрицательно заряженных компонентов. Для всех четырех белков наибольшее содержание белка (70%) наблюдалось в комплексе с препаратом ЛП-1, содержащим наряду с фосфолипидами отрицательно заряженные сапонины и жирные кислоты.Для решения этой задачи на первом этапе работы изучили ряд физико-химических параметров антибиотиков рифампицина и рифабутина, которые эффективно подавляют жизнеспособность возбудителя туберкулеза M. tuberculosis, и их взаимодействие с модельными мембранами в различных агрегационных состояниях (мультиламеллярные везикулы и ОВ) и при разных РН среды. Выбор именно рифампицина в качестве субстанции связан в первую очередь с его более выраженной по сравнению с рифабутином токсичностью. Не последнюю роль сыграли также низкая цена субстанции (по сравнению с рифабутином рифампицин в 10 раз дешевле) и тот факт, что рифампицин является препаратом первого ряда и широко применяется при лечении туберкулеза.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