Патогенетичні основи вдосконалення допоміжних репродуктивних технологій у жінок, які перенесли хронічні запальні захворювання органів малого таза - Автореферат

Економічна актуальність проблеми полягає в тому, що сучасні методи відновлення репродуктивної функції досить вартісні як для держави, так і для пацієнтів. Запальні захворювання органів малого таза як причина порушення репродуктивної функції давно привертають до себе пильну увагу дослідників. Причина полягає в тому, що, за даними різних авторів, частота безплідності, яка обумовлена ХЗЗОМТ, становить 35-60% серед пацієнток з порушенням репродуктивної функції (Л.І.Іванюта, 2006; В.К.Чайка, 2007, Л.Б.Маркін, 2010). Варто врахувати, що 70% хворих становлять жінки у віці до 25 років, 75% - жінки, що не народжували, а в кожної 4-ої виникають ускладнення, які загрожують безплідністю. Погляди, які сформувалися на етіопатогенетичні особливості порушення репродуктивної функції в результаті ХЗЗОМТ, насамперед спрямовані на анатомо-функціональні зміни стану маткових труб, вплив спайкового процесу в малому тазі й у порожнині матки.Експериментальна частина включала моделювання експериментального запалення у тварин (n=42), з яких 6 інтактних мишей увійшли в контрольну експериментальну групу 1.1 (ЕГ1.1), 36 тварин з експериментальним запаленням склали експериментальну групу 1.2 (ЕГ1.2), вивчення результатів КГЯ, стану яйцеклітин і ембріонів на тлі експериментального запалення, для чого були виділені контрольна експериментальна група 2.1 (ЕГ2.1 - 18 тварин), експериментальна група 2.2 (ЕГ2.2, n=21), у якої здійснювали КГЯ як етап ДРТ на тлі експериментального хронічного запалення яєчників. Для вивчення впливу терапії КП на результати КГЯ, стан ооцитів й ембріонів при експериментальному запаленні була виділена експериментальна група 2.3 (ЕГ2.3, n=21). Оцінка стану ооцитів й ембріонів в експерименті проводилася з використанням конфокальної скануючої лазерної мікроскопії під мікроскопом LSM-510 META (Carl Zeiss, Німеччина), у режимі звичайної флуоресценції на мікроскопі Axio Observer Z1 (Carl Zeiss, Німеччина), на люмінесцентному мікроскопі ЛОМО-МІКМЕД-2 з використанням барвників JC-9 (Molecular Probes, USA), JC-1 (НТК «Інститут монокристалів» НАНУ, м.Харків), PI (Sigma, USA), АО (Sigma, USA), Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich), DAPI (Sigma, USA), CFSE (Sigma-Aldrich), ANNCY3/6-CFDA (Sigma-Aldrich). Результати, які одержали, свідчили про те, що кількість ооцитів, отриманих у групі, в якій проводилася терапія КП (ЕГ2.3), була вірогідно вищою в порівнянні з ЕГ2.2 і наближалася до показників контрольної групі (ЕГ2.1). Серед цитокінів периферичної крові істотні відмінності від контролю були виявлені у вмісті ІЛ-6, рівень якого був вірогідно вище, ніж у контролі (P<0,05), ІЛ-4, рівень якого в 1,7 разів був нижче, ніж у контролі, а також рівня ІЛ-2 (P<0,05), що визначався в групі хворих і не був виявлений у контролі.Встановлено, що хронічне запалення органів малого таза негативно впливає на репродуктивну функцію та результати лікування безпліддя методами ДРТ, знижуючи їх ефективність на 26,6%. Вивчення впливу хронічного запалення яєчників на показники КГЯ, стан ооцитів й ембріонів у експериментальних тварин виявило істотні порушення функції яєчників, зокрема їх здатність відповідати на стимуляцію екзогенними гонадотропінами у вигляді зменшення кількості ооцитів на 34,8%, зигот - на 52,9% і 2-клітинних ембріонів - на 47,7%, а також погіршення морфології ембріонів. Доведена роль індукції апоптозу в цитоплазмі ооцитів в формуванні порушень репродуктивної функції після перенесених ХЗЗОМТ, що в експерименті підтверджувалося достовірним збільшенням кількості ооцитів і зигот з ознаками раннього апоптозу, зниженням енергетичного статусу хондріома ооцитів. Терапія КП нівелює перебіг запалення в експерименті, що виражається у зміні клітинного складу осредку запалення й лейкоцитарної реакції периферичної крові - значно пригнічується нейтрофільна й підсилюється макрофагально-фібробластична реакція, збільшується кількість примордіальних фолікулів, відновлюється здатність яєчників реагувати на КГЯ, що виражається в збільшенні кількості ооцитів (у 1,5 рази) і ранніх ембріонів (в 2 рази), поліпшенні їх енергетичного статусу. Для хворих на безплідність, яка обумовлена ХЗЗОМТ, встановлені характерні зміни стану яйцеклітин і ембріонів у вигляді зменшення кількості ооцитів з оптимальною морфологією, збільшення кількості яйцеклітин з ознаками пізньої стадії апоптозу, зниження здатності до запліднення, зменшення кількості ембріонів з оптимальною морфологією й збільшення кількості ембріонів з високим відсотком фрагментації, зниження частоти імплантації (група ХЗЗОМТ - 24,3±3,4 %, контроль - 36,8±2,2%), що негативно позначалося на результатах відновлення репродуктивної функції при використанні ДРТ (вагітність в групі ХЗЗОМТ - 41,7% , контроль-68,3%).

