Гистологическое выявление криптоспоридии в слое микроворсинок эпителиоцитов тонкого и толстого кишечника свиней. Диагностика криптоспоридиоза у взрослых свиней и поросят. Механизм поражения желудочно-кишечного тракта, легких, бронхов, трахеи животного.
При низкой оригинальности работы "Патоморфологические изменения во внутренних органах поросят при спонтанном криптоспоридиозе", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Криптоспоридиоз - протозойная зоонозная болезнь сельскохозяйственных животных и человека, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, легких, бронхов, трахеи, органов иммунной системы, желчных протоков, нарушением процессов пищеварения и всасывания в кишечнике, приводящим к развитию поносов, бронхитов, пневмоний, иммунодефицитам и обезвоживанию организма [2]. При этом они выявили, что у поросят 1-30-дневного возраста в желудочно-кишечном тракте отмечаются: деформация и атрофия ворсинок, гибель желез с замещением их клеточными элементами, состоящими из эозинофилов и лимфоцитов, расширение просветов крипт, слизистая дистрофия и разрушение эпителиоцитов макро-, микрогаметоцитами и ооцистами. С целью повышения эффективности диагностики криптоспоридиоза в случае низкой интенсивности инвазии параллельно проводились копроскопические исследования методом седиментации эфиром с последующей флотацией насыщенным раствором сахарозы. Для гистологического исследования отбирались кусочки 12-перстной, тощей, подвздошной, слепой, ободочной кишок, сердца, печени, почек, брыжеечных, поверхностных паховых лимфоузлов, селезенки. При низкой степени инвазии для повышения концентрации ооцист использовали метод седиментации (формалиново-эфирный метод) с последующей флотацией насыщенным раствором сахарозы.
Введение
Проблема кишечных паразитарных заболеваний остается актуальной для ветеринарии ввиду их высокой распространенности, отрицательного влияния на иммунный статус животных, снижение продуктивности и качества продукции [1].
Криптоспоридиоз - протозойная зоонозная болезнь сельскохозяйственных животных и человека, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, легких, бронхов, трахеи, органов иммунной системы, желчных протоков, нарушением процессов пищеварения и всасывания в кишечнике, приводящим к развитию поносов, бронхитов, пневмоний, иммунодефицитам и обезвоживанию организма [2]. Широкое распространение данного заболевания связано с большим количеством природных резервуаров инфекции, низкой инфицирующей дозой и высокой резистентностью возбудителя к дезинфектантам и противопаразитарным препаратам [3]. Практически во всех регионах Европы ооцисты Cryptosporidium присутствуют в поверхностных, подземных, сточных и рекреационных водах [4]. По данным исследователей, экстенсивность криптоспоридиозной инвазии поросят в хозяйствах Республики Беларусь составляет 14,37 - 30,96% [5]. Трудность получения точных данных по эпиднадзору за криптоспоридиозом связана с тем, что в большинстве случаев инфекция имеет самокупирующийся характер и специфического лечения для нее пока не существует [6].
Патоморфологические изменения при криптоспоридиозе поросят как моноинвазии в России исследованы В.А. Васильевой (1998), а в последствии Е.В. Калмыковой (2000). При этом они выявили, что у поросят 1-30-дневного возраста в желудочно-кишечном тракте отмечаются: деформация и атрофия ворсинок, гибель желез с замещением их клеточными элементами, состоящими из эозинофилов и лимфоцитов, расширение просветов крипт, слизистая дистрофия и разрушение эпителиоцитов макро-, микрогаметоцитами и ооцистами. Соединительная ткань была инфильтрирована полиморфно-клеточными элементами, мышечная оболочка истончена и растянута [9].
Особенности патогенеза криптоспоридиоза поросят в условиях Республики Беларусь не изучались. В связи с этим наши исследования были направлены на выяснение роли С. parvum в патогенезе и их влияние на степень выраженности патоморфологических изменений у поросят подсосного периода.
Материалы и методика исследований. Целью данной работы было проведение комплексного изучения патоморфологических изменений при спонтанной инвазии криптоспоридиоза у поросят.
