Роль полиморфных аллельных вариантов гена ROS1 (rs619203) в развитии инсульта у больных с сердечно-сосудистой патологией. Исследование частоты гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю у больных с острым нарушением мозгового кровообращения.
При низкой оригинальности работы "Предикторы инсульта у больных с сердечно-сосудистой патологией", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наукРабота выполнена на кафедре внутренних болезней №1 ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Шульман Владимир Абрамович Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Прокопенко Семен Владимирович Официальные оппоненты: Репин Алексей Николаевич - доктор медицинских наук, профессор, ФГБНУ «Научно-исследовательский институт кардиологии», руководитель отделения реабилитации больных сердечно - сосудистыми заболеваниями Чумакова Галина Александровна - доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра госпитальной и поликлинической терапии с курсом эндокринологии, профессор кафедрыВ нашем исследовании изучены полиморфизмы генов rs1333049 (хромосома 9p21.3), ROS1 (rs619203), ATP2B1 (rs2681472), MTHFR (rs17367504) у больных с различными вариантами ОНМК (ишемический и геморрагический инсульты). Доказана ассоциативная связь данного полиморфизма с развитием острого коронарного синдрома в популяциях Австралии [Arasaratnam D. et al., 2012], Японии [Hinohara K.et al., 2008], Кореи [Junyent M. et al., 2010], Испании [Zhang Q. et al.,2009], Индии [Bhanushali Японскими авторами было установлено, что полиморфизм rs 619203(G>C (Cys2229Ser) гена ROS1 ассоциирован с тромбоэмболическим инсультом [Yamada Y. et al., 2008].Также полиморфизм rs619203 гена ROS1 изучен у больных с инфарктом миокарда [Anderson J. L. et al., 2010; Koch W., 2011]. Однако в Российской популяции роль полиморфизмов гена ROSI в возникновении ишемического и геморрагического инсультов до настоящего времени не изучалась. Однако в Сибирской популяции изучение ассоциации полиморфных аллельных вариантов этого гена с развитием ишемического и геморрагического инсультов не проводилось.
Список литературы
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы в центральной и местной печати, из них 3 - в рецензируемых журналах, входящих в перечень ВАК РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 160 страницах, иллюстрирована рисунками и таблицами. Она состоит из введения, глав: обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Библиографический указатель включает 76 отечественных и 168 зарубежных источников.
Личный вклад автора
Диссертация является самостоятельным научным трудом, выполненным на базе кафедры внутренних болезней №1 Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого и лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний ФГБУ «НИИ терапии и профилактической медицины» СО РАМН. Автором осуществлялось обследование больных с ОНМК, оценка их клинического состояния, постановка диагноза, проведение клинико-инструментальной и молекулярно-генетической диагностики. Автор самостоятельно проводил терапевтический осмотр, неврологический осмотр совместно с врачом неврологом, электрокардиографию, эхокардиографию, выделение ДНК. Автором проведен поиск и анализ литературы по теме диссертации, статистическая обработка результатов, анализ полученного материала, написание публикаций и диссертации.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Общая характеристика исследуемых групп. Проведено обследование 124 больных с ишемическим инсультом и 28 с геморрагическим (основная группа исследования). Больные находились на лечении в неврологическом центре Федерального государственного бюджетного учреждения здравоохранения «Сибирский клинический центр Федерального медико-биологического агентства» г. Красноярска. Основным критерием включения в основную группу являлся подтвержденный диагноз ишемического или геморрагического инсульта.
Критерии отбора в основную группу: Наличие подтвержденного диагноза ОНМК;
Место основного проживания-г. Красноярск;
Способность больного выполнять необходимые процедуры;
Подписание информированного согласия на исследование.
Критерии исключения: Больные с неуточненным диагнозом ОНМК;
Жители, проживающие вне г. Красноярска;
Пациенты, не способные выполнять необходимые процедуры;
Отказ от включения в исследование.
В соответствии с Хельсинской декларацией, для проведения исследования получено разрешение Локального Этического комитета при Красноярском государственном медицинском университете им. проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого, а также информированное согласие пациентов на проведение молекулярно-генетического исследования.
Согласно цели и задачам исследования больные с ОНМК были подразделены на 2 подгруппы: 1 подгруппа - больные с ишемическим инсультом (124/152 - 81,58%); 2 подгруппа - больные с геморрагическим инсультом (28/152- 18,42%).
