Продуценти позаклітинних лектинів серед представників роду Bacillus, виділених із різних екологічних ніш, їх вуглеводзв’язуючі та фізико-хімічні властивості. Методи виділення та очищення позаклітинних сіалоспецифічних лектинів у процесі росту бактерій.
НАЦІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ НАУК УКРАЇНИ Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня доктора біологічних наукДисертацію присвячено поглибленому вивченню позаклітинних лектинів сапрофітних бактерій. У дисертації розроблено новий напрямок в мікробіології, що грунтується на концепції пошуку і застосування в різних галузях біології та медицини принципово нових нешкідливих медикаментозних засобів природного походження. Проведено розширений скринінг продуцентів позаклітинних лектинів серед бактерій роду Bacillus і встановлена їхня здатність до синтезу лектинів з унікальною специфічністю до сіалових і уронових кислот. Проведен расширенный поиск продуцентов внеклеточных лектинов среди представителей спорообразующих аэробных бактерий рода Bacillus, выделенных из различных экологических ниш, и выявлена их способность синтезировать и выделять в среду роста лектины с редко встречающейся специфичностью к сиаловым и уроновым кислотам. Эти методы позволили получить препараты лектинов и их изоформы с высокими критериями очистки и сродства к специфичным углеводам; по своим характеристикам очищенные препараты лектинов бацилл соответствуют (а по некоторым - превышают) мировые стандарты сиалоспецифичных лектинов.Сфери застосування лектинів часто обмежуються доступністю та вартістю джерел виділення; великим є також дефіцит лектинів з рідкісною вуглеводною специфічністю, а саме: до фукози, сіалових та уронових кислот, олігосахаридів, тощо; тому пошук та використання нетрадиційних джерел одержання препаратів лектинів з унікальною специфічністю є вельми необхідним. Мета роботи: встановити фізіологічні особливості спороутворюючих аеробних бактерій роду Bacillus - синтетиків позаклітинних лектинів, виділити та очистити лектини зі специфічністю, що рідко зустрічається, визначити їхні гемаглютинуючі, фізико-хімічні та медико-біологічні властивості та можливі сфери застосування. При виконанні експериментальних досліджень одержано нові результати, на основі яких було вперше: - проведено розширений пошук продуцентів позаклітинних лектинів серед спороутворюючих аеробних бактерій роду Bacillus і встановлено їхню здатність синтезувати та виділяти у середовище росту лектини з унікальною специфічністю до сіалових та уронових кислот; Для виявлення стійкості лектинів до різних факторів зовнішнього середовища ставили РГА з трипсинизованими та обробленими глутаровим альдегідом еритроцитами кроля в різних буферних системах при РН від 2,8 до 10,0 в присутності або відсутності ЕДТА і Са2 ; при визначенні термостабільності лектини інкубували на водяній бані при температурі від 40 до 100°С на протязі 5-20 хв. Таким чином, встановлена здатність бактерій роду Bacillus синтезувати позаклітинні лектини зі специфічністю до сіалових і уронових кислот, вивчення фізіологічних особливостей росту бактерій дозволило виявити три факти: індивідуальність процесу лектиноутворення для кожної культури, обмеженість у часі проявлення лектинової активності в культуральній рідині, а також наявність у ній двох екстремумів активності; найбільш висока лектинова активність відмічена в стадії затримання росту бактерїй; стадія росту бактерій випереджає стадію синтезу лектинів; на лектинсинтезуючі властивості бацил впливають різні фактори зовнішнього середовища: температура та час вирощування, склад і РН поживного середовища, наявність у ньому певного вуглеводу й біостимуляторів; підбір оптимальних умов культивування бактерій дозволили здійснити керований синтез позаклітинних лектинів.Проведено широкий пошук продуцентів позаклітинних лектинів серед представників спороутворюючих аеробних бактерій роду Bacillus та виявлено їхню здатність синтезувати та виділяти в середовище росту лектини зі специфічністю, що рідко зустрічається, до сіалових і уронових кислот. Підібрано методи виділення та очищення позаклітинних сіалоспецифічних лектинів бактерій із використанням хроматографії на TSK гелях, гель-фільтрації на різних типах сефароз та ізоелектрофокусування в борат-поліольній системі, які дозволяють одержувати препарати лектинів та їхні ізоформи з високими показниками за активністю, очищенням та ступенем спорідненості до специфічних вуглеводів.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