Был исследован патматериал от 40 трупов и вынужденно убитых поросят в возрасте 1-45 дней, принадлежавших хозяйствам Республики Беларусь. Для подтверждения диагноза на криптоспоридиоз проводилось окрашивание мазков-отпечатков со слизистой кишечника методами Циля-Нильсена, Романовского-Гимза. С целью повышения эффективности диагностики криптоспоридиоза в случае низкой интенсивности инвазии параллельно проводились копроскопические исследования методом седиментации эфиром с последующей флотацией насыщенным раствором сахарозы.
Для гистологического исследования отбирались кусочки 12-перстной, тощей, подвздошной, слепой, ободочной кишок, сердца, печени, почек, брыжеечных, поверхностных паховых лимфоузлов, селезенки. Кусочки органов фиксировали в 10% растворе формалина. Гистосрезы получали на замораживающем микротоме и окрашивали гематоксилин-эозином.
Результаты исследований и их обсуждение криптоспоридия эпителиоцит свинья
Ооцисты криптоспоридий при окраске зафиксированного мазка из содержимого кишечника поросенка карболовым фуксином по методу Циля-Нильсена приобретали пурпурный цвет с разными оттенками: от ярко-красного цвета до бледно-розового. Они представляли собой округлые образования размером в среднем 5,4?4,6 мкм. Внутри некоторых ооцист возможно было рассмотреть удлиненные спорозоиты. Сопутствующая микрофлора окрашивалась в синие тона. В среднем выявляли 0-2 ооцисты в поле зрения микроскопа, что соответствует средней степени инвазии по Никитину В.Ф. (2007 г.) [7].
В ходе научных исследований мы также осуществляли окрашивание азур-эозином по Романовскому-Гимза. Ооцисты криптоспоридий имели вид неокрашенных или слабо окрашенных по периферии округлых образований диаметром до 5 мкм. Внутри некоторых ооцист удавалось рассмотреть бледно-голубые удлиненные и слегка изогнутые тельца (спорозоиты) с красноватыми гранулами внутри (ядро). Спорозоиты располагались по периферии ооцисты, оставляя ее центральную часть пустой.
При низкой степени инвазии для повышения концентрации ооцист использовали метод седиментации (формалиново-эфирный метод) с последующей флотацией насыщенным раствором сахарозы. При микроскопии выявляли ооцисты округлой формы, полупрозрачные с почти бесцветной, сероватой оболочкой, размером 5,4?4,6 мкм. Под влиянием флотационного раствора некоторые ооцисты приобретали форму полушара и даже контура полукруга. Оболочка ооцист имела вид четкого контура, окаймляющего морфологические структуры. Ооцисты выявлялись в виде розовых округлых образований.
В результате проведенных нами патоморфологических исследований были выявлены следующие изменения.
Макроскопически стенка желудка была утолщена, слизистая оболочка набухшая, покрасневшая, матовая, покрыта серой слизью. Гистологически в слизистой оболочке желудка изменения характеризовались очаговым переходом призматического эпителия в кубический. Покровный однослойный многорядный эпителий был представлен призматическими клетками с маленьким базофильным ядром и слабо эозинофильной цитоплазмой. В желудочных железах отмечали уменьшение шейки желез, а также уменьшение количества главных и обкладочных клеток, в большинстве полей зрения они были замещены кубическими клетками со светлой пенистой цитоплазмой. Просветы желез были расширены. В мышечной пластинке слизистой оболочки был выражен серозный отек, слабая очаговая инфильтрация нейтрофильными лейкоцитами, лимфоцитами, гистиоцитами.
Слизистая оболочка двенадцатиперстной и тощей кишок была складчатой, утолщенной. Волокна мышечной оболочки дезориентированы в зигзагоподобные складки, местами фрагментированы, отечны, цитоплазма мышечных волокон содержала белковую зернистость. Межмышечная соединительная ткань была инфильтрирована моноцитами, нейтрофилами, лимфоцитами и эозинофилами. Собственная пластинка слизистой оболочки также была инфильтрирована лимфоидно-макрофагальными пролифератами. Клетки дуоденальных желез находились в состоянии гидропической дистрофии. Некоторые ворсинки были деформированы, полиморфны. В области щеточной каемки выявлялись эндогенные стадии развития С. parvum в прикрепленном и свободном состоянии.
