Особенности иммунного и цитокинового статусов у больных первичной открытоугольной глаукомой - Автореферат

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Официальные оппоненты: Запорожец Татьяна Станиславовна, доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории иммунологии ФГБУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» СО РАМН, заместитель директора по наукеНесмотря на огромные успехи, достигнутые медицинской наукой в разработке разных аспектов глаукомы, сохраняется много неясного в главных проблемах болезни: ранней диагностики, механизмах патогенеза глаукоматозного процесса, эффективности терапии. Цель работы - на основе комплексной оценки иммунных механизмов патогенеза разработать дополнительные критерии тяжести первичной открытоугольной глаукомы и ранней диагностики этого заболевания у пациентов групп риска. Оценить степень информативности системных и локальных уровней матриксной металлопротеиназы-9 (ММР-9) и ее комплекса с тканевым ингибитором (MMP-9/TIMP-1) у пациентов первичной открытоугольной глаукомой. Провести сравнительный анализ цитокинового статуса, иммуноглобулинов основных классов, матриксной металлопротеиназы-9 и ее комплекса с тканевым ингибитором I типа у пациентов, составляющих группу риска по развитию первичной открытоугольной глаукомы (миопия, гипертоническая болезнь II-III ст., сахарный диабет II типа). На основании комплекса иммунологических данных (система цитокинов, маркеры синтеза и деградации компонентов межклеточного матрикса, иммуноглобулины), исследованных в сыворотке крови, слезной жидкости и влаге передней камеры глаза, установлено участие иммунных воспалительных реакций в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы.Владивостока (клинической базы ГБОУ ВПО ВГМУ Минздравсоцразвития России) в течение 2009 - 2011 гг. Для выполнения поставленных задач использовано комплексное клиническое, биохимическое, инструментальное и иммунологическое исследование у 145 человек: 80 пациентов с первичной открытоугольной глаукомой, 35 пациентов из группы риска по развитию первичной глаукомы, в которую включены лица с миопией разной степени, гипертонической болезнью II-III стадии (ГБ), сахарным диабетом II типа в стадии компенсации (СД) (табл.1). ПОУГ общая группа: 1 группа (начальная и развитая стадии) 2 группа (далеко-зашедшая и терминальная стадии) 80 100 В сыворотке крови и слезной жидкости определяли уровни цитокинов IL-6, IL-17, IFN-?, TGF?-1, TGF?-3, матриксной металлопротеиназы-9 секреторного типа человека (ММР-9) и ее комплекса с тканевым ингибитором (MMP9/TIMP1), сывороточные иммуноглобулины основных классов А, М, G и секреторного иммуноглобулина А (SIGA). Определение уровней цитокинов в сыворотке крови, слезной жидкости, а также компонентов внеклеточного матрикса выполняли с использованием специфических тест-систем «R&D Diagnostics Inc.» (USA) сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа, согласно прилагаемых инструкций. Результаты анализа изменений ряда медиаторов иммунного ответа (цитокинов, матриксной протеиназы-9 и ее комплекса с ингибитором I типа) в сыворотке крови и слезной жидкости, проведенного с целью уточнения механизмов иммунного ответа, демонстрируют комплекс нарушений, свойственных хроническому иммунному воспалению.Изменения цитокинового статуса (высокие концентрации IFN?, IL-17, IL-6 и низкие TGF-?1, TGF-?3, как в сыворотке крови, так и в слезной жидкости) у больных ПОУГ свидетельствуют о превалировании смешанного Th1 / Th-17 иммунного ответа. Исследование локальной секреции цитокинов в слезной жидкости оказалось более информативным, чем в сыворотке крови. Концентрация матриксной металлопротеиназы-9 была повышена в 7 раз в слезной жидкости, в 1,5 раза - в сыворотке крови пациентов ПОУГ. Для дополнительной ранней диагностики ПОУГ рекомендованы следующие критерии: 1) повышенные уровни металлопротеиназы-9 (ММР-9), показатели которой в слезной жидкости превышают 52,5 нг/мл; 2) повышенные уровни секреторного иммуноглобулина А (SIGA), показатели которого в слезной жидкости превышают 47,38мг/л; 3) повышенные уровни интерлейкина-17 (IL-17), показатели которого в слезной жидкости превышают 1,5 пг/мл; 4) повышенные уровни интерферона-? (ИФН-?), показатели которого в слезной жидкости превышают 5,84 пг/мл.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Изменения цитокинового статуса (высокие концентрации IFN?, IL-17, IL-6 и низкие TGF-?1, TGF-?3, как в сыворотке крови, так и в слезной жидкости) у больных ПОУГ свидетельствуют о превалировании смешанного Th1 / Th-17 иммунного ответа.