Основний зміст роботи

У дисертації подано теоретичне обґрунтування й нове вирішення актуальної наукової проблеми сучасної гінекології та репродуктивної медицини, яке полягає в підвищенні ефективності відновлення репродуктивної функції у жінок, які перенесли ХЗЗОМТ, при використанні ДРТ.

1. Встановлено, що хронічне запалення органів малого таза негативно впливає на репродуктивну функцію та результати лікування безпліддя методами ДРТ, знижуючи їх ефективність на 26,6%. При цьому важливу роль у порушенні репродуктивної функції відіграє комплекс імунологічних, ембріологічних, морфологічних, функціональних змін.

2. Розроблена модель реактивного хронічного запалення яєчників у лабораторних мишей дозволила встановити патогенетичні особливості й одержати достовірні результати клініко-імунологічного й морфологічного аналізу порушень репродуктивної функції в умовах експерименту.

3. Вивчення впливу хронічного запалення яєчників на показники КГЯ, стан ооцитів й ембріонів у експериментальних тварин виявило істотні порушення функції яєчників, зокрема їх здатність відповідати на стимуляцію екзогенними гонадотропінами у вигляді зменшення кількості ооцитів на 34,8%, зигот - на 52,9% і 2-клітинних ембріонів - на 47,7%, а також погіршення морфології ембріонів.

4. Доведена роль індукції апоптозу в цитоплазмі ооцитів в формуванні порушень репродуктивної функції після перенесених ХЗЗОМТ, що в експерименті підтверджувалося достовірним збільшенням кількості ооцитів і зигот з ознаками раннього апоптозу, зниженням енергетичного статусу хондріома ооцитів.

5. В експериментальному дослідженні доказана патогенетична доцільність використання кріоекстракту плаценти при хронічному запаленні в репродуктивній системі. Терапія КП нівелює перебіг запалення в експерименті, що виражається у зміні клітинного складу осредку запалення й лейкоцитарної реакції периферичної крові - значно пригнічується нейтрофільна й підсилюється макрофагально-фібробластична реакція, збільшується кількість примордіальних фолікулів, відновлюється здатність яєчників реагувати на КГЯ, що виражається в збільшенні кількості ооцитів (у 1,5 рази) і ранніх ембріонів (в 2 рази), поліпшенні їх енергетичного статусу.

