Полиморфизм генов АCE (I/D), AGTR1 (А1166С) И FGA (THR312ALA) у больных с метаболическим синдромом и их связь с лабораторными факторами риска атеросклероза - Автореферат

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наукРабота выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный медицинский исследовательский центр им. Научный руководитель: Дорофейков Владимир Владимирович доктор медицинских наук доцент Официальные оппоненты: Пастушенков Владимир Леонидович, доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства», заместитель главного врача по лабораторной диагностике С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М.Кроме того, предполагается, что большинство компонентов синдрома генетически детерминированы, хотя генов, ответственных за возникновение данного симптомокомплекса, пока не выявлено (Бутрова С.А., 2001). В последнее время все больше внимания исследователи уделяют изучению молекулярно-генетических факторов развития МС, поиску генов предрасположенности и анализу ассоциации их полиморфизмов с различными компонентами синдрома. Имеются данные об ассоциации МС с полиморфизмом некоторых генов, продукты которых контролируют различные аспекты гемостаза и артериального давления, но вклад их в возникновение МС требует дальнейшего изучения (Бувальцев В.И., 2001; Глотов О.С. и сооавт., 2003; Задионченко В.С. и соавт., 2004). Разработать методы определения аллельных вариантов полиморфных генов AGTR1 (А1166С), FGA (Thr312Ala) на основе аллельспецифической ПЦР, и изучить ассоциации полиморфизма указанных генов, а также гена ACE (I/D) с лабораторными факторами риска атеросклероза у пациентов с метаболическим синдромом для установления их диагностической и прогностической ценности. Выявлено существенное повышение концентрации инсулина на фоне гипергликемии у больных метаболическим синдромом с генотипом II гена ACE по сравнению с генотипом DD.Суточное мониторирование артериального давления у всех пациентов показало наличие АГ, проявлявшейся в повышении и систолического, и диастолического давления (САД 156±2 мм. рт. ст.; ДАД 95±1 мм. рт. ст.). Так как у исследуемых больных дислипидемии типов IIA, IIB, IV сочетаются с гипо-?-липопротеинемия, а также достаточно часто встречается изолированная гипо-?-липопротеинемия, выделяли следующие типы дислипидемий: IIA, IIA гипо-?-липопротеинемия, IIB, IIB гипо-?-липопротеинемия, IV гипо-?-липопротеинемия, изолированная гипо-?-липопротеинемия. Наиболее распространенный тип дислипидемий в группе пациентов с МС являлся IIB гипо-?-липопротеинемия (53,6%), тогда как самыми редкими - IIB и изолированная гипо-?-липопротеинемия. Учитывая, что в исследование не включали пациентов с острым инфарктом миокарда, нарушением мозгового кровообращения в течение предшествующих шести месяцев, системными заболеваниями, нарушениями функции печени, инфекционными заболеваниями, воспалительными очагами любой локализации, онкологическими заболеваниями и лейкоцитозом, концентрация hs-CRP, более 3 мг/л, рассматривалась как признак высокого риска сосудистых осложнений. В группе пациентов как концентрация фибриногена и плазминогена, так и активность, а также сорбция плазминогена на фибрине оказались достоверно выше по сравнению с группой контроля (табл.Выявлено достоверное повышение концентрации инсулина на фоне гипергликемии у больных МС с генотипом II ACE по сравнению с генотипом DD, что свидетельствует о роли данного полиморфизма в процессе развития МС. Обнаружена зависимость индекса массы тела и концентрации ХС ЛПВП от генотипа AGTR1 (A1166C) у пациентов с МС, что говорит о влиянии генетического полиморфизма данного гена в развитии МС. В более чем половине наблюдений пациенты МС характеризовались особым типом дислипидемии - повышенный уровень холестерина низкой плотности сочетался с гипо-?-холестеринемией и повышенной концентрацией высокочувствительного С-реактивного белка, что свидетельствует о неблагоприятном течении и высоком риске осложнений атеросклероза.

Биохимические исследования

Обследованные пациенты с МС обладали множественными проявлениями нарушения метаболизма. Так, по сравнению с условно здоровыми людьми, они характеризовались повышением ИМТ. Суточное мониторирование артериального давления у всех пациентов показало наличие АГ, проявлявшейся в повышении и систолического, и диастолического давления (САД 156±2 мм. рт. ст.; ДАД 95±1 мм. рт. ст.).

