Одновременный ферментативный гидролиз целлюлозы и гемицеллюлозы с последующей ферментацией получаемых свободных сахаров - самый экономичный способ получения этанола из растительного сырья. Порядок проверки ДНК-конструкций рестрикционным анализом.
При низкой оригинальности работы "Получение конструкций, обеспечивающих контролируемое усиление генов в трансгенных растениях", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
В настоящее время все чаще предлагается новая технология экспрессии генов целлюлазы, выделенных из чистых штаммов гриба Lentinullaedodes (более известны как грибы Shiitake), способных к переработке растительной биомассы (отходы с/х производства, таких как солома злаков, опилки и т.д.) до простых сахаров. Объектами исследования послужили синтетические трансляционные энхансеры, минимальный 35S-промотор вируса мозаики цветной капусты, элемент теплового шока, репортерный ген ?-глюкурунидазы (GUS) и ген фермента целлюлазы 7А из гриба Lentinulaedodes. Конструкции, были созданы путем вставки в плазмиду PCAMBIA 2300 кассеты, содержащей элемент теплового шока из плазмиды PSGH2 и минимального 35S-промотора (-60) вируса мозаики цветной капусты по сайтам рестрикции HINDIIIИ NCOI. Наиболее отработанными сегодня являются системы (конструкции) переработки целлюлозы, в которых используются гены целлюлолитических ферментов, выделенные из грибов в основном из штамма грибов Lentinulla edodes (Shiitake) и Trichoderma reesei. В связи с этим в наших экспериментах были созданы следующие конструкции: Первая конструкция, (контроль) - HSE-35Smin-GUS-NOS-PCAMBIA, не содержащая никаких трансляционных энхансерных последовательностей, была получена путем вставки в пустую плазмиду PCAMBIA, кассеты с элементом теплового шока и минимального 35S-промотора вируса мозаики цветной капусты, репортерного гена, кодирующего фермент ?-глюкуронидазу (GUS) и терминатор нопалин синтазы (NOSTERMINATOR), ответственного за сигнал полиаденилирования (элемент МРНК растений, защищающий от рибонуклеаз и проявляющий некий энхансерный эффект).
Список литературы
1. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Белки стресса в эукариотической клетке. // Цитология, 2001, Т.42. №4. C. 323-342.
2. Bailey-Serres J., Dawe R.K. Both 5’- and 3’-sequenses of Maize adh-1 MRNA are required for enhanced translation under low oxygen conditions.//Plant physiol., 1996, Vol.112. P. 685-695.
3. Nover L., Neumann D., Sharf K-D. Heat shock and other stress response systems of plants// Results and problems in cell differentiation. 1989, Vol.16: P. 156-170.
4. Charles C. Lee, Dominic W.S. Wong, George H. Robertson. Cloning and characterization of two cellulase genes from Lentinula edodes and Trichoderma reesei// FEMS Microbiology Letter, 2005 (2001), P.355-360.
5. Gallie D.R. The cap and poly(A) tail function synergistically to regulate MRNA translational efficiency // Genes Devel., 1991, Vol.5. -Р.2108-2116.
6. R.Zh. Akbergenov, S.Sh. Zhanybekova, R.V. Kryldakov, A. Zhigailov, N.S. Polimbetova, T. Hohn and B.K. Iskakov. ARC-1, a sequence element complementary to an internal 18S RRNA segment, enhances translation efficiency in plants when present in the leader or intercistronic region of MRNAS // Nucleic Acids Research, 2004, Vol. 32, No. 1, P. 239-247.
7. Maniatis T. et al. Molecular cloning, Book I, 1989.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