6. Встановлено, що у жінок з порушенням репродуктивної функції, яке обумовлене ХЗЗОМТ в 80,4% випадків виявлені відхилення показників імунного статусу. Найбільш характерними для КЛІ були дефіцит імунорегуляторних клітин з перевагою Т-хелперів (CD4 ) і дефіцитом Т-супресорів/цитоксичних (CD8 ), збільшення вмісту NKT-клітин і T-reg клітин.

7. При безплідності, що обумовлена ХЗЗОМТ, виявлене порушення ГЛІ за типом аутосенсибілізації до оваріальних антигенів, та антигенів блискучої оболонки. Зміни цитокінового профілю характеризувалися підвищенням рівня прозапальних цитокінів ІЛ-2, ІЛ-6 і зниженням концентрації протизапального ІЛ-4. Зміни локального імунітету в ФР характеризувалися збільшенням вмісту HLA-DR клітин на 34,8% , CD16 56 - клітин на 27,4%, рівня АОАТ на 47,4%, АТ до ZP на 50%, гіперпродукцією ІЛ-2 (група ХЗЗОМТ - 2,4±0,8, контроль - 0,2±0,5 пкг/мл).

8. Проведення КГЯ в рамках ДРТ оказує самостійну імуномодулюючу дію: при зіставленні середньої частоти хворих з нормативними значеннями показників до й після індукції суперовуляції встановлене їх збільшення після КГЯ - з 19,9% до 26,8% (?=2,78; P<0,05). Значення коефіцієнта кореляції рангових структур показників до й після КГЯ для КЛІ - ?s =0,30, для показників ГЛІ - ?s = 0,71 і ?s = 0,96 для цитокінового профілю, що свідчить про найбільший вплив на показники КЛІ.

9. Для хворих на безплідність, яка обумовлена ХЗЗОМТ, встановлені характерні зміни стану яйцеклітин і ембріонів у вигляді зменшення кількості ооцитів з оптимальною морфологією, збільшення кількості яйцеклітин з ознаками пізньої стадії апоптозу, зниження здатності до запліднення, зменшення кількості ембріонів з оптимальною морфологією й збільшення кількості ембріонів з високим відсотком фрагментації, зниження частоти імплантації (група ХЗЗОМТ - 24,3±3,4 %, контроль - 36,8±2,2%), що негативно позначалося на результатах відновлення репродуктивної функції при використанні ДРТ (вагітність в групі ХЗЗОМТ - 41,7% , контроль -68,3%).

10. Для визначення прогнозу ефективності ДРТ у жінок, які перенесли ХЗЗОМТ розроблено алгоритм, який включає вивчення анамнестичних, імунологічних, гаметних й ембріологічних показників. Діагностична цінність щодо прогнозу ефективності ДРТ для даних анамнезу становить I=0,71, для показників гамето-ембріонального фактора I=0,92, показників системної КЛІ I=0,95, показників системної ГЛІ I = 0,67, системного цитокінового профілю I = 0,96, локальної КЛІ у ФР I = 1,42, локального цитокінового профілю I = 1,10 і ГЛІ у ФР I = 0,54. Патогенетичний вектор формування порушення репродуктивної функції у хворих на безплідність, яка обумовлена ХЗЗОМТ, зміщений убік порушень імунного гомеостазу з найбільшим акцентом на зміни показників КЛІ й цитокінового профілю мікрооточення ооциту.