В качестве контрольной группы использовали популяционную выборку здоровых лиц, жителей Октябрьского района г. Новосибирска, n = 659, медиана возраста - 56,12 лет [50,51;63,39], обследованных в рамках международного проекта ВОЗ «MONICA» (Мониторинг заболеваемости и смертности от сердечно-сосудистых заболеваний). Основные скрининговые обследования по проекту MONICA проводили следующими методами выявления сердечно-сосудистых заболеваний и факторов риска: измерение артериального давления, антропометрия (рост, масса тела), социально-демографические характеристики, опрос о курении, потреблении алкоголя (частота и типичная доза), уровне физической активности, оценка липидного состава крови (ОХС, ТГ, ХС ЛВП), опрос для выявления стенокардии напряжения (по методике Rose), регистрация ЭКГ в 12 отведениях с оценкой по Миннесотскому коду. Данные генотипирования предоставлены ФГБУ «НИИТПМ» СО РАМН (г. Новосибирск) и получены в рамках договора о сотрудничестве.
Группа сравнения - пациенты с гипертонической болезнью II-III стадии, проходившие лечение на базе второго кардиологического отделения КГБУЗ КМКБ №20 им. И. С. Берзона (г. Красноярск).
Распределение лиц основной группы (ишемический и геморрагический инсульт) по полу, их средний возраст и медиана возраста представлены в таблице 1. В первой подгруппе (больные с ишемическим инсультом) было 124 человека, медиана возраста - 60[51; 66,75] лет, из которых было 75 мужчин, медиана возраста - 57[50; 64,5] лет и 49 женщин, медиана возраста - 63[54; 70] лет.
Во второй подгруппе (пациенты с геморрагическим инсультом) было 28 больных, медиана возраста - 55[47,5; 62] лет, из которых было 17 мужчин, медиана возраста - 55[42; 61,5] лет и 11 женщин, медиана возраста - 55[49; 63] лет (табл. 1).
Таблица 1
Половозрастная характеристика больных с ишемическим и геморрагическим инсультом
Подгруппы Пол ОНМК (n=152)
Количество, n Возраст М±m Min-max [Me; Q25 - Q75]
Ишемический инсульт (n=124) Мужчины 75 57±11,51 25-79 57 [50;64,5]
Женщины 49 60,46±11,04 33-76 63 [54;70]
Суммарно 124 58,41±11,39 25-79 60 [51;66,75]
Геморрагический инсульт (n=28) Мужчины 17 52,35±12,17 30-71 55[42;61,5]
Женщины 11 58,09±11,36 43-80 55[49;63]
Суммарно 28 54,61±11,98 30-80 55[47,5;62]
Таблица 2
Половозрастная характеристика пациентов контрольной группы
Группа Пол Контроль (n=659)
Количество, n Возраст М± m Min-max [Me; Q25 - Q75]
Контрольная группа (n=659) Мужчины 471 55,82±7,19 41-69 55,2 [49,93;62,76]
Женщины 188 58,52±7,42 38-69 61,2[51,9;64,65]
Суммарно 659 56,59±7,36 38-69 56,12[50,51;63,39]
В контрольной группе было 659 человек, медиана возраста -56,12[50,51;63,39] лет, из которых было 471 мужчин, медиана возраста -55,2[49,93;62,76] лет и 188 женщин, медиана возраста -61,2[51,9;64,65] лет (табл. 2).
В таблице 3 представлена половозрастная характеристика группы сравнения.
Таблица 3
Половозрастная характеристика пациентов группы сравнения
Группа Пол Группа сравнения (n=249)
Количество, n Возраст М± m Min-max [Me; Q25 - Q75]
Больные с ГБ без инсульта (n=249) Мужчины 159 55,82±7,19 41-69 55,2 [49,93;62,76]
Женщины 90 58,52±7,42 38-69 61,2[51,9;64,65]
Суммарно 249 56,59±7,36 38-69 56,12[50,51;63,39]
У 124 больных с ишемическим инсультом выявлены следующие сердечно-сосудистые заболевания: у 116 (93,55%) выявлена гипертоническая болезнь III стадии, фибрилляция предсердий диагностирована у 8, что составило 6,45%, ИБС документирована у 20 больных (16,13%) с ишемическим инсультом, ХСН у 17 больных (13,71%). Сахарный диабет 2 типа также выявлен у 17 из 124 больных с ишемическим инсультом (13,71%).
