Оценка экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции с помощью моноклональных антител - Автореферат

Специальные методы исследования включали: выявление ТАПФ методами проточной цитофлуорометрии (ПЦМ), флуоресцентной микроскопии и иммуноферментного анализа, характеристику движения сперматозоидов с помощью автоматического анализатора спермы, оценку акросомальной реакции сперматозоидов методом проточной цитофлуорометрии, определение уровня генерации свободных радикалов в эякуляте с помощью метода хемилюминесценции, выявление антиспермальных антител на поверхности сперматозоидов прямым тестом реакции смешанной агглютинации, выявление антител к АПФ в семенной жидкости методами иммуноферментного анализа (ИФА) и иммуноблоттинга. Специфичность связывания антител к САПФ и ТАПФ была подтверждена при анализе связывания МАТ с поверхностью нативных клеток человека - эндотелиальных клеток пупочной вены (экспрессирующих только САПФ) и сперматозоидов (экспрессирующих только ТАПФ) (рис. Уровень связывания МАТ 4Е3 и 1Е10 со сперматозоидами был практически одинаков (ОИФ = 16,1 и 17,0, соответственно), в то время как МАТ 1Е10 с эндотелиальными клетками связывались в 15 раз слабее, по сравнению с МАТ 4Е3 (ОИФ = 1,4 и 20,5, соответственно). С помощью иммунофлуоресцентного анализа живых, морфологически нормальных, сперматозоидов, полученных методом флотации, с использованием МАТ 1Е10, ТАПФ была выявлена на поверхности шейки, постакросомальной области головки и средней части хвоста сперматозоидов (рис. Тестикулярная изоформа АПФ на поверхности живых сперматозоидов с нарушенной морфологией при окрашивании МАТ 1Е10 была выявлена в области шейки и всей поверхности головки клеток, в то же время на поверхности 40-50% сперматозоидов ТАПФ обнаружено не было (рис.Моноклональные антитела 1E10 специфичны к тестикулярной АПФ, моноклональные антитела 4Е3 взаимодействуют как с тестикулярной, так и с соматической изоформами фермента. Разработан способ количественной оценки экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов с помощью моноклональных антител и метода проточной цитометрии. Максимальный уровень экспрессии тестикулярной изоформы АПФ выявляется на поверхности патологических форм сперматозоидов и функционально-активных сперматозоидов с нормальной морфологией.

Получены моноклональные антитела к нативной форме ангиотензин-превращающего фермента человека. Моноклональные антитела 1E10 специфичны к тестикулярной АПФ, моноклональные антитела 4Е3 взаимодействуют как с тестикулярной, так и с соматической изоформами фермента.

Разработан способ количественной оценки экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов с помощью моноклональных антител и метода проточной цитометрии.

Уровень тестикулярной изоформы АПФ на поверхности сперматозоидов зависит от морфофункциональных особенностей клеток. Максимальный уровень экспрессии тестикулярной изоформы АПФ выявляется на поверхности патологических форм сперматозоидов и функционально-активных сперматозоидов с нормальной морфологией. Снижение экспрессии тестикулярной изоформы АПФ на поверхности морфологически нормальных сперматозоидов сопровождается снижением их функциональной активности: уменьшением скорости поступательного движения и увеличением вероятности спонтанной акросомальной реакции.

На поверхности большинства сперматозоидов с нормальной морфологией тестикулярная изоформа АПФ выявлена в постакросомальной области головки, на шейке и средней части хвоста клеток. У сперматозоидов с дефектами головки тестикулярная изоформа АПФ экспрессируется на всей поверхности головки клеток.

Уровень экспрессии тестикулярной изоформы АПФ на поверхности сперматозоидов пациентов с иммунным фактором бесплодия не отличается от такового у фертильных доноров. При этом аутоантитела к ангиотензин-превращающему ферменту в семенных жидкостях пациентов не обнаружены.

Выявлены нарушения экспрессии тестикулярной изоформы АПФ на поверхности сперматозоидов у пациентов с бесплодием неясного генеза и у бесплодных пациентов с астенозооспермией: количество тестикулярной изоформы АПФ на поверхности сперматозоидов пациентов с бесплодием было значительно ниже, чем на поверхности сперматозоидов фертильных доноров.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Оценка экспрессии тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Сборник тезисов Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2004", 2004, Москва, т.1, с.348.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Тестикулярная изоформа ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Сборник тезисов 8-ой Международной пущинской школы-конференции молодых ученых "Биология-наука XXI века", 2004, Пущино, с.43.

Alexinskaya M.A., Nikolaeva M.A., Balyasnikova I.V., Sukhikh G.T., Danilov S.M. Testicular isoform of angiotensin-converting enzyme on the surface of spermatozoa from normozoospermic men. Abstracts from The European Congress of Reproductive Immunology, 2004, Pilsen, Czech Republic, American Journal of Reproductive Immunology, Vol.51, N.6, p.481.

Николаева М.А., Алексинская М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Экспрессия тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Материалы VIII Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе Дни иммунологии в Санкт-Петербурге "Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии" 2004, Санкт-Петербург, Медицинская иммунология, т.6, № 3-5, с.384-385.

Aleksinskaya M.A. Expression testicular isoform of angiotensin-converting enzyme on the surface of human ejaculated spermatozoa. Abstracts from the 15th european students" conference for future doctors and young scientists, 2004, Berlin, Germany, Abstractbook, p.318.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Особенности выявления тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Тезисы Республиканской научной конференции "Иммунология репродукции", 2005, Иваново, Russian Journal of Immunology, Vol.9, supplement 2, p.187.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Особенности выявления тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Сборник тезисов XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов", Международный молодежный научный Форум "Ломоносов-2005", 2005, Москва, т.2, с.416.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Елистратова О.С., Сухих Г.Т., Данилов С.М. Особенности выявления тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Материалы IX Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе Дни иммунологии в Санкт-Петербурге "Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии" 2005, Санкт-Петербург, Медицинская иммунология, т.7, № 2-3, с.179-180.

Aleksinskaya M.A., Nikolaeva M.A., Balyasnikova I.V., Sukhikh G.T., Danilov S.M. Quantification of the testicular isoform of angiotensin I-converting enzyme on human spermatozoa with monoclonal antibodies. Abstracts from the 16th european students" conference promissing medical scientists willing to look beyond, 2005, Berlin, Germany, Abstractbook, p.59.

Nikolaeva M.A., Balyasnikova I.V., Alexinskaya M.A., Metzger R., Franke F.E., Albrecht R.F.II, Kulakov V.I., Sukhikh G.T., Danilov S.M. Testicular isoform of angiotensin I-converting enzyme (ACE, CD143) on the surface of human spermatozoa: revelation and quantification using monoclonal antibodies. American Journal of Reproductive Immunology, 2006, Vol.55, Issue 1, p.54-68.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Данилов С.М., Елистратова О.С., Сухих Г.Т. Количественная оценка тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006, Т.141, N.1, с. 41-44.

Алексинская М.А., Николаева М.А., Данилов С.М., Кузьмичев Л.Н., Левчук Т.Н., Елистратова О.С., Сухих Г.Т. Зависимость скорости движения сперматозоидов от экспрессии тестикулярной изоформы ангиотензин-превращающего фермента на их поверхности. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2006, Т.141, N.2, с.198-201.

Размещено на .ru