11. Встановлено, що терапія з використанням КП в рамках підготовки до ДРТ має позитивну дію на КЛІ у вигляді корекції основних популяцій імунорегуляторних клітин і їхнього співвідношення - концентрація CD4 (з 38,7±2,2 до 33,1±1,4), ІРІ (CD4 /CD8 , з 1,5±0,06 до 1,22±0,1), клітини, які експресують маркер HLA-DR (з 17,2±1,0 до 14,0±1,2), позитивного впливу на індивідуальну динаміку змін показників NK (CD16 56 CD3-) і NKT-клітин (CD16 56 CD3 ). Виявлено, що КП має виражений десенсибілізуючий ефект, який виражається у зниженні рівня неспецифічних антитіл, а також коригуючого впливу на стан цитокінового профілю у вигляді нормалізації концентрації ІНФ? (зниження на 41,4%), ІЛ-4 (збільшення на 50%) і ІЛ-10 (на 56,0%). Імунотропна терапія КП впливає на стан як КЛІ, так ГЛІ й цитокінового профілю в мікрооточенні ооциту. Порівняльний аналіз впливу різних видів імунокорекції показав переваги терапії КП, які відображалися у більшої кількості сприятливих реакцій КЛІ, ГЛІ, обміну цитокінів як на системному рівні, так і на рівні мікрооточення ооциту.

12. Виявлено, що використання препарату КП у пацієнток, які перенесли ХЗЗОМТ, позитивно вливає на стан ооцитів та призводить до зменшення кількості ооцитів з ознаками апоптозу в 2,2 рази (з 1,8±0,4 до 0,8±0,2), та має ембріокорегуючий ефект у вигляді збільшення кількості ембріонів 1-го класу (з 32,7±4,9% до 61,1±5,4%), частоти культивування до стадії бластоцисти (з 0,4±0,2 до 1,6±0,5), кількості зигот, які характеризуються нормальними темпами дроблення й частоти імплантації ембріонів при лікуванні безпліддя методами ДРТ.

13. Запропонований патогенетично обґрунтований комплекс лікувальних заходів, що спрямований на оптимізацію методів ДРТ із застосуванням імунокоректора КП, сприяє відновленню репродуктивного здоровя у жінок, які перенесли ХЗЗОМТ, і підвищує ефективність ДРТ (на 29,3%).

Практичні рекомендації

1. При плануванні ДРТ у пацієнток, які перенесли ХЗЗОМТ, необхідно здійснювати індивідуальне прогнозування ефективності, особливо при наявності невдалих спроб в анамнезі. Для здійснення повноцінного прогнозування результатів ДРТ, комплекс діагностичних заходів у пацієнток з порушенням репродуктивної функції, яке обумовлене ХЗЗОМТ, повинен включати дослідження імунного статусу з визначенням основних регуляторних субпопуляцій імунокомпетентних клітин, вміст у периферичній крові NKT-клітин (CD16 56 CD3 ), і T-reg (CD4 CD25 ), а також цитокінового профілю периферичної крові (ІЛ-10 і ІНФ?).

2. Система індивідуального прогнозу, крім даних анамнезу й показників імунного статусу, включає оцінку гамето-ембріональних показників ДРТ. При повторних спробах ДРТ доцільне використання при прогнозуванні гамето-ембріональних показників попередньої спроби ДРТ.

3. У випадку наявності невдалих спроб ДРТ в анамнезі в пацієнток з порушенням репродуктивної функції, яке обумовлене ХЗЗОМТ, в процесі проведення наступних спроб ДРТ доцільно проводити додаткові дослідження, що включають визначення у ФР показників клітинної ланки імунітету (CD4 , CD16 56 CD3 , HLA-DR CD3 , HLA-DR CD3-) і цитокінів (ІЛ-10, ІНФ? і ІЛ-6), що мають високу прогностичну цінність з погляду ефективності ДРТ.

4. Визначенні в результаті використання запропонованого в дисертаційній роботі прогностичного алгоритму, несприятливого прогнозу э підставою для проведення імунокоригуючої терапії. Препаратом вибору при цьому є КП, який вводиться у вигляді 5-и підшкірних інєкцій по 1,8 мл з інтервалом 2 доби на протязі лютеїнової фази (або за 10 діб до менструації при ановуляторному циклі) менструального циклу, що передує початку лікування.