Среди больных геморрагическим инсультом ГБ III стадии встречалась у всех 28 больных (100%). Фибрилляция предсердий, сахарный диабет 2 типа - у 2 пациентов из 28 (по 7,14%), ИБС. ПИКС, ХСН - по 5 человек (5/28) - по 17, 86%.
Методы исследования
Клиническое обследование включало оценку неврологических симптомов, исследование соматического статуса, контроль АД, запись ЭКГ, эхокардиографию, рентгенографию органов грудной клетки, общий и биохимический анализы крови, УЗДС сонных артерий, КТ головного мозга. Анализировались продолжительность, тяжесть и последовательность развития сопутствующих соматических заболеваний и факторов риска. Изучался семейный анамнез, включавший оценку наличия нарушений мозгового кровообращения в анамнезе, наличие артериальной гипертензии, заболеваний сердца (инфаркт миокарда, нарушения ритма, сердечной недостаточности), наличие факторов риска (курение, повышенный ИМТ, отягощенная наследственность, сахарный диабет у больного).
У всех обследуемых был проведен молекулярно-генетический анализ. Молекулярно-генетические исследования проведены на базе лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний ФГБУ «НИИ терапии и профилактической медицины» СО РАМН (г. Новосибирск).
Выделение ДНК проводилось из лейкоцитов периферической крови по стандартной методике. Изучение полиморфных вариантов исследуемых генов проводили с помощью амплификации соответствующих участков генома методом ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе [Воевода М.И. и соавт., 2002; Yudin N.S. et al., 1998; Warzocha К. et al., 1998].
При статистической обработке материала применяли стандартный алгоритм статистических процедур [Афифи А., Эйзен С., 1982; Поллард Д., 1982], при этом методы статистической обработки использовались в зависимости от характера учетных признаков и числа групп сравнения. Для определения характера распределения количественных показателей применялся критерий Шапиро-Уилкса. При отсутствии нормального распределения описательная статистика представлялась в виде медианы и перцентилей. Для определения значимости различий при множественном сравнении использовали критерий Крускала-Уоллиса, для попарного сравнения - критерий Манна-Уитни. При нормальном распределении показателей описательная статистика представлена в виде среднего значения и стандартной ошибки среднего. Достоверность различий нормально распределенных показателей в сравниваемых группах определялась с использованием критерия Стьюдента (t-критерия).
Качественные критерии представлены в виде процентных долей со стандартной ошибкой доли. Для определения статистической значимости отличий между качественными признаками применяли критерий хи-квадрат (?2). При частотах менее 5 использовали точный критерий Фишера. Сила связи между изученными признаками определялась при помощи критерия корреляции Пирсона и при непараметрическом распределении - Спирмена. В эхокардиографическом исследовании использован метод главных компонент. Различия в распределении частот аллелей и генотипов изучаемых генов между группами оценивали посредством критерия ?2. Относительный риск (OR - odds ratio) заболевания по конкретному аллелю или генотипу вычисляли как отношение шансов [Bland J.M., Altman D.G., 2000]. Подсчитывали отношение шансов (ОШ - odd ratio) для оценки ассоциации между определенными генотипами и риском развития заболевания по стандартной формуле ОШ = (a?d)/(b?c), где a - частота аллеля (генотипа) в выборке больных, b - частота аллеля (генотипа) в контрольной группе, c - сумма частот остальных аллелей (генотипов) в выборке больных, d - сумма частот остальных аллелей (генотипов) в контрольной выборке. ОШ указан с 95%-ным доверительным интервалом (Confidence interval CI) [Лакин Г.Ф., 1990; Флейс Дж., 1989]. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез в данном исследовании был принят равным 0,05. Статистическая обработка материала проводена с использованием пакета прикладных программ «Excel 2010», «Statistica for Windows 7.0» и «SPSS 20».
t - доверительный коэффициент, показывающий какова вероятность того, что размеры показателя не будут выходить за границы предельной ошибки (обычно берется t = 2, что обеспечивает 95% вероятность безошибочного прогноза); D - предельная ошибка показателя.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Работа была проведена в рамках комплексной научной темы ГБОУ ВПО КРАСГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого: «Клинико-генетические аспекты мультифакториальных заболеваний», номер гос. регистрации - 01200906998.