В тощей кишке мышечная оболочка имела сходные изменения. Подслизистая основа была разрыхлена, с крупными очагами скопления однотипных округлых дуоденальных желез с артериальными и венозными сосудами и лимфатическими щелями, мелкими клеточными инфильтратами из лимфоцитов, гистиоцитов и плазматических клеток. Многие клетки дуоденальных желез были вакуолизированы, содержали белковые гранулы. Мышечная пластинка слизистой оболочки была тонкая, местами плохо прослеживалась. Собственная пластинка слизистой оболочки была инфильтрирована моноцитами, макрофагами, лимфоцитами и эозинофилами. Ворсинки были утолщены и укорочены, в просвете содержали скопления меронтов, прикрепленных к щеточной каемке призматического эпителия (рисунок 1), бокаловидные клетки были с вакуолизированной цитоплазмой. Просвет кишечных крипт был расширен, в нем имелись следы слизи, единичные клетки слущенного эпителия, лимфоциты, гистиоциты, единичные плазматические клетки.
В подвздошной кишке мышечная и серозная оболочки были несколько истончены, с очагами клеточной инфильтрации. Межмышечная соединительная ткань была отечна, местами инфильтрирована единичными моноцитами и нейтрофилами. Мышечная пластинка слизистой оболочки тонкая, местами разрыхлена, несколько отечна, содержала лимфоциты и гистиоциты. Собственная пластинка слизистой оболочки была отечна, инфильтрирована лимфоидно-гистиоцитарными клетками. Полиморфные, местами деформированные ворсинки в просвете содержали ооцисты. Эпителиоциты находились в состоянии зернистой и гидропической дистрофии, апикальная часть ворсинок изредка была десквамирована, а микроворсинки атрофированы. В просвете кишечных крипт обнаруживались следы слизи и единичные клетки слущенного эпителия. Крипстоспоридии диффузно инвазировали апикальную часть эпителоцитов (рисунок 2).
В слепой кишке слизистая была набухшая, слегка покрасневшая, незначительно покрыта слегка опалесцирующей слизью. Некоторые эпителиоциты слизистой оболочки были в состоянии зернистой дистрофии, бокаловидные клетки были гиперплазированы и переполнены слизью. Просвет крипт незначительно был заполнен десквамированными эпителиоцитами, детритом. В слизистой оболочке были выявлены неоднородные участки инфицирования щеточной каемки эпителиоцитов кишечника криптоспоридиями в различных стадиях эндогенного развития. Собственная пластинка слизистой оболочки была отечна, очаговой инфильтрирована лимфоидно-гистиоцитарными клетками. Кровеносные сосуды были резко расширены. Мышечная оболочка слегка отечна и разрыхлена.
В ободочной кишке состояние мышечной оболочки и подслизистой основы характеризовалось небольшой отечностью, очаговой инфильтрацией лимфоидно-гистиоцитарными клетками, гиперплазией бокаловидных клеток крипт.
Сосуды слизистой оболочки всех исследованных кишок были в состоянии венозной гиперемии, гомеостаза, местами наблюдали выход и скопление эритроцитов за пределами стенок сосудов.
В миокардиоцитах сердца выявляли зернистую дистрофию. Микроскопически мышечные волокна были набухшие, увеличены в размере, цитоплазма клеток была мутной, содержала значительное количество образований белковой природы (капли, зерна).
Печень макроскопически была правильной формы, края слегка закруглены, темно-красного цвета, упругой консистенции, рисунок дольчатого строения на разрезе сглажен. Гистологически гепатоциты имели выраженный полиморфизм, были набухшие, разных размеров (анизоцитоз). Цитоплазма с неравномерно выраженной белковой зернистостью, ядра различной величины, встречались двуядерные и многоядерные клетки (анизонуклеоз). Центральные вены и прилежащие к ним синусоидные капилляры были расширены, заполнены эритроцитами, нередкими были очаги диапедезных кровоизлияний.
Почки были незначительно увеличены в объеме, правильной формы, коричневого цвета, упругой консистенции, граница коркового и мозгового вещества слегка сглажена. При гистоисследовании почек чаще выявлялась зернистая дистрофия эпителия извитых канальцев, апикальный отдел цитоплазмы разрушен и просвет приобрел звездчатую форму. Просветы проксимальных канальцев Цитоплазма эпителия содержала многочисленные зерна (розового цвета). В полости капсулы Боумена выявлялся серозный экссудат. Почечные клубочки были отечны, а капилляры переполнены эритроцитами. Наблюдалась умеренная пролиферация подоцитов.