1. Грищенко Н. Г. Микрогемоциркуляция при остром общем охлаждении на фоне введения криоконсервированного экстракта плаценты / [Грищенко Н. Г., Черемской А. К., Слета И. В., Луценко Д. Г., Прокопюк О. С., Чижевский В. В.] // Проблеми кріобіології. - 2005. - Том 15, № 3. - С. 479-481 (Автором здійснено огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, аналіз отриманих даних).

2. Грищенко Н. Г. Использование трансдермальной формы эстрадиола (Дивигель) для моделирования эндометрия в стимулированных циклах внутриматочных инсеминаций (ВМИ) / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Геродес А. Г., Луцкая Л. И.] //Проблемы, достижения и перспективы развития медикобиологических наук и практического здравоохранения. Труды Крымского государственного университета им. С.И.Георгиевского. - 2006. - Том 142, часть 2. - С. 35-37 (Дисертантом здійснено огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, клінічні спостереження, аналіз отриманих результатів, сформульовані висновки).

3. Грищенко Н. Г. Лечение бесплодия у пациенток с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ) методом ОИВ с использованием криоконсервированных эмбрионов / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Геродес А. Г., Петрушко М. П., Терпячая И. В.] // Збірник наукових праць співробітників НМАПО ім. П.Л.Шупика. - Київ, 2006. - С. 107-111 (Автор здійснив відбір та обстеження жінок, узагальнення отриманих результатів, формулювання висновків).

4. Грищенко М. Г. Використання плазмозамінюючих розчинів у лікуванні деяких порушень імунітету при безплідді імунологічного генезу / М. Г. Грищенко, Ю. О. Котлік // Вісник Харківського національного університету імені В. Н. Каразіна. - Харків, 2006. - № 720 (12). - С. 79-82 (Дисертант здійснив відбір та обстеження жінок, аналіз отриманих результатів, сформулював висновки).

5. Грищенко Н. Г. Использование криоконсервированной плацентарной ткани при нарушениях сперматогенеза у мужчин / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Геродес А. Г., Никитченко Ю. В., Луцкая Л. И., Прокопюк О. С. // Здоровье мужчины.- 2007. - №2 (21). - С. 168-172. (Автором проведені клінічні спостереження, відбір та обстеження жінок, аналіз отриманих результатів, формулювання висновків).

6. Грищенко Н. Г. Системно-структурный анализ репродуктивного здоровья/ Н. Г. Грищенко // Международный медицинский журнал. - 2008. - Том 14, № 3 (55). - С. 55-58.

7. Грищенко Н. Г. Личностные особенности и состояние психического здоровья женщин при искусственной инсеминации / Н. Г. Грищенко, В. В. Кришталь, О. В. Грищенко // Проблемы, достижения и перспективы развития медикобиологических наук и практического здравоохранения. Труды Крымского государственного университета им. С.И.Георгиевского. - 2009. - Том 144, часть 4. - С. 47-51 (Автор виконав відбір та обстеження жінок, узагальнення отриманих результатів, формулювання висновків).

8. Грищенко М. Г. Імунологічний профіль периферичної крові та мікрооточення ооцитів при безплідді внаслідок хронічних запальних захворювань органів малого тазу / М. Г. Грищенко // Практична медицина, науково-практичний журнал. - Львів: «ПМ», 2009. - Том XV, № 3. - С. -26.

9. Грищенко М. Г. Дослідження цитокінового профілю периферичної крові й фолікулярної рідини жінок із хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу при використанні допоміжних репродуктивних технологій / [Грищенко М. Г., Гольцев А. М., Бабійчук Л. А., Геродес А. Г.] // Збірник наукових праць співробітників НМАПО ім. П.Л.Шупика. - Київ, 2009. - Том 18, № 2. - С. 677-683 (Автором здійснено клінічні спостереження, аналіз та узагальнення отриманих результатів, формулювання висновків).