Работа соответствует основным направлениям развития научных исследований РАМН на 2011-2015 гг. по комплексным проблемам медицины РФ, (утверждено Постановлением Президиума РАМН №330 от 22.12.2011 г., Протокол 16, п.2): «Решение задач идентификации генотипических и средовых факторов риска для широко распространенных заболеваний, оценка уровня генетического полиморфизма в общих группах населения РФ...», также «Разработка методологии оценки риска генетических нарушений в рамках Научного Совета по медицинской генетике (изучение молекулярной организации генома человека и его разнообразия по нормальным и патологическим генам, изучение роли и механизма действия генетических факторов в этиологии и патогенезе наследственных и мультифакториальных заболеваний, разработка на этой основе эффективных методов диагностики, лечения и профилактики)».
Полиморфные аллельные варианты rs1333049 хромосомы 9p21.3 у больных с острым нарушением мозгового кровообращения, лиц контрольной группы и группы сравнения
С целью изучения роли полиморфного аллельного варианта rs 1333049 хромосомы 9p21.3 в развитии инсультов проведено молекулярно-генетическое тестирование 121 больного с ишемическим, 26 больных с геморрагическим инсультом и 497 человек из контрольной группы. Результаты анализа CG полиморфизма среди больных ишемическим инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 4.
Таблица 4
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1333049среди больных с ишемическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Ишемический инсульт (n=121) Контроль (n=497) p n %±m n %±m
GG 28 23,1±3,8 131 26,4±2,0 0,542
CG 57 47,1±4,5 273 54,9±2,2 0,148
CC 36 29,8±4,2 93 18,7±1,7 0,011
Аллели: Аллель G 113 46,7±3,2 535 53,8±1,6 0,046
Аллель C 129 53,3±3,2 459 46,2±1,6 0,046
ОШ; 95% ДИ ОШ 1,331;1,004-1,736
Генотип GG 28 23,1±3,8 131 26,4±2,0 0,542
Генотипы CG CC 93 76,9±3,8 366 73,6±2,0 0,542
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,841;0,527-1,342
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??.
Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю у больных с ишемическим инсультом составила 23,1%±3,8, гетерозиготного генотипа CG - 47,1%±4,5 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю -29,8%±4,2. В контрольной группе 26,4%±2,0 являлись носителями гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю, 54,9%±2,2 - носителями гетерозиготного генотипа CG и 18,7%±1,7 - носителями гомозиготного генотипа ССПО редкому аллелю.
Таким образом, установлено статистически значимое преобладание носителей гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю среди больных с ишемическим инсультом (29,8%±4,2) по сравнению с группой контроля (18,7%±1,7), p=0,011, а также аллеля С в группе больных (53,3%±3,2) в сравнении с контролем (46,2%±1,6), p=0,046 (табл. 4).
В таблице 5 представлены данные сравнения больных с ишемическим инсультом в количестве 121 пациент и больных с ГБ без инсульта (группа сравнения) в количестве 217 человек.
Таблица 5
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1333049 среди больных с ишемическим инсультом и больных с ГБ без инсульта
Генотипы: Ишемический инсульт (n=121) Больные с ГБ без инсульта (n=217) p n %±m n %±m
GG 28 23,1±3,8 59 27,2±3,0 0,492
CG 57 47,1±4,5 123 56,7±3,4 0,115
CC 36 29,8±4,2 35 16,1±2,5 0,005
Аллели: Аллель G 113 46,7±3,2 241 55,5±4,2 0,034
Аллель C 129 53,3±3,2 193 44,5±4,2 0,034
ОШ; 95% ДИ ОШ 1,426; 1,040-1,955
Генотип GG 28 23,1±3,8 59 27,2±3,0 0,492
Генотипы CG CC 93 76,9±3,8 158 72,8±3,0 0,492
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,806; 0,480 -1,353
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??.
Установлено статистически значимое преобладание носителей гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю в группе больных с ИИ в сравнении с больными с ГБ без инсульта (табл.5).
В таблице 6 представлены результаты сравнения генотипов больных с геморрагическим инсультом (26 пациентов) и группы контроля (497 человек).