В группе больных МС было отмечено выраженное изменение липидного профиля плазмы крови. Гиперинсулинемия была отмечена у 84,5% пациентов. Концентрация общего холестерина была повышена и составляла в среднем 6,11 ммоль/л, триглицеридов - 2,55 ммоль/л. Уровень ХС-ЛПНП и ХС-ЛПВП колебался в значительных пределах и составлял в среднем 3,91 ммоль/л и 0,86 ммоль/л соответственно. Сравнение основной группы с группой контроля выявило достоверные отличия по всем показателям липидного профиля (табл. 1)

Для оценки типов дислипидемии в группе пациентов использовали классификацию дислипидемий ВОЗ 2005 г. У всех обследованных пациентов наблюдалась дислипидемия. Диабетическая дислипидемия - повышение концентрации триглицеридов, общего холестерина и ХС-ЛПНП с параллельным снижением концентрации холестерина “антиатерогенной” фракции (ХС-ЛПВП) - обнаружили у 62% больных. В тоже время у 38% пациентов были отмечены другие варианты дислипидемии (повышение ТГ и ХС-ЛПНП, повышение ХС-ЛПНП и снижение ХС-ЛПВП).

Таблица 1

Сравнение липидного профиля между группой пациентов с МС и группой контроля (M±m)

Показатель Значение Достоверность отличий

Группа пациентов с МС (n = 84) Группа контроля (n = 32)

Холестерин общий, ммоль/л 6,11±0,19 4,86±0,16 р<0,05

ТГ, ммоль/л 2,55±0,16 1,14±0,10 р<0,05

ХС-ЛПНП, ммоль/л 3,91±0,13 3,14±0,09 р<0,05

ХС-ЛПВП, ммоль/л 0,86±0,03 1,84±0,07 р<0,05

КА 6,80±0,26 2,48±0,19 р<0,05

Так как у исследуемых больных дислипидемии типов IIA, IIB, IV сочетаются с гипо-?-липопротеинемия, а также достаточно часто встречается изолированная гипо-?-липопротеинемия, выделяли следующие типы дислипидемий: IIA, IIA гипо-?-липопротеинемия, IIB, IIB гипо-?-липопротеинемия, IV гипо-?- липопротеинемия, изолированная гипо-?-липопротеинемия. Наиболее распространенный тип дислипидемий в группе пациентов с МС являлся IIB гипо-?-липопротеинемия (53,6%), тогда как самыми редкими - IIB и изолированная гипо-?-липопротеинемия.

Таблица 2

Характеристика типов дислипидемии у больных с МС (M±m)

Тип дислипидемии Частота встречаемости, n (%) Гомоцистеин, мкмоль/л hs-CRP, мг/л Инсулин, Ед/мл

IIA, 9 (10,7%) 13,01±4,48 5,96±1,54 11,1±0,82

IIA гипо-?-липопротеинемия 6 (7,1%) 11,71±0,68 11,9±5,37 15,13±1,08

IIB 4 (4,8%) 13,53±3,05 11,8±4,19 17,76±1,28

IIB гипо-?-липопротеинемия 45 (53,6%) 14,07±2,28 17,3±4,52 19,65±1,27

IV гипо-?-липопротеинемия 16 (19%) 12,14±1,90 13,9±2,19 18,51±1,90

Изолированная гипо-?-липопротеинемия 4 (4,8%) 14,22±1,41 7,08±1,85 15,10±0,57

Исследование концентрации гомоцистеина плазмы крови в группе пациентов МС показало наличие гипергомоцистениемии в 51,8% случаев. Однако различий в группах пациентов по этому параметру в зависимости от типа дислипидемии существенных различий не выявило (табл. 2).