Легкие были неспавшиеся, темно-красного цвета, тестоватой консистенции, рисунок дольчатого строения был сглажен. Гистологически в просвете бронхиол был выявлен слущенный бронхиальный эпителий, небольшое количество слизи. Местами стенки альвеол эмфизематозно расширены, в просвете изредка выявлялись альвеолярные макрофаги.
В лимфоузлах выявлялись явления лимфостаза. Лимфоузлы были увеличены в объеме, упругой консистенции, на разрезе паренхима была светло-розового цвета, сочная и выбухала из капсулы.
Селезенка была правильной формы, края были острые, красного цвета, рисунок трабекулярно-узелкового строения выражен. При гистоисследовании узелки белой пульпы были гиперплазированы, а реактивные центры расширены.
Заключение. На основании наших исследований выяснили, что наиболее удобным и эффективным для диагностики криптоспоридиоза (особенно при низкой степени инвазии) является метод сочетания седиментации (формалиново-эфирный метод) с последующей флотацией, насыщенным раствором сахарозы, т.е. ооцисты криптоспоридий не только легко идентифицируются, но и очищены от побочный примесей, кишечной микрофлоры и т.д. При данном методе интенсивность выделения ооцист из аналогичной навески фекалий была максимальной.
Патоморфологическими исследованиями установлено, что у павших животных при криптоспоридиозе основные патологоанатомические изменения локализовались в желудочно-кишечном тракте (простейшие обладают выраженной эпителиотропностью) и характеризовались катаральным гастроэнтеритом и колитом, серозным лимфаденитом брыжеечных узлов. В процессе эндогенного развития криптоспоридии инвазируют эпителий тонких кишок диффузно, вызывают атрофию ворсинок, дистрофию бокаловидных клеток, гипертрофию крипт и инфильтрацию собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистого слоя плазматическими клетками, полиморфноядерными лейкоцитами и лимфоцитами.
Список литературы
1. Краснова, О.Г. Криптоспоридиоз телят и меры борьбы с ним: автореф. дисс.... канд. вет. наук / О.Г. Краснова. - Саратов, 2000. - 21 с.
2. Анализ проблемы криптоспоридиоза животных и пути решения / А.И. Ятусевич // Ветеринарная медицина Беларуси. - №1. - 2001. - С. 24-26.
4. Joachim, A. Human Cryptosporidiosis: An Update With Special Emphasis on the Situation of Europe / A. Joachim // Journal of Veterinary Medicine. Series B, 51 (6) - 2004. - P.251-259.
5. Нестерович, С.Г. Криптоспоридиоз свиней (экспериментально-клинические исследования, особенности эпизоотологии, патогенеза и меры борьбы): автореф. дис.... канд. ветеринарных наук: 03.00.19 / С. Г. Нестерович. - Витебск, 2003. - 23 с.
6. Stady of Infectious Intestinal Disease in England: Rates of the community, Presenting to General Practice, and Reported to National Surveillance. BMJ, 318 (7190): - Wheeler JG [et al.] - 1999. - P. 1046-1050.
8. Дехнич, А.В. Клинические и микробиологические аспекты криптоспоридиоза / А.В. Дехнич // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - Том 2, № 3. - 2000. - с.51-57.
9. Васильева, В.А. Криптоспоридиоз и эзофагостомоз свиней при моноинвазии и паразитоценозе: автореф. дис... канд. ветеринарных наук: 03.00.19 / В.А. Васильева. - Москва, 1998. - 41 с.
10. Prevalence of cryptosporidial infection in piglets with clinical signs of enterophaty / I. Pavlovic [et. al.] // Institute for Animal Husbandry. Belgrade-Zemun Biotechnology in Animal Husbandry 23 (5-6). - 2007. - p. 229 - 235.
11. Васильева, В.А. Патоморфологические изменения в отдельных органах и тканях поросят при спонтанном криптоспоридиозе / В.А. Васильева, Т.И. Решетникова // Успехи современного естествознания. - 2008. - №5. - С.51.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