Таблица 6
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1333049 среди больных с геморрагическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Геморрагический инсульт (n=26) Контроль (n=497) p n %±m n %±m
GG 10 38,5±9,5 131 26,4±2,0 0,259
CG 11 42,3±8,1 273 54,9±2,2 0,290
CC 5 19,2±6,5 93 18,7±1,7 0,848*
Аллели: Аллель G 31 59,6±6,8 535 53,8±1,6 0,500
Аллель C 21 40,4±6,8 459 46,2±1,6 0,500
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,790;0,448-1,393
Генотип GG 10 38,5±9,5 131 26,4±2,0 0,175
Генотипы CG CC 16 61,5±9,5 366 73,6±2,0 0,175
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,573; 0,253-1,294
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??. р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Частота гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю среди больных с геморрагическим инсультом составила 38,5±9,5, что статистически значимо не отличалось от частоты данного генотипа среди лиц контрольной группы - 26,4±2,0. Суммарное значение частот гетерозиготного генотипа CG и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю (носители других генотипов) встречалось у больных с геморрагическим инсультом в 61,5%±9,5, в группе контроля-73,6%±2,0) (ОШ=0,573; 95% ДИ 0,253-1,294) (табл. 6). Таким образом, не выявлено статистически значимого преобладания каких- либо генотипов rs1333049 среди больных с геморрагическим инсультом в отличие от лиц контрольной группы.
Полиморфные аллельные варианты rs619203гена ROS1у больных с острым нарушением мозгового кровообращения, лиц контрольной группы и группы сравнения.
С целью изучения роли полиморфного аллельного варианта rs619203 гена ROS1 в развитии инсульта проведено молекулярно-генетическое исследование124 больных с ишемическими, 27 человек с геморрагическими инсультами и 475 человек из контрольной группы. Результаты анализа CG полиморфизма среди больных инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 7.
Таблица 7
Распределение частот генотипов и аллелей rs619203 гена ROS1среди больных с ишемическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Ишемический инсульт (n=124) Контроль (n=475) p n %±m n %±m
GG 78 62,9±4,3 234 49,3±2,3 0,009
CG 37 29,8±4,1 203 43,7±2,3 0,012
CC 9 7,3±2,3 38 8,0±1,2 0,931
Аллели: Аллель G 193 77,8±4,2 671 70,6±1,5 0,030
Аллель C 55 22,2±4,2 279 29,4±1,5 0,030
ОШ; 95% ДИ ОШ 1,459;1,048-2,031
Генотип GG 78 62,9±4,3 234 49,3±2,3 0,009
Генотипы CG CC 46 37,3±4,3 241 50,7±2,3 0,009
ОШ; 95% ДИ ОШ 1,746;1,163-2,622
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??.
Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю у больных с ишемическим инсультом составила 62,9%±4,3, гетерозиготного генотипа CG - 29,8%±4,1 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю -7,3%±2,3. В контрольной группе 49,3%±2,3 являлись носителями гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю, 43,7%±2,3 - носителями гетерозиготного генотипа CG и 8,0%±1,2 - носителями гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю (табл.7).
Согласно результатам исследования установлено, что частота носителей гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю среди больных с ишемическими инсультами (62,9%±4,3) была статистически значимо выше по сравнению с контрольной группой (49,3%±2,3, р=0,009). Таким образом, генотип GG является фактором риска развития ишемического инсульта, отношение шансов обнаружить носителя генотипа GG в группе с ишемическим инсультом составляет 1,459 по сравнению с носителями двух других генотипов. Частоты генотипов CC были статистически незначимо меньше у больных с ишемическим инсультом (7,3%±2,3), чем в группе контроля (8,0%±1,2, p=0,931) (табл. 7).
В таблице 8 представлен анализ больных с ишемическим инсультом (124 пациента) и больных с ГБ без инсульта (213 пациентов).
Таблица 8
Распределение частот генотипов и аллелей rs619203гена ROS1среди больных с ишемическим инсультом и больных с ГБ без инсульта
Генотипы: Ишемический инсульт (n=124) Больные с ГБ без инсульта (n=213) p n %±m n %±m
GG 78 62,9±4,3 108 50,7±3,4 0,040
CG 37 29,8±4,1 92 43,2±3,4 0,021
CC 9 7,3±2,3 13 6,1±1,6 0,853
Аллели: Аллель G 193 77,8±4,2 308 72,3±2,2 0,136
Аллель C 55 22,2±4,2 118 27,7±2,2 0,136
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,744;0,515-1,074
Генотип GG 78 62,9±4,3 108 50,7±3,4 0,040
Генотипы CG CC 46 37,3±4,3 105 49,3±3,4 0,040
ОШ; 95% ДИ ОШ 1,649;1,048-2,592
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??.
Установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю в группе больных с ишемическим инсультом по сравнению с больными с ГБ без инсульта (табл. 8).
Результаты анализа rs 619203 гена ROS1 среди больных с геморрагическим инсультом (27 пациентов) и в контрольной группе (475 человек) представлены в таблице 9.