Учитывая, что в исследование не включали пациентов с острым инфарктом миокарда, нарушением мозгового кровообращения в течение предшествующих шести месяцев, системными заболеваниями, нарушениями функции печени, инфекционными заболеваниями, воспалительными очагами любой локализации, онкологическими заболеваниями и лейкоцитозом, концентрация hs-CRP, более 3 мг/л, рассматривалась как признак высокого риска сосудистых осложнений. При анализе концентрации hs-CRP у больных с различными типами дислипидемии повышение наблюдалось у всех типов. Максимальная концентрация hs-CRP отмечена при дислипидемии IIB гипо-?-липопротеинемия типа (17,3 4,52 мг/л), тогда как минимальная - IIA (табл. 2). полиморфный ген атеросклероз метаболический синдром

Исследование уровня инсулина в зависимости от типа дислипидеимии выявило ряд статистически достоверных отличий. Также, как и при исследовании концентрации высокочувствительного СРБ, максимальные значения показателя наблюдались в группе пациентов с IIB гипо-?- липопротеинемия, а минимальные - при IIA (табл. 2).

Таким образом, пациенты с наиболее частым типом дислипидемии (IIB гипо-?-липопротеинемия) характеризовались наибольшими метаболическими изменениями, что указывает на формирование неблагоприятных патогенетических процессов, провоцируемых комбинацией дислипидемии и острофазных белков.

Анализ факторов тромбоза показал достоверные отличия между группой пациентов с МС и условно здоровыми людьми. В группе пациентов как концентрация фибриногена и плазминогена, так и активность, а также сорбция плазминогена на фибрине оказались достоверно выше по сравнению с группой контроля (табл. 3).

Таблица 3

Сравнение факторов риска тромбозов между группой пациентов с МС и группой контроля (M±m)

Показатель Значение Достоверность отличий

Группа пациентов с МС (n = 84) Группа контроля (n = 32)

Фибриноген, г/л 2,95±0,09 2,56±0,12 р<0,05

Сорбция, ?U/ml пл 0,74±0,04 0,37±0,03 р<0,05

Сорбция, ?U/mg фг 0,26±0,03 0,17±0,01 р<0,05

Плазминоген, U/ml 1,64±0,06 1,05±0,05 р<0,05

Разработка методов определения однонуклеотидных полиморфизмов в исследуемых генах

ДНК для генетических исследований выделяли из лейкоцитов периферической крови по оригинальному протоколу. Для оценки качества выделения ДНК использовали метод электрофореза в 0,8% агарозном геле. Окрашенные бромидом этидия образцы визуализировали в ультрафиолетовом свете. Во всех представленных образцах ДНК не имела загрязнений и не подверглась деградации, что свидетельствует о достаточно высоком качестве выделения.

Для амплификации исследуемых областей гена ?-фибриногена FGA (Thr312Ala) и гена рецептора 1-го типа к ангиотензиногену II AGTR1 (A1166C) были разработаны оригинальные модификации полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Определяющим существенным отличием заявляемых способов по сравнению с прототипами являлось то, что в прототипах проводят стандартную амплификацию ДНК с использованием пары праймеров, фланкирующих интересующие фрагменты. В заявляемых способах использовали другой подход - аллельспецифическую амплификацию. В каждом из случаев амплификацию проводили в двух параллельных пробах.

При исследовании аллельных вариантов гена FGA в качестве обратного праймера использовали олигонуклеотид 5"-TCC-CAG-AGT-TCC-AGC-TTC-CAG-T-3" с тимином на 3’-конце (Т), комплементарным аденину (А) в 6534 позиции аллеля FGA T. В другой - праймер 5"-CCC-AGA-GTT-CCA-GCT-TCC-AGC-3" с концевой дезоксицитидиловой кислотой (С) комплементарным гуанину (G) в 6534 позиции аллеля FGA A. В качестве прямого праймера в обоих случаях служила последовательность 5"-TGT-CGA-GGG-TCA-TGC-AGT-AGG-G-3".

Определение аллелей гена FGA проводили по наличию или отсутствию в геле фрагмента размером 475 п. н. В случае, если фрагмент выявлялся при амплификации ДНК с обеими парами праймеров, это свидетельствовало о присутствии обоих аллелей в генотипе индивида. Следовательно, носитель образца ДНК - гетерозигота (рис. 1). Амплификация фрагмента только с одной парой праймеров и отсутствие амплификата при использовании другой пары свидетельствовало о гомозиготном состоянии по соответствующему аллелю (рис. 1).

