Особливості ліпідного обміну у кролів з експериментальною гіперхолестеринемією при алотрансплантації кріоконсервованих гепатоцитів та клітин плодової печінки - Автореферат

З огляду на низьку імуногенність, багатство на ростові фактори та надзвичайно високий проліферативний потенціал, увагу дослідників останніми роками привертають попередники паренхіматозних клітин печінки [Crombleholme T., 1993; Sell S., 2001]. Перелік захворювань, стосовно яких трансплантація гепатоцитів розглядається як потенційний і перспективний метод терапії, обумовлений спектром біосинтетичних, детоксикаційних та регуляторних функцій паренхіми печінки, і включає, в першу чергу, гостру та хронічну печінкову недостатність, а також велику кількість спадкових захворювань, повязаних з виконанням окремих гепатоспецифічних функцій [Репин В. С., 1998]. Центральна роль, яку відіграє печінка в обміні ліпідів і розвитку його розладів [Климов А. Н., 1999], надзвичайно поширених, зокрема і в Україні, може розглядатися як достатнє підґрунтя для експериментального вивчення можливості корекції цього спектру захворювань шляхом трансплантації клітин печінки, як зрілих, так і плодового походження. Актуальність обраного напрямку полягає у необхідності вивчення in vivo характеру дії кріоконсервованих гепатоцитів та клітин плодової печінки при алотрансплантації за умов дисліпідемії, що може стати підґрунтям для розробки нових терапевтичних підходів у лікуванні розладів обміну ліпідів. Мета роботи - зясувати характер дії кріоконсервованих гепатоцитів та клітин плодової печінки на обмін та перекисне окислення ліпідів при алотрансплантації кролям з експериментальною гіперхолестеринемією.Зрілі гепатоцити, а також клітини плодової печінки, отримані з плодів 20 доби гестації, виділяли неферментативним методом [Petrenko Для оцінки ступеня пошкодження печінки реципієнтів після трансплантації гепатоцитів в сироватці крові визначали активність трансаміназ: аспартатамінотрансферази (АСАТ) (КФ 2.6.1.1.) - за методом Бергмейєра, аланінамінотрансферази (АЛАТ) (КФ 2.6.1.2) - за методом Вроблевського [Bergmeyer H. U., 1972] з використанням наборів фірми Sigma (США). Алогенну трансплантацію кріоконсервованих гепатоцитів та клітин плодової печінки кролям з експериментальною гіперхолестеринемією здійснювали інфузією в v. porta. Також показано, що введення ККПП навіть у концентрації 2,5?107 кл/мл не призводить до достовірних змін в активності трансаміназ у сироватці крові, що, напевне, є наслідком малих розмірів цих клітин. Доза клітин для трансплантації у випадку зрілих гепатоцитів складала 108 клітин на тварину, як запропоновано у роботах [Eguchi S., 1996; Gunsalus J. R., 1997]; у випадку плодових клітин одному реципієнту трансплантували суспензію клітин, отриману з цілої печінки одного плода, що складало приблизно 5?108 клітин на тварину.Одно-дворазове перенесення кріоконсервованих гепатоцитів з рідкого азоту (77 К) в сухий льод (194,5 К) не призводить до зниження їх збереженості, в той час як 100-разові циклічні зміни температури в діапазонах, що включають температуру склування (168 К), спричиняють значну руйнуючу дію. Алотрансплантація кріоконсервованих гепатоцитів кролям з експериментальною гіперхолестеринемією знижує концентрацію ХС і ТАГ у сироватці крові в перший тиждень після трансплантації. Після алотрансплантації кріоконсервованих клітин плодової печінки кролям з експериментальною гіперхолестеринемією спостерігається значний гіполіпідемічний ефект у два інтервали часу: протягом 5-14 діб після трансплантації - зниження вмісту загального ХС, з 21 до 28-ї доби - загального ХС, ХС ЛПВГ і ТАГ у сироватці крові. У віддалені строки після трансплантації кріоконсервованих клітин плодової печінки спостерігається активація ферментативної системи антиоксидантного захисту: підвищення вмісту відновленого глутатіону, активності глутатіонредуктази та каталази. (Дисертантом самостійно проведено експерименти щодо вивчення впливу інкубації гіперхолестеринемічної сироватки крові з суспензією ізольованих гепатоцитів на вміст в ній холестерину та атерогенних ліпопротеїнів).

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Актуальною проблемою сучасної кріобіології є вивчення біологічної дії кріоконсервованих клітинних суспензій за умов трансплантації. У дисертації наведене теоретичне узагальнення та нове вирішення наукової проблеми щодо можливості застосування кріоконсервованих гепатоцитів і клітин плодової печінки для корекції гіперхолестеринемії.

1. Одно-дворазове перенесення кріоконсервованих гепатоцитів з рідкого азоту (77 К) в сухий льод (194,5 К) не призводить до зниження їх збереженості, в той час як 100-разові циклічні зміни температури в діапазонах, що включають температуру склування (168 К), спричиняють значну руйнуючу дію. Ці результати можуть служити обґрунтуванням можливості транспортування кріоконсервованих клітинних суспензій у сухому льодові.