Таблица 9
Распределение частот генотипов и аллелей rs619203гена ROS1среди больных с геморрагическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Геморрагический инсульт (n=27) Контроль (n=475) p n %±m n %±m
GG 17 63,0±9,3 234 49,3±2,3 0,235
CG 8 29,6±7,3 203 42,7±2,3 0,254
CC 2 7,4±4,2 38 8,0±1,2 0,799*
Аллели: Аллель G 42 77,8±5,7 671 70,6±1,5 0,331
Аллель C 12 22,2±5,7 279 29,4±1,5 0,331
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,687;0,356-1,325
Генотип GG 17 63,0±9,3 234 49,3±2,3 0,235
Генотипы CG CC 10 37,0±9,3 241 50,7±2,3 0,235
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,571;0,256-1,273
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля. Различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??. р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю у больных с геморрагическим инсультом составила 63,0%±9,3, гетерозиготного генотипа CG-29,6%±7,3 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю - 7,4%±4,2. В контрольной группе 49,3%±2,3 являлись носителями гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю, 42,7%±2,3 - носителями гетерозиготного генотипа CG и 8,0%±1,2-носителями гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю (табл. 9). Суммарное значение частот гетерозиготного генотипа CG и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю (носители других генотипов) встречалось у больных с геморрагическим инсультом в 37,0%±9,3, в группе контроля - 50,7%±2,3, (ОШ=0,571; 95% ДИ 0,256-1,273). Таким образом, не установлено статистически значимого преобладания ни по одному из генотипов между больными с геморрагическим инсультом и лицами группы контроля (табл. 9).
Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs 619203 гена ROS1у больных с острым нарушением мозгового кровообращения и вариантами индекса массы тела.
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs619203гена ROS1 среди больных с ишемическим инсультом на фоне нормального (33 пациента) и повышенного индекса массы тела - ИМТ (91 пациент) представлено в таблице 10.
Таблица 10
Распределение частот генотипов и аллелейrs619203гена ROS1 среди больных с ишемическим инсультом на фоне нормального и повышенного ИМТ
Генотипы: Инсульт на фоне нормального индекса массы тела (n=33) Инсульт на фоне повышенного индекса массы тела (n=91) p n %±m n %±m
GG 25 75,8±7,5 49 59,0±5,4 0,140
CG 5 15,2±5,2 38 36,1±5,3 0,046*
CC 3 9,1±4,1 4 4,8±2,4 0,660
Аллели: Аллель G 55 83,3±4,6 128 77,1±3,3 0,384
Аллель C 11 16,7±4,6 38 22,9±3,3 0,384
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,674;0,321-1,414
Генотип GG 25 75,8±7,5 49 59,0±5,4 0,140
Генотипы CG CC 8 24,2±7,5 42 41,0±5,4 0,140
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,461;0,186-1,144
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля; различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??; р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю у больных с повышенным ИМТ составила 59,0%±5,4, гетерозиготного генотипа CG - 36,1%±5,3 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю- 4,8%±2,4%. В группе больных с нормальным ИМТ 75,8%±7,5 являлись носителями гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю, 15,2%±5,2-носителями гетерозиготного генотипа CG и 9,1%±4,1 - носителями гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю. Таким образом, установлено статистически значимое преобладание носителей гетерозиготного генотипа CG в группе больных с повышенным ИМТ(36,1%±5,3) в сравнении с больными с нормальным ИМТ (15,2%±5,2), р=0,046(табл. 10).
Полиморфные аллельные варианты rs2681412 гена ATP2B1у больных с острым нарушением мозгового кровообращения, лиц контрольной группы и группы сравнения.
С целью изучения роли полиморфного аллельного варианта rs2681412 гена ATP2B1 в развитии инсультов проведено молекулярно-генетическое тестирование 123 больных с ишемическими, 26 с геморрагическими инсультами и 156 человек из контрольной группы.
