Особливості кінетики активації протромбіну екамуліном. Роль мезотромбіну та претромбіну 1 в формуванні фібринового згустку. Ефективність протромбіну для виявлення активації системи зсідання крові та моніторингу лікування антикоагулянтами непрямої дії.
При низкой оригинальности работы "Похідні протромбіну та їх роль у функціонуванні коагуляційної ланки системи гемостазу", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наукРоботу виконано в Київському національному університеті імені Тараса Шевченка та Інституті біохімії ім. Науковий керівник:доктор біологічних наук Платонова Тетяна Миколаївна, Інститут біохімії ім. Офіційні опоненти:доктор біологічних наук, професор Кібірєв Володимир Костянтинович, Інститут біоорганічної хімії та нафтохімії НАН України, провідний науковий співробітник відділу хімії білків та пептидів; Захист відбудеться «25 » січня 2010 р. о 1400 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.001.24 Київського національного університету імені Тараса Шевченка за адресою: м. З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Київського національного університету імені Тараса Шевченка за адресою: м.При пошкодженні судини на поверхні активованого ендотелію та тромбоцитів ініціюється каскад зсідання крові, в результаті чого утворюється тромбін. Тромбін є багатофункціональним ферментом, що виконує в системі гемостазу як прокоагулянтні функції (перетворює фібриноген на фібрин; активує фактори V, VIII, ХІ, ХІІІ зсідання крові; забезпечує активацію та агрегацію тромбоцитів) так і антикоагулянтні функції (активує протеїн С) [Зубаиров Д.М., 2000]. Відсутність N-кінцевої ділянки протромбіну в молекулі претромбіну 1 сприяє формуванню в молекулі претромбіну 1 екзосайту І, який забезпечує взаємодію з рецепторами тромбоцитів і такими білками як фібриноген, фактори V, VIII, ХІ зсідання крові, протеїн С тощо [Anderson P.J., 2003]. Як претромбін 1, так і мезотромбін локалізуються в місці активації системи зсідання крові і можуть брати участь в регуляції функціонування ланок системи гемостазу. При порушенні балансу про-та антикоагулянтної ланок системи гемостазу в кровотоці може зявлятись претромбін 1, а при порушенні карбоксилювання вітамін К-залежних білків - PIVKA-протромбін (protein induced by vitamin K absence - протеїн, що утворюється в результаті відсутності вітаміну К).У дисертаційній роботі наведено теоретичне узагальнення і нове вирішення наукової задачі, що полягає у зясуванні функціональної ролі похідних протромбіну в процесі формування тромбоцитарного та фібринового тромбу та розроблено спосіб виявлення похідних протромбіну в плазмі крові. Оптимізовано препаративний метод виділення та очистки активатора протромбіну з отрути ефи багатолускової (Echis multisquamatis) - екамуліну. Запропоновано метод отримання мезотромбіну, який полягає в активації протромбіну іммобілізованим екамуліном за присутності бензамідину. Вперше показано, що мезотромбін сприяє залученню нових тромбоцитів до процесу тромбоутворення в популяції частково активованих відмитих тромбоцитів людини та в збагаченій тромбоцитами плазмі крові людини.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вывод
1. У дисертаційній роботі наведено теоретичне узагальнення і нове вирішення наукової задачі, що полягає у зясуванні функціональної ролі похідних протромбіну в процесі формування тромбоцитарного та фібринового тромбу та розроблено спосіб виявлення похідних протромбіну в плазмі крові.
2. Оптимізовано препаративний метод виділення та очистки активатора протромбіну з отрути ефи багатолускової (Echis multisquamatis) - екамуліну. Встановлено його належність до класу В активаторів протромбіну з отрути змій (Са2 -залежних металопротеїназ). Вивчено кінетику активації протромбіну та претромбіну 1 екамуліном (Км=3,4 та 3,5 МКМ; Vmax=0,23 та 0,05 нмоль/хв відповідно).
3. Запропоновано метод отримання мезотромбіну, який полягає в активації протромбіну іммобілізованим екамуліном за присутності бензамідину.
4. Вперше показано, що мезотромбін активує фактор ХІІІ зсідання крові. Підтверджено, що ефективність згортання мезотромбіном фібриногену менша порівнянно з тромбіном, тоді як претромбін 1 на формування фібринового згустку не впливає.
