Особливості експресії ядерних і toll-подібних рецепторів та їх функціональних зв’язків у пухлинних клітинах різного походження - Автореферат

Рецепторні молекули, які експресуються будь-якою клітиною, забезпечують її реакцію на мітогенні, мотогенні, диференціювальні, функціонально-активуючі, апоптогенні та інші чинники, а також відіграють важливу роль у забезпеченні клітинного гомеостазу. До недавнього часу багато представників NRS відносили до так званих orphan-рецепторів, тобто рецепторів з певно визначеною генетичною детермінацією, відомою структурою, але без відомої функції. Розповсюдженість цих рецепторів в клітинах інших типів, зокрема, епітеліальних, їх роль у розпізнаванні агоністів (стимулюючих чинників), клітинній реактивності, звязок із розвитком патологічних станів потребують подальших досліджень (Маянский А.Н., 2004; Дранник Г.Н., 2006). Роботу виконано у межах тем «Експресія генів надродини ядерних стероїдних рецепторів та Toll-рецепторів у менінгіомах та у пухлинах раку молочної залози» (№ держреєстрації 0108U010512) та «Розробка методу культурального аналізу та контролю якості трансплантаційного матеріалу в онкогематології» (№ держреєстрації 0107U009272). Провести оцінку експресії TLR у менінгіомах і у пухлинних клітинних лініях різного походження та дослідити вплив бактеріальних ендотоксинів на експресію цих рецепторів і чутливість пухлинних клітин до апоптотичного сигналу.Морфологічне дослідження і прямий підрахунок кількості клітин проводили за стандартними методиками світлової і флуоресцентної мікроскопії з модулюючою контрастною оптикою мікроскопа «Leica DMIL» (IMC - Image modulation contrast). Вплив солей трифеніл-фосфоніум-броміду (ТФФБ) «Sigma», а саме, гекса-(ГТФФБ), дека-(ДТФФБ) та гексадецил-ТФФБ (ГДТФФБ) на культури клітин оцінювали шляхом прямого обліку кількості клітин в контрольних і дослідних зразках на приладі «ZM Coulter» та визначення життєздатності і рівня їхнього окислювально-відновного потенціалу клітин в МТТ-тесті. Експресія асоційованих із запаленням цитокінів була характерна, насамперед, для клітинних ліній колоректального раку (ІЛ-1 та ІЛ-6 у клітинах LOVO, ІЛ-8 у клітинах CACO, LOVO) та раку легені Corl23 (ІЛ-8). Експресію TLR7 спостерігали лише в клітинах еритролейкозу (лінія К562), експресію TLR8 не було виявлено в жодній лінії. Вивчення клітин під інвертованим мікроскопом при збільшенні 100? та 200? засвідчило, що ефект падіння результатів WST-1-тесту є наслідком зниження кількості клітин в дослідних культурах, але прямого звязку між ступенем зниження редукційного потенціалу і зменшенням кількості клітин не встановлено.За профілем експресії рецепторів статевих стероїдних гормонів (AR, PR, ER?, ER?), а також рецепторів ІЛ-1, ІЛ-6, ІЛ-8 досліджені пухлинні клітини чітко відрізняються залежно від походження пухлини. Зокрема, типовою для клітин менінгіом була експресія рецепторів прогестерону (PR) - 71 %, тоді як ?-рецептор естрогенів (ER?) виявлено лише у 8 % зразків, що вказує на втрату контролю експресії гену рецептора прогестерону ?-рецептором естрогенів. Встановлено експресію Toll-подібних рецепторів TLR1-6 та TLR9-10 у пухлинних клітинних лініях різного походження та у первинних культурах менінгіом; експресію TLR8 не було виявлено в жодному випадку.

2. ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

У дисертаційній роботі викладені теоретичні узагальнення результатів аналізу рівнів експресії генів надродини ядерних рецепторів і Toll-подібних рецепторів та ефекти їх лігандів у пухлинних клітинних лініях та у первинному матеріалі менінгіом.

Встановлено, що найбільш типовою для пухлин різного гістогенезу є експресія рецепторів глюкокортикоїдів (GR) та рецепторів-активаторів проліферації пероксисом (PPAR). Ці фенотипові ознаки виявлено як у клітинних лініях, так і в первинному матеріалі (біоптати менінгіом), але в перших найчастіше визначали експресію PPAR?, в других - PPAR?.

За профілем експресії рецепторів статевих стероїдних гормонів (AR, PR, ER?, ER?), а також рецепторів ІЛ-1, ІЛ-6, ІЛ-8 досліджені пухлинні клітини чітко відрізняються залежно від походження пухлини. Зокрема, типовою для клітин менінгіом була експресія рецепторів прогестерону (PR) - 71 %, тоді як ?-рецептор естрогенів (ER?) виявлено лише у 8 % зразків, що вказує на втрату контролю експресії гену рецептора прогестерону ?-рецептором естрогенів.

Встановлено експресію Toll-подібних рецепторів TLR1-6 та TLR9-10 у пухлинних клітинних лініях різного походження та у первинних культурах менінгіом; експресію TLR8 не було виявлено в жодному випадку. Показано, що бактеріальні ендотоксини здатні модулювати (активувати) експресію власних (TLR4) і функціональних (TLR9) Toll-подібних рецепторів у пухлинних клітинах, що може знижувати чутливість останніх до апоптотичних сигналів.