Рисунок 1. Электрофореграмма амплифицированных ДНК-фрагментов гена FGA, полученных в ходе ПЦР

Примечание: 1 - генотип АА; 2 - генотип АТ; 3 - генотип ТТ

Правильность определения генотипов заявляемым способом подтверждена независимо с помощью полимеразной цепной реакции и гидролиза продукта ПЦР рестриктазой Rsa I (СИБЭНЗИМ, Россия). Разработанный метод определения полиморфизма гена ?-фибриногена (FGA) по полиморфному сайту Thr312Ala прошел научную экспертизу и зарегистрирован как Изобретение (Патент Российской Федерации №2331671 «Способ определения аллелей гена ?-фибриногена (FGA) по полиморфному сайту Thr312Ala).

Аналогичным способом идентифицировали полиморфные варианты AGTR1 А. В данном случае использовали обратный праймер 5’-GCACTTCACTACCAAATGAGCAT-3’; а для идентификации аллеля AGTR1 С применяли обратный праймер 5’-GCACTTCACTACCAAATGAGCCG-3’; прямым праймером в обоих случаях служит последовательность 55’-TGGCTTTGCTTTGTCTTGTTG-3’. О наличии в образце аллелей гена AGTR1 судили по появлению в геле после электрофореза амплифицированной ДНК фрагмента размером 130 п.н.; при этом выявление названного фрагмента после амплификации ДНК с обеими парами праймеров свидетельствовало о присутствии обоих аллелей, тогда как амплификация фрагмента только с одной из пар праймеров - о наличии одного соответствующего ей аллеля AGTR1. На основании проведенных разработок подана заявка на Изобретение «Способ определения аллелей гена рецептора 1 типа к ангиотензиногену II (AGTR1) по полиморфному сайту А1166С» №2011153122 с приоритетом от 23.12.2011г.

Анализ зависимости лабораторных показателей атеросклероза от генотипа ACE (I/D), AGTR1 (A1166C) и FGA (Thr312Ala)

Выборки больных МС и условно здоровых людей были проанализированы по трем полиморфным генам - ACE (I/D), FGA (T312A), AGTR1 (А1166С) - и распределены по группам в зависимости от генотипа. В исследованных выборках были представители всех трех генотипических классов по каждому гену. Анализ генетической структуры выборок больных МС и условно здоровых людей по трем полиморфным генам показал наличие достоверных отличий лишь в распределении аллелей (табл. 4) Так в группе пациентов частоты неблагоприятных аллелей гена фибриногена и ангиотензинового рецептора были повышены. Статистически значимых отличий в распределении частот аллелей по гену АСЕ между исследуемыми группами выявлено не было. Для исключения влияния отбора на частоты генотипов анализируемые выборки были проверены на равновесие по Харди-Ваинбергу

Таблица 4

Распределение частот генотипов и аллелей в группе пациентов с МС и группе контроля

Ген Генотип / аллель Группа пациентов с МС Группа контроля n h ± Sh n h ± Sh

ACE 73 31 генотипы II 17 0,23 ± 0,05 7 0,23 ± 0,08

ID 35 0,48 ± 0,09 13 0,42 ± 0,09

DD 21 0,29 ± 0,05 11 0,35 ± 0,09 аллели I 69 0,47 ± 0,08 27 0,44 ± 0,13

D 77 0,53 ± 0,08 35 0,56 ± 0,13

FGA 74 32 генотипы TT 37 0,50 ± 0,06 21 0,66 ± 0,08

TA 29 0,39 ± 0,06 8 0,25 ± 0,08

AA 8 0,11 ± 0,07 3 0,09 ± 0,05 аллели T 103 0,70 ± 0,08 50 0,78 ± 0,10

A 45 0,30 ± 0,08 14 0,22 ± 0,10

AGTR1 73 31 генотипы AA 34 0,47 ± 0,06 26 0,84 ± 0,07

AC 34 0,47 ± 0,06 4 0,13 ± 0,06

CC 5 0,15 ± 0,04 1 0,03 ± 0,03 аллели A 102 0,70 ± 0,08 56 0,90 ± 0,08

C 44 0,30 ± 0,078 6 0,10 ± 0,08

Примечания: n - количество, h - частота, Sh - ошибка частоты

Анализ зависимости биохимических маркеров нарушения липидного обмена у больных МС от генотипа ACE (I/D) и AGTR1 (A1166C) выявил несколько статистически значимых связей. Так, концентрации инсулина в крови у пациентов с МС зависела от генотипа ACE (I/D): наиболее высокая концентрация была у пациентов с генотипом II АСЕ (р <0,05), в то время как низкая - у гомозигот DD (рис. 2.)