10. Грищенко Н. Г. Антиспермальные и антиовариальные антитела в сыворотке крови и фолликулярной жидкости женщин с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза при использовании вспомогательных репродуктивных технологий / [Грищенко Н. Г., Геродес А. Г., Крамар М. Й., Луцкая Л. И., Терпячая И. В.] // Здоровье женщины. - 2009. - №8 (44). - С. 187-193 (Дисертант здійснив огляд вітчизняної та закордонної літератури, аналіз отриманих результатів).

11. Грищенко Н. Г. Обоснование модели реактивного хронического воспаления яичников у мышей / [Грищенко Н. Г., Клименко Н. А., Горголь Н. И., Татарко С. В.] // Медицина сегодня и завтра, ХНМУ. - Харьков, 2009. - № 4. - С. 10-17 (Дисертант здійснив огляд вітчизняної та закордонної літератури, аналіз та формулювання висновків).

12. Грищенко М. Г. Особливості прогнозування ефективністі допоміжних репродуктивних технологій на підставі даних анамнезу у жінок з безпліддям, обумовленим хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу / М. Г. Грищенко // Достижения и перспективы развития медикобиологических наук и практического здравоохранения. Труды Крымского государственного университета им. С.И.Георгиевского. - 2010. - Том 148, часть 3. - С. 41-43.

13. Грищенко Н. Г. Возможности конфокальной сканирующей лазерной микроскопии применительно к оценке процессов апоптоза в яйцеклетках / Н. Г. Грищенко // Международный медицинский журнал. - Харьков, 2010. - Том 16, №3 (63). - С. 63-66.

14. Грищенко М. Г. Показники системного клітинного імунітету, як предиктори ефективності допоміжних репродуктивних технологій у жінок з безпліддям, обумовленим хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу / М. Г. Грищенко // Педіатрія, акушерство та гінекологія. - 2010. - Том 72, № 4. - С. 189-192.

15. Грищенко М. Г. Особливості прогнозування ефективності допоміжних репродуктивних технологій на підставі ембріологічних даних у жінок з безпліддям, обумовленим хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу / М. Г. Грищенко // Збірник наукових праць співробітникі НМАПО ім. П.Л.Шупика. - Київ, 2010. - Том 19, № 2. - С. 718-725.

16. Грищенко Н. Г. Методические особенности оплодотворения in vitro ооцитов лабораторных мишей / [Грищенко Н. Г., Смольянинова Е. И., Колесникова А. А., Чернышенко Л. Г.] // Експериментальна і клінічна медицина, ХНМУ. - Харьков, 2010. - № 3. - С. 59-64 (Автор виконав огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, аналіз та формулювання висновків).

17. Грищенко М. Г. Прогнозування ефективності допоміжних репродуктивних технологій при безплідді запального генезу на підставі показників гуморального імунітету / М. Г. Грищенко, В. К. Чайка, А. М. Гольцев // Педіатрія, акушерство та гінекологія. - 2010. - Том 72, № 5. - С. 82-85 (Дисертантом виконано огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, клінічні спостереження, аналіз та формулювання висновків).

18. Грищенко Н. Г. Маркеры апоптоза как предикторы эффективности ВРТ / Н. Г. Грищенко // Международный медицинский журнал. - Харьков, 2010. - Том 16, № 4 (65). - С. 82-86.

19. Грищенко Н. Г. Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Смольянинова Е. И., Чернишенко Л. Г., Волкова Н. А.] // Проблеми кріобіології. - 2010. - Том 20, № 3. - С. 327-337 (Огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, аналіз отриманих результатів, висновки).

20. Грищенко Н. Г. Показатели гуморального звена иммунитета в фолликулярной жидкости у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием при лечении методами вспомогательных репродуктивных технологий / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Гольцев А. Н., Котлік Ю. А., Геродес А. Г.] // Проблеми екології та медичної генетики і клінічної імунології. - Київ-Луганськ, 2010. - Вип. 3 (99). - С. 88-99 (Автор здійснив клінічні спостереження, обстеження жінок, аналіз отриманих результатів, сформулював висновки).