Синтетичний глюкокортикоїд Dex пригнічує проліферацію первинних культур менінгіоми і клітинної лінії гліобластоми U-87MG та зумовлює їх виражений захист від клітинної смерті, індукованої оксидативним стресом.

Катіонна сполука гексадецилтрифеніл-фосфоніум-бромід індукує апоптоз у всіх первинних культурах менінгіоми і пухлинних клітинних лініях різного походження, у той час як Dex блокує цей процес, запобігаючи проникненню цитохрому С в цитоплазму клітин.

Отримані результати є підґрунтям для розробки нового класу цільових протипухлинних хіміотерапевтичних препаратів, уражувальна дія яких спрямована безпосередньо на мітохондрії.

1. Bilko D. Glucocorticoids block oxidant-induced endothelial cell death // Наукові записки НАУКМА, 2007. - Т.67. - с. 15-18. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

2. Білько Д.І. Аналіз експресії надродини ліганд-активованих рецепторів у злоякісних клітинних лініях різного походження / Д.І. Білько, К. Ньютон, М.Ф. Стародуб // Науковий вісник Національного університету біоресурсів і природокористування України, 2009. - Вип. 134, т. 3. - с. 228-233. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

3. Bilko D. Toll-like receptor expression in cell lines and primary tumour material // Наукові записки НАУКМА, 2008. - том 80, с. 15-17. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

4. Білько Д.І. Модифікований дельта/дельта-СТ метод обчислення результатів SYBR GREEN кількісної ПЛР / Д.І. Білько, М.Ф. Стародуб // Науковий вісник Національного університету біоресурсів і природокористування України, 2009. - Вип. 134, т. 3. - с. 224-228. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

5. Jacklin A. The sesame seed oil constituent, sesamol, induces growth arrest and apoptosis of cancer and cardiovascular cells / A. Jacklin, C. Ratledge, K. Welham, D. Bilko, C.J. Newton. // Annals of the New York Academy of Sciences, 2003. - Vol. 1010. - P. 374-380. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

6. Newton C.J. Dexamethasone blocks antioestrogen- and oxidant-induced death of pituitary tumour cells / C.J. Newton, D. Bilko, S. Pappa, S.L. Atkin // The Journal of Endocrinology, 2001. - Vol. 169(2). - P. 249-261. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

7. Newton C.J. The role of poly (adenosine 5"-diphosphate-ribose) polymerase in the response of pituitary tumor cells to reactive oxygen species / C.J. Newton, D. Bilko, M. Tichomirowa, U. Renner, G.K. Stalla // Endocrinology, 2005. - Vol. 146(3). - P. 1119-1127. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

8. Newton C.J. Statin-induced apoptosis of vascular endothelial cells is blocked by dexamethasone / C.J. Newton, G. Ran, Y.X. Xie, D. Bilko, C.H. Burgoyne, I. Adams, A. Abidia, P.T. MCCOLLUM, S.L. Atkin // The Journal of Endocrinology, 2002. - Vol. 174(1). - P. 7-16. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

9. Bilko N. Characterization of the interaction between stromal and haematopoietic progenitor cells in expansion cell culture models / N.M. Bilko, I.A. Votyakova, S.V. Vasyloska, D.I. Bilko // Cell Biology International, 2005. - Vol. 29. - P.83-86. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання статті.

10. Патент України № 53756. Спосіб оцінки якості потенційного трансплантату культивованих стовбурових гемопоетичних клітин / Білько Н.М, Борбуляк І.З., Бараш О.О., Білько Д. І. від 11.10.10. - Офіційний бюлетень «Промислова власність» - 2010.- № 19.- с. 5.69. Внесок здобувача: культивування клітин in vitro, аналіз отриманих даних.

11. UK Patent No GB 2400106B „Gel” / Bilko N., Bilko D., Bilko I., Chapman T., Newton C. Внесок здобувача: культивування клітин in vitro на субстратах різного хімічного складу, аналіз результатів культивування, статистична обробка даних, виконання рисунків етапів.

12. Bilko D. Effects of glucocorticoid dexamethasone on the growth and metabolical activity of cancer cells // Тези доповідей VII Міжнародної конференції «Сучасні аспекти експериментальної і клінічної онкології», 2007. - с. 88. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання тез.

13. Bilko D. In vitro angiogenesis model and its use for the investigation of the anti-angiogenic compounds // Тези доповідей Установчого зїзду Українського товариства клітинної біології, 2004. - с. 130. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання тез.

14. Bilko D. Modified delta-delta CT method for real-time SYBR green based quantitative PCR calculation // Международный междисциплинарный симпозиум «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», Крым, 2007. - с. 19. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання тез.

15. Bilko D. The role of pro- and anti-inflammatory mediators in the development and metabolism of cancer cells // Тези доповідей ІІІ Міжнародної наукової конференції студентів та аспірантів «Молодь та поступ біології», 2007. - с. 404-405. Внесок здобувача: проведення експериментальних досліджень, статистична обробка результатів, аналіз і формулювання висновків, написання тез.

Размещено на .ru