2. Исследование локальной секреции цитокинов в слезной жидкости оказалось более информативным, чем в сыворотке крови. Дефицит локальной продукции TGF?-1 (?2= 3,9 с 1 ст. свободы, р=0,04) и высокие локальные уровни ММР-9 (?2=5,96 с 1 ст. свободы, р=0,015) сопряжены с тяжестью проявлений глаукомного процесса.

3. Концентрация матриксной металлопротеиназы-9 была повышена в 7 раз в слезной жидкости, в 1,5 раза - в сыворотке крови пациентов ПОУГ. Увеличение локальной концентрации ММР-9 прямо зависело от повышения IL-17 (r=0,65) и дефицита TGF?-3 (r=-0,6). Локальные уровни ММП-9 существенно превышали содержание ее комплекса с тканевым ингибитором (MMP-9/TIMP-1).

4. Высокие значения уровней секреторного SIGA у больных ПОУГ в отличие от системных величин IGM, IGG, IGA отражают вовлечение локальных гуморальных реакций иммунитета в иммунопатогенез заболевания.

5. Системные и локальные иммунологические сдвиги у лиц с миопической рефракцией, гипертонической болезнью II-III ст., сахарным диабетом II типа характеризовались меньшей выраженностью, чем у пациентов с ПОУГ, но с однонаправленной тенденцией, что позволяет считать эти заболевания предикторами возникновения глаукомы.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И ПРАКТИКУ

1. Для дополнительной ранней диагностики ПОУГ рекомендованы следующие критерии: 1) повышенные уровни металлопротеиназы-9 (ММР-9), показатели которой в слезной жидкости превышают 52,5 нг/мл; 2) повышенные уровни секреторного иммуноглобулина А (SIGA), показатели которого в слезной жидкости превышают 47,38мг/л; 3) повышенные уровни интерлейкина-17 (IL-17), показатели которого в слезной жидкости превышают 1,5 пг/мл; 4) повышенные уровни интерферона-? (ИФН-?), показатели которого в слезной жидкости превышают 5,84 пг/мл.

2. Дополнительными диагностическими критериями далеко-зашедшей и терминальной стадий ПОУГ являются увеличение локальных концентраций MMP-9 (более 164,1нг/мл) и снижение продукции TGF?-1 (менее 482,0 пг/мл).

3. Миопия, гипертоническая болезнь II-III ст., сахарный диабет II типа относятся к факторам риска развития первичной открытоугольной глаукомы. Дополнительными критериями ранней диагностики ПОУГ являются гиперцитокинемия IL-17 и высокие уровни ММР-9 в слезной жидкости: а) для пациентов с миопической рефракцией диагностически значимые показатели IL-17>3,22 пг/мл и MMP-9>61,8 нг/мл; б) для пациентов с гипертонической болезнью: IL-17>1,44 пг/мл; в) для пациентов с сахарным диабетом II типа: IL-17>1,44 пг/мл и MMP-9>61,8 нг/мл.

Превышение этих уровней диктует необходимость углубленного обследования этой категории пациентов на выявление ПОУГ.

1. Рукина Д.А., Кириенко А.В. Значение матриксной металлопротеиназы в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы // Тихоокеанский медицинский журнал. 2011. №3. С. 41-43.

2. Рукина Д.А. Исследование содержание интерлейкина-17 у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой // Фундаментальные исследования. 2011. №7. С. 118-120.

3. Рукина Д.А., Догадова Л.П., Маркелова Е.В., Абдуллин Е.А., Осыховский А.Л., Хохлова А.С. Иммунологические аспекты первичной открытоугольной глаукомы // РМЖ. Офтальмология. 2011. №4. С. 162-165.

4. Рукина Д.А., Галай Р.В. Роль ИНФ-? в иммунопатогенезе первичной открытоугольной глаукомы // Вестник Уральской академической науки. 2010. №2/1. С. 194.

5. Rukina D., Markelova E. General and Local levels of IL-2 and IL-6 in patients with POAG // International Immunology, Abstract of 14-th International Congress of Immunology, Kobe, Japan. 2010. Vol.22. №1, Day 4 (4/5). P. 124.

6. Рукина Д.А. Иммунологические нарушения у больных глаукомой // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины: тезисы докладов X Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. Владивосток: Медицина ДВ, 2009. - С. 61-62.

7. Рукина Д.А., Галай Р.В., Галай В.Н. Некоторые аспекты иммунопатологии глаукомы // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины: тезисы докладов X Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. Владивосток: Медицина ДВ, 2011. - С. 342.

8. Рукина Д.А., Кислякова И. С. Роль матриксной металлопротеиназы в иммунопатогенезе первичной открытоугольной глаукомы // Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины: тезисы докладов X Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. Владивосток: Медицина ДВ, 2011. - С. 345-346.

9. Маркелова Е.В., Рукина Д.А., Догадова Л.П. Иммунологические методы диагностики первичной открытоугольной глаукомы. Методические рекомендации. Владивосток, 2012. - 16с.