Розробка науково-методичних основ отримання біологічних компонентів на їх основі високоінформативної імуноферментної тест-системи для діагностики віл-інфекції. Стабільні препарати пероксидазних кон"югатів з рекомбінантними антигенами боротьби зі снідом.
При низкой оригинальности работы "Отримання біологічних компонентів та конструювання високоінформативної тест-системи для діагностики віл-інфекції", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
В імуноферментних системах другого покоління застосовували рекомбінантні білки та синтетичні пептиди; вторинними антитілами являлись антитіла (проти імуноглобулінів людини), мічені ферментом. В системах третього покоління застосовують конюгат рекомбінантних білків або синтетичних пептидів з ферментом, що дає можливість виявляти специфічні імуноглобуліни незалежно від їх приналежності до певних класів G, M чи A і, таким чином, зменшити період "сероконверсійного вікна" до 20-28 днів [Constantine, 1994]. Для конструювання ТІФА систем четвертого покоління отримати високоаффінні антитіла проти корового антигену ВІЛ-1 - р24, вивчити їх імунохімічні властивості, з подальшим конструюванням на їх основі імуноферментної системи для виявленння антигену р24. Вперше розроблено умови отримання стабільних пероксидазних конуюгатів з оригінальними рекомбінантними антигенами ВІЛ-1 та ВІЛ-2 та сконструйовано на їх основі високоінформативну імуноферментну систему третього поколінння для виявленння ВІЛ-специфічних антитіл, проаналізовано чутливість та специфічність даного діагностичного набору, що за цими показниками не поступається світовим аналогам ТІФА систем третього поколінння. В процесі експериментальних досліджень на основі отриманих препаратів очищених рекомбінантних антигенів - Env1, Env2, Gag1 та Gag120, пероксидазних конюгатів з ними та антивидовими поліклональними антитілами були сконструйовані наступні експериментальні моделі ТІФА систем: 1. імуноферментна система другого покоління з використанням антивидових (проти IGG та проти IGM людини) кролячих поліклональних антитіл, мічених пероксидазою хрону (ПХ).На основі імуноферментних конюгатів (проти імуноглобулінів людини) поліклональних антитіл з пероксидазою хрону та біотином, аффінноочищених антивидових імуноглобулінів з ПХ, рекомбінантного білку А S. aureus та стрептавідину з ПХ, моноклональних антитіл проти IGG людини з ПХ було сконструйовано імуноферментні системи другого покоління. Вперше отримані стабільні препарати очищених пероксидазних конюгатів з оригінальними рекомбінантними антигенами ВІЛ-1 та ВІЛ-2 та сконструйовано на їх основі високоінформативну імуноферментну тест-систему третього покоління для виявлення ВІЛ-специфічних антитіл. Проведено порівняльну оцінку сконструйованих ТІФА систем другого та третього поколінь на зразках крові ВІЛ-інфікованих громадян Украіни, стандартних панелях анти-ВІЛ1/2 позитивних та негативних сироваток та на масиві ВІЛ-1/2 негативних зразків.
План
Основний зміст роботи викладено у публікаціях
1. Раєвська Г. Є., Співак М. Я. Сучасні методи лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції // Мікробіологічний журнал. - 2000. - Т. 62, №4. - С. 56-65.
2. Раевская Г. Е., Иванская Н. В., Терещенко М. И., Пилипенко В. Г., Чумак Р. М., Спивак Н. Я.. Сравнительный анализ чувствительности и специфичности оригинальной тест-системы третьего поколения для выяления антител к вирусу иммунодефицита человека // Імунологія та Алергологія. - 2000. - №1. - С. 76-80.
3. Раєвська Г. Є., Співак М. Я., Пилипенко В. Г., Ростопіра Н. М., Ткачікова Л. Отримання пероксидазних конюгатів для виявленння ВІЛ-специфічних антитіл методом імуноферментного аналізу // Імунологія та Алергологія. - 2000. - №2-3. - С. 39-42.
4. Раєвська Г. Є., Співак М. Я., Ростопіра Н. М. Порівняльна оцінка пероксидазних конюгатів для виявлення ВІЛ-специфічних антитіл методом імуноферментного аналізу // Бюлетень інституту сільськогосподарської мікробіології. - 2000. - №7. - С. 48-49.