Рисунок 2. Зависимость концентрации инсулина в крови от различных генотипов АСЕ (I/D) в группе больных МС

Примечание: ID, II, DD - генотипы ACE; *-достоверность различий р <0,05

Исследование ассоциации генотипов AGTR1 (А1166С) с ИМТ показало, что несмотря на повышенные значения данного показателя у всех пациентов, носители генотипа СС имели самый низкий ИМТ (р <0,05). Имеются отдельные свидетельства, согласующиеся с полученными данными (Abdollahi M.R. et al., 2006). (рис. 3).

Рисунок 3. Зависимость индекса массы тела от различных генотипов AGTR1 (A 1166 C) в группе больных МС. Примечание: АА, АС, СС - генотипы AGTR1; *-достоверность различий р <0,05

Нарушения липидного обмена, характерные для МС, проявляются в ускоренном развитии атеросклероза. В ходе исследования была обнаружена связь риск-факторов атерогенеза с изучаемыми полиморфными генами. Так, концентрация ХС ЛПВП имеет зависимость от генотипа AGTR1 (А1166С) (р <0,05). Среди больных МС самые низкие значения этого показателя характерны для «благоприятного» генотипа АА: 26,6% человек имели концентрацию ХС ЛПВП ниже нормы (0,78-0,82 ммоль/л при норме 1,2-1,0 ммоль/л) (рис. 4).

Рисунок 4. Зависимость концентрации ХС ЛПВП в крови от различных генотипов AGTR1(A 1166 C) в группе больных МС

Примечание: АА, АС, СС - генотипы AGTR1; *-достоверность различий р <0,05

Нарушения реологических свойств крови у больных МС проявляются в первую очередь в повышенном риске развития тромботических осложнений. В данной работе в качестве риск-факторов тромбозов рассматривались следующие биохимические показатели: концентрация фибриногена в крови, активность плазминогена и величина сорбции плазминогена на фибрине. Анализ возможной зависимости указанных биохимических характеристик от генотипа FGA (Thr312Ala) выявил несколько статистически значимых связей только лишь в группе условно здоровых людей. Показано, что концентрация фибриногена в крови в группе контроля зависит от генотипа FGA (Thr312Ala): она достоверно ниже у генотипа АА (1,74±0,01 г/л) по сравнению с генотипом ТТ (2,67±0,15 г/л) (р <0,05) (рис. 5).

Рисунок 5. Зависимость концентрации фибриногена в крови от различных генотипов FGA (Thr312Ala) в группах больных МС и контроля

Примечание: ТТ_ MS - пациенты с МС с генотипом TT (FGA), ТА_ MS - пациенты с МС с генотипом ТА (FGA) и АА_ MS- пациенты с МС с генотипом АА (FGA), ТТ_ К -условно здоровые люди с генотипом TT (FGA), ТА_ К - условно здоровые люди с генотипом ТА (FGA) и АА_ К- условно здоровые люди с генотипом АА (FGA).

Гомозиготы по мутантной аллели АА в группе контроля также достоверно отличались более низкой активностью плазминогена в сравнении с гетерозиготами и гомозиготами ТТ (р<0,05) (рис. 6).

Рисунок 6. Зависимость активности плазминогена в крови от различных генотипов FGA (Thr312Ala) в группе больных МС и контроля

Примечание: ТТ_ MS - пациенты с МС с генотипом TT (FGA), ТА_ MS - пациенты с МС с генотипом ТА (FGA) и АА_ MS- пациенты с МС с генотипом АА (FGA), ТТ_ К -условно здоровые люди с генотипом TT (FGA), ТА_ К - условно здоровые люди с генотипом ТА (FGA) и АА_ К- условно здоровые люди с генотипом АА (FGA).

Эффективность сорбции плазминогена на фибрине не проявляла зависимости ни от генотипа FGA, ни от аллельных варрантов.

