Розробка методів виділення з отрути щитомордника й очищення фібрин(оген)олітичного ферменту активатора протеїну С та інгібітора агрегації тромбоцитів. Дослідження фізико-хімічних властивостей ферментів, визначення їх дії на компоненти системи гемостазу.
При виникненні патологій порушується рівновага між ланками зсідання крові та фібринолізу, що викликає розвиток внутрішньосудинного зсідання крові (ВЗК-синдром), який створює загрозу тромбоутворення або геморагій. Оскільки ці ферменти не інгібуються гепарином, основна область їх використання - діагностика стану системи зсідання крові та фібринолізу при гепаринотерапії: визначення рівня фібриногену, продуктів деградації фібрину. Для виявлення порушення рівноваги між системами зсідання крові та фібриноліза необхідно контролювати рівень інгібітора процесу зсідання крові - протеїна С, який вважається маркером ВЗК-синдрому. Переваги цього ферменту (на відміну від тромбіну, який у комплексі з тромбомодуліном у присутності кофактора активує протеїн С) полягає у високій швидкості активації протеїну С без участі кофакторів; активатор протеїна С застосовується при визначенні вмісту протеїну С з використанням хромогенного субстрата у випадках, коли функціональний тест не дає відповідної інформації. Висока швидкість активації протеїну С, відсутність у плазмі крові інгібіторів, а також резистентність активатора протеїну С до високої іонної сили і присутності іонів кальцію дає можливість використовувати отриманий препарат для визначення рівня протеїну С in vivo; тромбіноподібний фермент Анцистрон-Н використовується для характеристики заключного етапу системи зсідання крові та визначення вмісту фібриногену в плазмі крові при гепаринотерапії; для виявлення аномальних форм протромбіну служить активатор протромбіну, який виділений з отрути ефи багатолускової (Echis multisquamatus).Встановлено, що отрута змії містить ферменти, які мають вплив на систему зсідання крові і фібриноліза: тромбіноподібний фермент Анцистрон-Н, активатор протеїну С, фібриногенолітичний фермент, інгібітор агрегації тромбоцитів. Запропоновано технологічні методи виділення й очищення зазначених ферментів. При вивченні фізико-хімічних і біологічних властивостей фібриногенолітичного ферменту показано, що одержаний препарат може служити інструментом для вивчення білок-білкових взаємодій в системі фібриноген/фібрин. Вперше на основі ферментів отрути щитомордника створено комплекс діагностичних тестів та доведено їх практичну придатність для визначення порушень стану системи гемостазу.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