Таблица 11
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs2681412 гена ATP2B1 среди больных с ишемическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Ишемический инсульт (n=123) Контроль (n=156) p n %±m n %±m
TT 85 69,1±4,2 117 75,0±3,5 0,338
CT 37 30,1±6,6 39 25,0±3,5 0,417
CC 1 0,8±1,3 0 0 0,905*
Аллели: Аллель T 207 84,1±2,3 273 87,5±1,9 0,312
Аллель C 39 15,9±2,3 39 12,5±1,9 0,312
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,758;0,470-1,224
Генотип TT 85 69,1±4,2 117 75,0±3,5 0,338
Генотипы CT CC 38 30,9±4,2 39 25,0±3,5 0,338
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,746;0,440-1,263
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля; различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??; р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Результаты анализа rs2681412 гена ATP2B1 среди больных ишемическим инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 11. Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа TT по распространенному аллелю у больных с ишемическим инсультом составила 69,1%±4,2, гетерозиготного генотипа CT - 30,1%±6,6 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю - 0,8%±1,3. В контрольной группе 75,0%±3,5 являлись носителями гомозиготного генотипа TT по распространенному аллелю, 25,0%±3,5 - носителями гетерозиготного генотипа CT. Ни один человек не являлся носителем гомозиготного генотипа cc по редкому аллелю гена ATP2B1 (табл. 11). По результатам исследования установлено некоторое преобладание носителей гетерозиготного генотипа CT среди больных с ишемическим инсультом (30,1%±6,6) по сравнению с группой контроля (25,0%±3,5), но оно было статистически незначимо. Не установлено также статистической значимости по аллелям гена ATP2B1 (табл. 11).
Таблица 12
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs2681412 гена ATP2B1 среди больных с геморрагическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Геморрагический инсульт (n=26) Контроль (n=156) p n %±m n %±m
TT 22 84,6±7,1 117 75,0±3,5 0,413
CT 4 15,4±7,1 39 25,0±3,5 0,413*
CC 0 0 0 0 -
Аллели: Аллель T 48 92,3±3,0 273 87,5±1,9 0,446
Аллель C 4 7,7±3,0 39 12,5±1,9 0,446*
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,583;0,199-1,707
Генотип TT 22 84,6±7,1 117 75,0±3,5 0,413
Генотипы CT CC 4 15,1±7,1 39 25,0±3,5 0,413*
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,545;0,177-1,681
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля; различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??; р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Результаты распределения частот генотипов и аллелей полиморфизма rs2681412 гена ATP2B1среди больных с геморрагическим инсультом и лиц контрольной группы представлены в таблице 12. Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа TT по распространенному аллелю у больных с геморрагическим инсультом составила 84,6%±7,1, гетерозиготного генотипа CT - 15,4%±7,1 и гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю гена ATP2B1 - ни у одного пациента. В контрольной группе 75,0%±3,5 являлись носителями гомозиготного генотипа TT по распространенному аллелю, 25,0%±3,5 - носителями гетерозиготного генотипа CT и 0% - носителями гомозиготного генотипа CC по редкому аллелю гена ATP2B. (табл. 12). Не установлено статистического значимого преобладания какого - либо генотипа гена ATP2B среди пациентов с геморрагическим инсультом по сравнению с лицами контрольной группы.
Полиморфные аллельные варианты rs17367504 гена MTHFR у больных с острым нарушением мозгового кровообращения, лиц контрольной группы и группы сравнения. инсульт мозговой ген кровообращение
С целью изучения роли полиморфного аллельного варианта rs17367504 гена MTHFR в развитии ишемических инсультов проведено молекулярно-генетическое исследование124 больных с ишемическими инсультами, 27 с геморрагическими и 156 человек из контрольной группы.
Таблица 13
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs17367504 гена MTHFRСРЕДИ больных с ишемическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Ишемический инсульт (n=124) Контроль (n=156) P n %±m n N
AA 101 81,5±3,5 114 72,9±4,1 0,132
AG 20 16,1±3,3 40 26,3±4,1 0,075
GG 3 2,4±1,4 2 0,8±0,8 0,795*
Аллели: Аллель A 222 89,5±1,9 268 85,9±2,0 0,247
Аллель G 26 10,5±1,9 44 14,9±2,0 0,247
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,713;0,426-1,196
Генотип AA 101 81,5±3,5 114 73,1±3,6 0,099
Генотипы AG GG 23 18,5±3,5 42 26,9±3,6 0,099
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,618;0,348-1,098
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля; различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??; р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Результаты анализа AG полиморфизма гена MTHFR среди больных ишемическим инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 13.
Как видно в представленной таблице, частота гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю у больных с ишемическим инсультом составила 81,5%±3,5, гетерозиготного генотипа AG - 16,1%±3,3 и гомозиготного генотипа GG по редкому аллелю -2,4%±1,4. В контрольной группе 72,9%±4,1 являлись носителями гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю, 26,3%±4,1 - носителями гетерозиготного генотипа AG и 0,8%±0,8 - носителями гомозиготного генотипа GG по редкому аллелю гена MTHFR (табл.13).