Таким образом, в результате проведенных нами исследований была выявлена связь полиморфизма генов ACE (I/D), AGTR1 (A1166C) и FGA (T312A) с особенностями биохимического профиля больных МС и условно здоровых людей. Это говорит о влиянии генетического полиморфизма данных генов на риск возникновения заболевания.1. Разработаны методы выявления полиморфизма AGTR1 (A1166C) и FGA (Thr312Ala), применимые в рутинной практике клинико-диагностических лабораторий

2. Выявлено достоверное повышение концентрации инсулина на фоне гипергликемии у больных МС с генотипом II ACE по сравнению с генотипом DD, что свидетельствует о роли данного полиморфизма в процессе развития МС.

3. Обнаружена зависимость индекса массы тела и концентрации ХС ЛПВП от генотипа AGTR1 (A1166C) у пациентов с МС, что говорит о влиянии генетического полиморфизма данного гена в развитии МС.

4. Показана зависимость риск-факторов тромбозов (концентрации фибриногена и активности системы фибринолиза) от генотипа FGA (Thr312Ala) у практически здоровых людей.

5. В более чем половине наблюдений пациенты МС характеризовались особым типом дислипидемии - повышенный уровень холестерина низкой плотности сочетался с гипо-?-холестеринемией и повышенной концентрацией высокочувствительного С-реактивного белка, что свидетельствует о неблагоприятном течении и высоком риске осложнений атеросклероза.

Практические рекомендации

1. Для определения генетической предрасположенности к МС целесообразно использование в клинико-диагностических лабораториях молекулярного типирования ACE (I/D), AGTR1 (A1166C) и FGA (T312A)

2. Для оценки прогрессирования атеросклероза и метаболических нарушений полезно использование сочетание следующих лабораторных методов тестирования: определение концентрации ультрачувствительного С-реактивного протеина, гомоцистеина, холестерина низкой плотности прямым методом в составе липидограммы, а также уровня фибриногена и сорбции плазминогена на фибрине.

Перспективы дальнейшей разработки темы

Перспективы диссертационной работы заключаются в возможности широкого использования лабораторного исследования генетических механизмов развития МС, что позволит составить базу данных пациентов с проявлениями отдельных компонентов МС (гипертоническая болезнь, инсулинорезистентность, дислипидемии), идентифицировать ключевые звенья патогенеза указанного синдрома, исследовать более широко межгенные и ген-средовые взаимодействия, разработать в перспективе комплекса профилактических и лечебных мероприятий для каждого пациента.

Статьи в научных изданиях, входящих в перечень рецензируемых научных журналов и изданий

1. Свиряев Ю.В., Ротарь О.П., Звартау Н.Э., Конради А.О., Дорофейков В.В., Барбина А.А., Калинкин А.Л. Ассоциация артериального давления и индекса апноэ/гипопноэ во время сна и метаболических параметров у больных с синдромом Z с различными генотипами гена АСЕ. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика.- 2005.- Т. 4. №S22.- С. 286a-286.

2. Дорофеева Н.П., Кастанаян А.А., Шлык С.В., Дорофейков В.В., Барбина А.А., Нахрацкая О.И., Калмаков Р.Л., Дмитриева А.А., Сидоров Р.В., Долтмурзиева Н.С., Гребенюк С.В., Зубкова А.А., Козаренко А.И. Полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой системы у больных артериальной гипертензией и ишемической болезнью сердца, осложненной хронической сердечной недостаточностью. // Артериальная гипертензия.- 2005.- Том. 11, №4. С.-235-239.

3. Маркозашвили Д.Т., Барбина А.А., Дорофейков В.В. Ассоциация полиморфизма генов ренин-ангиотензин-альдестероновой системы и гена фибриногена А альфа-цепи с биохимическими особенностями у больных с метаболическим синдромом. // Клиническая лабораторная диагностика.- 2008.- №9.- С.42-43.

4. Батагов А.О., Барбина А.А., Иванов В.И., Дорофейков В.В. Скорость накопления гомоцистеина и интенсивность синтеза фосфолипидов у больных метаболическим синдромом. // Клиническая лабораторная диагностика.- 2008.- №9.- С.57.

5. Барбина А.А., Дорофейков В.В., Батагов А.О. Маркозашвили Д.Т. Способ определения аллелей гена ?-фибриногена (FGA) по полиморфному сайту Thr312Ala». // Патент на Изобретение РФ №2331671 2008.

6. Барбина А.А., Дорофейков В.В. Способ определения аллелей гена рецептора 1 типа к ангиотензиногену II (AGTR1) по полиморфному сайту А1166С // Заявка на Изобретение №2011153122 с приоритетом от 23.12.2011 г.