2. У системі in vitro показана здатність ізольованих гепатоцитів знижувати концентрацію атерогенних ліпопротеїнів у гіперхолестеринемічній сироватці крові.

3. Інтрапортальна трансплантація кріоконсервованих зрілих гепатоцитів призводить до пошкодження печінки реципієнтів, оціненого морфологічно та за рівнем трансаміназ у сироватці крові. Зниження швидкості інфузії суспензії зрілих гепатоцитів з 4 мл/хв до 1 мл/хв значно зменшує ступінь ураження. Трансплантація кріоконсервованих клітин плодової печінки зі швидкістю 1 мл/хв не спричиняє пошкоджуючої дії на печінкову паренхіму реципієнта.

4. Алотрансплантація кріоконсервованих гепатоцитів кролям з експериментальною гіперхолестеринемією знижує концентрацію ХС і ТАГ у сироватці крові в перший тиждень після трансплантації.

5. Після алотрансплантації кріоконсервованих клітин плодової печінки кролям з експериментальною гіперхолестеринемією спостерігається значний гіполіпідемічний ефект у два інтервали часу: протягом 5-14 діб після трансплантації - зниження вмісту загального ХС, з 21 до 28-ї доби - загального ХС, ХС ЛПВГ і ТАГ у сироватці крові.

6. У віддалені строки після трансплантації кріоконсервованих клітин плодової печінки спостерігається активація ферментативної системи антиоксидантного захисту: підвищення вмісту відновленого глутатіону, активності глутатіонредуктази та каталази.

7. Введення кріоконсервованих зрілих гепатоцитів тваринам з експериментальною гіперхолестеринемією приводить до формування перипортальних зон відновлення печінкового епітелію. Трансплантація ККПП забезпечує зменшення ознак дистрофії і, таким чином, загальне покращення стану печінкової паренхіми кролів з експериментальною гіперхолестеринемією .

ПЕРЕЛІК ОПУБЛІКОВАНИХ РОБІТ

1. Сукач А. Н., Лебединский А. С. Влияние изолированных гепатоцитов на концентрацию атерогенных липопротеинов в сыворотке крови человека// Биологический вестник. - 1999. - Т. 3, № 1-2. - С. 33-35. (Дисертантом самостійно проведено експерименти щодо вивчення впливу інкубації гіперхолестеринемічної сироватки крові з суспензією ізольованих гепатоцитів на вміст в ній холестерину та атерогенних ліпопротеїнів).

2. Сукач О. М., Лебединський О. С. Ізольовані гепатоцити як засіб зниження концентрації атерогенних ліпопротеїнів у сироватці крові людини // Трансплантологія. - 2000. - Т. 1, № 1. - С. 281-283. (Дисертантом самостійно проведено експерименти щодо вивчення впливу інкубації гіперхолестеринемічної сироватки крові з суспензією ізольованих гепатоцитів на вміст у ній холестерину та атерогенних ліпопротеїнів).

3. Лебединский А. С., Зинченко А. В., Петренко А. Ю. Влияние циклического изменения температуры в твердой фазе на сохранность криоконсервированных гепатоцитов крыс // Проблемы криобиологии. - 2002. - № 3. - С. 48-51. (Дисертантом самостійно проведено експерименти щодо вивчення впливу циклічних змін температури у твердій фазі на життєздатність кріоконсервованих гепатоцитів).

4. Лебединский А. С., Петренко А. Ю. Особенности выделения, криоконсервирования и аллогенной трансплантации гепатоцитов кроликов. // Проблемы криобиологии. - 2003. - № 1. - С. 51-58. (Дисертантом самостійно виділені та кріоконсервовані гепатоцити, трансплантовано отриманий матеріал та здійснено біохімічне визначення активності трансаміназ у сироватці крові кролів-реципієнтів).

5. Лебединський О. С., Черкашина Д. В., Петренко О. Ю. Про можливість корекції гіперхолестеринемії трансплантацією клітин плодової печінки // Трансплантологія. - 2003. - Т. 4, № 1. - С. 92-93. (Дисертантом сформовано модель експериментальної гіперхолестеринемії, отримані та трансплантовані гепатоцити і клітини плодової печінки, а також виконано експерименти щодо визначення біохімічних показників крові та морфологічного стану печінки).

6. Лебединский А. С., Петренко А. Ю., Сукач А. Н. Течение экспериментальной гиперхолестеринемии после аллотрансплантации криоконсервированных гепатоцитов // Проблемы криобиологии. - 2003. - № 3. - С. 54-61 (Дисертантом сформована модель експериментальної гіперхолестеринемії, отримані та трансплантовані гепатоцити і клітини плодової печінки, а також виконані експерименти щодо визначення біохімічних показників крові та морфологічного стану печінки).