21. Грищенко Н. Г. Влияние контролируемой овариальной гиперстимуляции на показатели клеточного звена иммунитета при бесплодии, обусловленном хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза / [Грищенко Н. Г., Грищенко В. И., Чайка В. К., Гольцев А. Н., Геродес А. Г.] //Український медичний альманах. - Луганськ, 2010. - Том 13, № 5. - С. 62-66 (Автор виконав відбір та обстеження жінок, узагальнення отриманих результатів, сформулював висновки).

22. Грищенко Н. Г. Особенности системного гуморального иммунитета у больных с трубно-перитонеальным бесплодием до и после контролируемой гиперстимуляции яичников в программе ЭКО / Н. Г. Грищенко, А. Г. Геродес, Ю. А. Котлик //Харківська хірургічна школа. - 2011. - № 1 (46). - С. 42-47 (Дисертантом виконано огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, клінічні спостереження, аналіз та формулювання висновків).

23. Грищенко М. Г. Особливості індукції суперовуляції, кількісна і морфологічна характеристика яйцеклітин та ембріонів у мишей з хронічним реактивним запаленням яєчників / М. Г. Грищенко // Клінічна фармація. - 2010. - Том 14, № 4. - С. 38-41.

24. Грищенко М. Г. Прогнозування ефективності екстракорпорального запліднення у жінок з трубно-перитонеальним безпліддям на підставі вивчення імунного гомеостазу в фолікулярній рідині / М. Г.Грищенко // Сучасні медичні технології - 2010. - № 4. - С. 12-18.

25. Грищенко М. Г. Дослідження цитокінового профілю периферичної крові та фолікулярної рідини жінок із хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу для прогнозування ефективності допоміжних репродуктивних технологій / М. Г. Грищенко // Актуальні питання медичної науки та практики, - 2010. - № 77. - Том 2, - С. 56-64.

26. Грищенко Н. Г. Влияние криоэкстракта плаценты на течение хронического воспаления яичников у мышей / [Грищенко Н. Г., Клименко Н. А., Горголь Н. И., Татарко С. В.] // Медицина сегодня и завтра, ХНМУ. - Харьков, 2010. - № 2-3. - С. 7-17 (Дисертант здійснив огляд вітчизняної та зарубіжної літератури, аналіз та формулювання висновків).

27. Грищенко Н. Г. Влияние терапии препаратами экстракта плаценты на динамику показателей клеточного звена иммунитета в периферической крови и фолликулярной жидкости пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием / Н. Г. Грищенко, А. Г. Геродес, И. В. Перелыгин // Международный медицинский журнал. - Харьков, 2011. - Том 17, №1 (65). - С. 84-89 (Автор виконав відбір, обстеження та лікування жінок, узагальнення отриманих результатів, сформулював висновки).

28. Патент № 44338 , МКП: А61М 37/00. Спосіб виконання екстракорпорального запліднення у жінок з хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу / Грищенко М. Г., Грищенко В. І., Гольцев А. М., Бабійчук Л. О., Геродес Г. Г. - Заявлено 22.06.2009; опубліковано 25.09.2009, бюлетень № 18 (Співавтор винаходу, здійснив патентний пошук, клінічні спостереження, розробка способу лікування, обгрунтування висновків).

29. Патент № 47934 , МКП: G09B 23/28. Спосіб моделювання реактивного хронічного запалення яєчників / Грищенко М. Г., Кліменко М. О., Татарко С. В. - Заявлено 08.10.2009; опубліковано 25.02.2010, бюлетень № 4 (Автор провів патентний пошук, розробив способ моделювання, обґрунтував висновки).

30. Патент № 54908, МКП: А61В 10/00. Спосіб прогнозування допоміжних репродуктивних технологій у пацієнток з безпліддям, яке обумовлене хронічними запальними захворюваннями органів малого тазу / Грищенко М. Г. - Заявлено 08.06.2010; опубліковано 25.11.2010, бюлетень № 22.