Статьи, тезисы докладов в материалах конференций и симпозиумов

7. Барбина А.А., Дорофейков В.В., Суботина Т.Ф., Маркозашвили Д.Т., Звартау Н.Э., Конради А.О. Связь полиморфизма генов альфа-фибриногена и ангиотензина II-рецептора 1 типа с сорбцией плазминогена на фибрине. // Бюллетень научно-исследовательского института кардиологии им. В.А. Алмазова.- 2005.- Т.3.- C.11.

8. A.A. Barbina, V.V. Dorofeikov, T.F. Subbotina, D.T. Markozashvili, A.A. Soshnev, N.E. Zvartau, A.O. Conradi. Association of ?-fibrinogen and angiotensin II-receptor type 1 genes polymorphisms with plasminogen sorption in patients with metabolic syndrome. // International congress “Hypertension - from Korotkov to present day”. Abstract book. St-Petersburg.- 2005.- P.12-13.

9. Маркозашвили Д.Т., Барбина А.А., Дорофейков В.В, Субботина Т.Ф., Костюхина Е.Е. Генетические аспекты метаболического синдрома у человека. // Сборник тезисов VI Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток». Москва, 2005.- С. 79-80.

10. Сошнев А.А., Барбина А.А, Скоробогатова Ю.В. Роль полиморфизмов гена аполипопротеина(а) и некоторых биохимических маркеров в развитии рестеноза после операции коронарного стентирования. // Сборник тезисов ХІІІ Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов». Москва,- 2006. Т.4.- С.547-548.

11. Сошнев А.А., Барбина А.А. Изучение роли полиморфизмов гена аполипопротеина (а) в развитии рестеноза после операции коронарного стентирования. // Сборник тезисов IX Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье». СПБ,- 2006.- С.317-318.

12. Маркозашвили Д.Т., Барбина А.А., Дорофейков В.В., Субботина Т.Ф. Связь ренин-ангиотензин-альдостероновой системы с системой фибринолиза у пациентов с метаболическм синдромом. // Сборник тезисов X Пущинской школа-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века». Москва,- 2006.- С.153-154.

13. Барбина А.А., Маркозашвили Д.Т., Дорофейков В.В., Смолина Н.А. Связь факторов риска тромбозов с полиморфизмом гена FGA (Thr312Ala) у больных метаболическим синдромом. // Тезисы 11-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология-наука XXI века".- Москва.- 2007.- С.262.

14. Барбина А.А., Маркозашвили Д.Т., Дорофейков В.В., Смолина Н.А. Связь биохимических показателей развития метаболического синдрома и полиморфизма генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы. // Тезисы 11-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология-наука XXI века". Москва.- 2007.- С.262-263.

15. Batagov A., Barbina A., Baganz F., Dorofeykov V.A. Systems analysis of metabolic syndrome and the role of gene polymorphisms AGTR1/A1166C, ACE/ID and FGA/T312A in its development. // Proceedings of Eighth International Conference on Systems Biology, Long Beach, California. 2007.- P.80.

16. Markozashvili D.T., Barbina AA.. Genetic Risk for Metabolic Syndrome: Examination of ACE (I/D), AGTR1 (А1166С) and FGA (Thr312Ala) Gene Polymorphisms Related to Lipid Metabolism and Blood Flow Disorders in Patients with Metabolic Syndrome. // Clinical chemistry and laboratory medicine.- 2008. V.46. №8.- P.133.

17. Дорофейков В.В., Машек О.Н., Кузнецов А.С., Иванов В.И., Барбина А.А., Бицадзе Р.М., Обрезан А.Г. Особенности клинико-лабораторной манифестации сердечно-сосудистой патологии у больных сахарным диабетом 2 типа и микроповреждение миокарда. // Бюллетень Федерального Центра сердца, крови и эндокринологии им. В.А. Алмазова. 2010.- №5.- С.7.

18. Барбина А.А. Связь полиморфизма гена FGA (Thr312Ala) с факторами риска тромбозов у больных метаболическим синдромом. // Тезисы III Ежегодной научной конференции молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦСКЭ имени В.А. Алмазова». Санкт-Петербург.- 2011.- С.2-3.