Дослідження розвитку гіпертонічного шоку та гіпертонічного кріогемолізу еритроцитів ссавців у залежності від змін осмотичних, температурних умов середовища, а також у присутності амфіфільної сполуки – хлорпромазину. Процеси замикання мембранних дефектів.
Аннотация к работе
Відомо, що зміна вихідних параметрів середовища інкубації клітин (наприклад, еритроцитів людини) може призводити до підвищення або зниження їх стійкості до наступної дії стресових факторів, таких як інкубація в середовищах високої осмолярності (гіпертонічний шок - ГШ) або різька зміна температурних умов середовища (гіпертонічний кріогемоліз - ГК) [Белоус А.М. и др., 1985; Рамазанов В.В. и др., 1996]. Даний підхід дає не зовсім адекватні відповіді, тому що маємо справу з первісно «дефектною» клітиною з порушеним балансом між структурними компонентами, тому доцільно було дослідити клітини одного типу (еритроцити), що відрізняються за ліпідним, білковим складом, іонтранспортними системами, інтенсивністю водного транспорту [Rich G.T. et al., 1967; Gold J.C. et al., 1990; Tsai S.T. et al., 1991; Miseta Робота виконана відповідно до наукового напрямку роботи відділу кріофізіології клітини ІПКІК НАН України за темами: “Механізми зміни осмотичної і температурної чутливості клітин при дії модифікаторів цитоскелет-мембранного комплексу, амфіфільних сполук і кріопротекторів” (шифр 2.2.6.15, № держ. реєстрації 0104U006437) та “Дослідження стійкості еритроцитів до дії осмотичного і температурного шоку і заморожування” (шифр 2.2.6.45, № держ. реєстрації 0109U000276), де автор виконував самостійні розділи, отримані результати були включені в звіти відділу. Мета роботи - вивчити особливості прояву гіпертонічного гемолізу і гіпертонічного кріогемолізу еритроцитів ссавців (бика, собаки, коня, кролика і людини), а також вплив хлорпромазину на чутливість еритроцитів до гіпертонічного шоку і кріогемолізу. 5) Дослідити вплив різних концентрацій хлорпромазину на чутливість еритроцитів бика, коня, собаки, людини і кролика до гіпертонічного шоку (4,0 моль/л NACL) і гіпертонічного кріогемолізу (1,2 моль/л NACL).Обєктом дослідження були еритроцити зі свіжої або свіжоконсервованої донорської крові 5 видів ссавців: людина (Номо sapiens), собака (Canus familiaris), кінь (Equus caballus), бик (Bos taurus), кролик (Oryctolagus cuniculus). Хлорпромазин додавали у гіпертонічне середовище до внесення в нього еритроцитів: при ГК - в середовище, що мало температуру 0 °С; при ГШ - в середовище з температурою 0 або 37 °С. Максимальна антигемолітична активність (АГМАКС) хлорпромазину в серії дослідів одного експерименту є середньою арифметичною величиною максимальної антигемолітичної активності хлорпромазину, яку розраховували за формулою: , де к - величина гемолізу еритроцитів у даних експериментальних умовах у відсутності хлорпромазину; а - мінімальна величина гемолізу еритроцитів у присутності хлорпромазину. ГК еритроцитів коня і собаки починає розвиватися при охолодженні від 37 до 0 °С у розчині NACL з концентрацією вище 0,4 моль/л, а еритроцитів людини, бика і кролика - вище 0,6 моль/л (рис. Виявлено залежність між виходом іонів К з еритроцитів на етапі попередньої інкубації при 37 °С і рівнем ушкодження клітин під час наступного охолодження до 0 °С: для еритроцитів бика і кролика у всьому концентраційному діапазоні (0,15 ? 2,00 моль/л NACL), тоді як для еритроцитів людини і коня - в діапазоні 0,6 ? 1,2 і 0,6 ? 1,4 моль/л NACL відповідно.При 37 °С рівень гіпертонічного гемолізу еритроцитів у середовищі, що містить 4,0 моль/л NACL, складає 20 % для клітин кролика, 45% - коня, 50% - собаки, 68% - бика, 85% - людини, що корелює з загальновідомими значеннями вагового співвідношення холестерину до фосфоліпідів і коефіцієнта водної дифузійної проникності еритроцитарних мембран цих ссавців. Еритроцитам людини, коня і собаки притаманний максимальний рівень гіпертонічного кріогемолізу в середовищах, які містять 1,2-1,4 моль/л NACL, з наступним зниженням рівня пошкодження. Виявлено відмінності температурних діапазонів розвитку гіпертонічного кріогемолізу еритроцитів ссавців: нижня температурна межа при охолодженні від 37 °С складає 10 °С для еритроцитів бика і кролика, 15 °С для клітин коня, собаки і людини; а верхня температурна межа при охолодженні до 0 °С - 15 °С для еритроцитів людини і собаки, 20 °С для еритроцитів коня, 25 °С бика і кролика. Зниження рівня гіпертонічного кріогемолізу з часом спостерігається для еритроцитів людини і собаки в 1,2 моль/л NACL при 28 °С, коня - в 1,2 моль/л NACL при 37 °С, бика - в 2,2 моль/л NACL при 37 °С, кролика - в 3,0 моль/л NACL при 37 °С. Виявлена висока антигемолітична активність хлорпромазину в умовах гіпертонічного гемолізу еритроцитів коня, бика, собаки, людини (80%) і в умовах гіпертонічного кріогемолізу еритроцитів людини, коня, бика і кролика (70%), при цьому діапазони ефективних концентрацій хлорпромазину для тварин різних видів відрізняються.