5. Вперше показано, що мезотромбін сприяє залученню нових тромбоцитів до процесу тромбоутворення в популяції частково активованих відмитих тромбоцитів людини та в збагаченій тромбоцитами плазмі крові людини. Встановлено, що, мезотромбін стимулює, а претромбін 1 пригнічує колаген-, ADP- та адреналін-індуковану агрегацію тромбоцитів.
6. Розроблено діагностичний тест на основі екамуліну для визначення загального рівня протромбіну та його функціонально неактивних форм в плазмі крові. Запропонований тест є придатним за умов гепаринотерапії та при накопиченні інгібіторів зсідання в плазмі крові. Встановлено, що виявлення претромбіну 1 є маркером тромбофілії за системного червоного вовчака.
7. Встановлено, що запропонований діагностичний тест дозволяє підібрати індивідуальну дозу антикоагулянтів непрямої дії для кожного окремого пацієнта та контролювати ефективність терапії, що проводиться.
Список литературы
1. Корольова Д. С. Використання екамуліну - активатора протромбіну із отрути ефи багатолускової в клінічній лабораторній діагностиці / Д. С. Корольова, Р. П. Виноградова, Т. М. Чернишенко, Т. М. Платонова, Г. Л. Волков // Лабораторна діагностика. - 2006. - Т. 37, № 3. - С. 18-22. (Особистий внесок здобувача - розробка модельних систем для створення тесту лабораторної діагностики з використанням екамуліну).
2. Корольова Д. С. Вплив гепарину на показники тестів протромбінового та екамулінового часу / Д. С. Корольова, В. О. Чернишенко, Т. М. Платонова // Лабораторна діагностика. - 2006. - Т. 38, № 4. - С. 22-26. (Особистий внесок здобувача - розробка модельних систем для визначення чутливості тестів екамуліновий та протромбіновий час до гепаринів).
3. Корольова Д. С. Тромбопластин та його використання у клінічній лабораторній діагностиці / Д. С. Корольова, В. О. Чернишенко, Т. М. Платонова // Експериментальна та клінічна фізіологія і біохімія. - 2007. - Т. 4, № 40. - С. 65-71. (Особистий внесок здобувача - аналіз стану системи гемостазу за гострого інфаркту міокарду).
4. Корольова Д. С. Дослідження впливу гепарину на процес активації протромбіну екзогенними активаторами / Д. С. Корольова // Укр. біохім. журнал. - 2006. - Т. 78, № 6. - С. 139.
5. Корольова Д. С. Використання екзогенних активаторів протромбіну у тест-системах лабораторної діагностики / Д. С. Корольова // ІХ Український біохімічний зїзд: 24-27 жовтня, 2006 р.: Збірник тез, том 2. - Х., 2006. - С. 199.
6. Корольова Д. С. Процес активації протромбіну людини активатором із отрути ефи багатолускової / Д. С. Корольова // Молодь та поступ біології: ІІІ Міжнародна наукова конференція студентів та аспірантів, 23-27 квітня 2007 р.: збірник тез. - Л., 2007. - С. 66-67.
7. Королева Д. С. Активация протромбина активатором из яда эфы многочешуйчатой / Д. С. Королева, Т. Н. Платонова // Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки: Международная конференция, 25-26 октября 2007 г.: тезисы докладов. - Минск, 2007. - С. 15-16.
8. Корольова Д. С. Вплив антитіл, що накопичуються за розвитку системного червоного вовчаку, на процес активації та агрегації тромбоцитів / Д. С. Корольова // Укр. біохім. журн. - 2008. - Т. 80, № 4. - С. 162.
9. Korolova D. Echis multisquamatis venom enzymes acting on haemostasis / Volodymyr Chernyshenko, Darya Korolova // Bridges in Life Sciences: Second Annual Review of the Regional Cooperation for Health, Science and Technology Consortium, 4 october, 2008: theses of report. - Zagreb, 2008. - Р. 37.
10. Корольова Д. С. Роль продуктів розщеплення протромбіну в функціонуванні тромбоцитарного гемостазу / Д. С. Корольова, Т. М. Платонова // Молодь та поступ біології: V Міжнародна наукова конференція студентів та аспірантів, 12-15 травня 2009 р.: збірник тез. - Л., 2009. - С. 43-44.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