Таким образом, по результатам исследования установлено некоторое преобладание носителей гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю среди больных с ишемическим инсультом (81,5%±3,5) по сравнению с группой контроля (72,9%±4,1), но это различие было статистически не значимо. Также не установлено статистически значимых различий по аллелям гена MTHFR (табл. 13).
Таблица 14
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs17367504 гена MTHFR среди больных с геморрагическим инсультом и лиц контрольной группы
Генотипы: Геморрагический инсульт (n=27) Контроль (n=156) p n %±m n %±m
AA 24 88,9±6,0 114 73,1±3,6 0,129
AG 3 11,1±6,0 40 25,6±3,5 0,162*
GG 0 0 2 1,3±0,9 0,681*
Аллели: Аллель A 51 94,4±2,6 268 85,9±2,0 0,130
Аллель G 3 5,6±2,6 44 14,1±2,0 0,130
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,358;0,107-1,198
Генотип AA 24 88,9±6,0 114 73,1±3,6 0,129
Генотипы AG GG 3 11,4±6,0 42 26,9±3,6 0,129*
ОШ; 95% ДИ ОШ 0,339;0,097-1,186
Примечание: р - уровень значимости при сравнении распределения генотипов с показателями группы контроля; различия по исследуемым показателям рассчитаны с использованием критерия ??; р*- уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.
Результаты анализа rs17367504 гена MTHFR среди больных с геморрагическим инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 14. Как видно из представленной таблицы, частота гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю у больных с геморрагическим инсультом составила 88,9%±6,0, гетерозиготного генотипа AG - 11,1%±6,0, гомозиготный генотип GG по редкому аллелю гена MTHFRНЕ выявлялся ни у одного из обследуемых. В контрольной группе 73,1%±3,6 являлись носителями гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю, 25,6%±3,5 - носителями гетерозиготного генотипа AG и 1,3%±0,9-носителями гомозиготного генотипа GG по редкому аллелю гена MTHFR .
Суммарное значение частот гетерозиготного генотипа AG и гомозиготного генотипа GG по редкому аллелю (носители других генотипов) встречалось у больных с геморрагическим инсультом в 11,4%±6,0, в группе контроля (26,9%±3,6) (ОШ=0,339; 95% ДИ 0,097-1,186). Таким образом, не установлено статистически значимого преобладания ни по одному из генотипов гена MTHFR между больными с геморрагическим инсультом и лицами группы контроля (табл. 21).
ВЫВОДЫ
1.Установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена rs 1333049 хромосомы 9р21.3 (29,8±4,2) в группе больных с ишемическим инсультом в сравнении с лицами контрольной группы (18,7±1,7) и аллеля С (53,3±3,2) в сравнении с группой контроля (46,2±1,6).
2.Выявлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена rs 1333049 хромосомы 9р21.3(29,8±4,2) у больных с ишемическим инсультом в сравнении с больными с ГБ без инсульта (16,1±2,5).
3.Установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю гена rs619203гена ROS1 в группе больных с ишемическим инсультом (62,9±4,3) в сравнении с группой контроля (49,3±2,3).
4.Установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа GG по распространенному аллелю гена rs 619203гена ROS1(62,9±4,3) у больных с ишемическим инсультом в сравнении с больными с ГБ без инсульта(50,7±3,4)
5.Установлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа CG rs 619203 гена ROS1 у больных с ишемическим инсультом на фоне повышенного ИМТ (36,1±5,3) в сравнении с больными ишемическим инсультом на фоне нормального ИМТ (15,2±5,2).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
В связи с выходом приказа Минздрава России от 01 апреля 2015 г. №36 АН «Об утверждении порядка проведения диспансеризации определенных групп взрослого населения» пациентов с генетическими факторами риска ишемического инсульта (гомозиготный генотип СС по редкому аллелю гена rs 1333049 хромосомы 9р21.3, гомозиготный генотип GG по распространенному аллелю гена rs619203 гена ROS1) необходимо включать в диспансерную группу 2 для диспансерного наблюдения и профилактики ишемического инсульта.
Эти данные могут использоваться в общетерапевтической практике центров здоровья, консультативных и профилактических кабинетах амбулаторно-поликлинического звена здравоохранения.