5. Раевская Г. Е., Иванская Н. В., Терещенко М. И., Мартыненко Д. Л., Спивак Н. Я. Использование рекомбинантных антигенов вируса иммунодефицита человека для выявления специфических антител методом иммуноферментного анализа. // Вопр. Вирусологии. - 2000. - № 5. - С. 49.
6. Rayevskaya G., Ivanskaya N. V., Pilipenko V. G., Tkachikova L., Spivak N. Ya., Chumak R. M. Elaboration of the third generation enzyme immunoassay "IEA-HIV1/2-III" for the detection of anti-HIV specific antibodies in human sera // Науковий вісник Ужгородського державного університету. Серія: Біологія - 2000. - №8. - С. 201-202.
7. Пат. 99115959 UA, МПК А61К39/21, С12N1/00. Тест-система для виявлення антитіл проти вірусу імунодефіциту людини "ІФА-ВІЛ1/2-ІІІ"./ Мартиненко Д.Л., Чєрєпанов П. А.(RU), Міхайлова Т. Г. (RU), Іванська Н. В., Раєвська Г. Є., Терещенко М. І., Чумак Р. М., Шевчук О. А., Спіженко Ю. П., Гураль А. Л., Троянський В. В., Пилипенко В. Г.; АОЗТ НВК "Діапроф Мед". - № 99115959; Заявлено 01.11.1999.
8. Терещенко М. И., Раевская Г. Е., Иванская Н. В., Спиженко Ю. П., Мартыненко Д. Л., Чумак Р. М. Иммуноферментная тест-система третьего поколения для скрининга ВИЧ-инфекции // Русский Журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. - 1999. - Т.3, №1. - С. 113
9. Раевская Г. Е., Мартыненко Д. Л., Чумак Р. М. Анализ чувствительности и специфичности иммуноферментной тест-системы третьего поколения - "ІФА-ВІЛ1/2-ІІІ" - для выявления антител к ВИЧ // Русский Журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы - 2000. - Т.4, №1. - С. 58
10. Раєвська Г. Є., Вергун Л. Ю. Порівняльна оцінка типу імуноферментного аналізу для виявлення ВІЛ-специфічних антитіл // Тези ІІ Міжнародної конференції "Біоресурси та віруси". - Київ (Україна). - 1998. - С. 61
Размещено на .ru
Вывод
1. Вперше в Україні розроблені науково-методичні основи отримання основних біологічних компонентів та конструювання високоінформативних тест-систем третього покоління.
2. На основі імуноферментних конюгатів (проти імуноглобулінів людини) поліклональних антитіл з пероксидазою хрону та біотином, аффінноочищених антивидових імуноглобулінів з ПХ, рекомбінантного білку А S. aureus та стрептавідину з ПХ, моноклональних антитіл проти IGG людини з ПХ було сконструйовано імуноферментні системи другого покоління.
3. Вперше отримані стабільні препарати очищених пероксидазних конюгатів з оригінальними рекомбінантними антигенами ВІЛ-1 та ВІЛ-2 та сконструйовано на їх основі високоінформативну імуноферментну тест-систему третього покоління для виявлення ВІЛ-специфічних антитіл.
4. Проведено порівняльну оцінку сконструйованих ТІФА систем другого та третього поколінь на зразках крові ВІЛ-інфікованих громадян Украіни, стандартних панелях анти-ВІЛ1/2 позитивних та негативних сироваток та на масиві ВІЛ-1/2 негативних зразків. Встановлено, що найбільш високою чутливістю та специфічністю серед розроблених ТІФА систем характеризувалась імуноферментна система третього покоління з використанням пероксидазних конюгатів рекомбінантних антигенів ВІЛ.
5. На основі ТІФА третього покоління розроблено тест-набір - ІФА-ВІЛ1/2-III, детально проаналізовано його показники інформативності (чутливість, специфічність) та стабільність. Чутливість тест-системи ІФА-ВІЛ1/2-III на застосованих стандартних панелях сироваток склала 100 %, специфічність була 99,5 % при тестуванні 589665 анти-ВІЛ1/2 негативних зразків сироваток. Наведені показники інформативності були стабільними протягом 10 місяців спостереження за промисловими серіями тест-систем. Тест-набір ІФА-ВІЛ1/2-III впроваджено в виробництво на підприємстві "Діапроф Мед".
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
