Особливості імунофізіологічного статусу організму здорових собак-донорів різного віку у процесі розвитку та лікування пухлин молочної залози із застосуванням методів імунотерапії. Фактори природної резистентності організму здорових собак і пухлиноносіїв.
Стан імунної системи, однієї із складової гомеостазу тварин має важливе значення для організму в умовах пухлинного росту. Проте в міру накопичення знань про стан цієї системи при пухлиноутвореннях, дедалі більше виявляється неоднозначність розуміння її ролі у виникненні, розвитку та лікуванні онкологічної патології. Клінічно відомо, що імунна недостатність супроводжує пухлину від початку до закінчення її розвитку, а тому вивчення імунофізіологічного стану організму собак різного віку при виникненні, розвитку та лікуванні пухлин залишається актуальним і потребує подальшого дослідження з метою розробки ефективних способів протипухлинного захисту молочної залози даного виду тварин. Зясувати особливості імунофізіологічного статусу організму здорових собак-донорів різного віку, а також їх аналогів у процесі розвитку та лікування пухлин молочної залози із застосуванням методів імунотерапії. Одержані результати розширюють та поглиблюють наявну інформацію щодо участі гуморальних і клітинних факторів імунітету в організмі здорових собак різного віку та їх змін при появі, розвитку та лікуванні пухлин молочної залози.До першої групи увійшли клінічно здорові собаки - контроль (К), другу групу (п=8) дослідну (Д1) складали тварини з наявними пухлинами молочної залози, комплекс лікування яких проводили з використанням оперативного втручання з наступною терапією цитостатиком; до третьої групи (Д2) увійшли собаки-пухлиноносії післяоперативне лікування яких проводилось за допомогою розробленої у нашому університеті автовакцини. Після оперативного втручання, для запобігання рецидивів, собакам 2 групи вводили циклофосфан, внутрішньомязово в дозі 20 мг на кг маси тіла. Із таблиці видно, що вже на 7-му добу після хірургічного видалення пухлини молочної залози у собак обох груп зростає вміст загального білка і альбумінів і гемоглобіну, а після завершення курсу лікуванні їх рівень наближається до показників здорових тварин, або навіть перевищує їх (імуноглобуліни собак Д2 групи). Підвищений рівень імуноглобуліну у собак другої групи після повного курсу імунотерапії проявлявся явищами регресії пухлин, відсутністю метастазів і продовженням життя тварин. 4 видно, що у хворих собак, загальна кількість Т-лімфоцитів знизилась після операції на 16,9% (Р<0,01) , після лікування цитостатиком на 13,6% (Р<0,05), а після імунотерапії лише на 11,1% і наблизилася до показників здорових тварин.У дисертації на основі проведених комплексних досліджень розкрито нові аспекти імунофізіологічного стану організму здорових собак і носіїв злоякісних пухлин молочних залоз. У собак-пухлиноносіїв, ще до хірургічного втручання, вірогідно знижується вміст загального білка в сироватці крові на 12% (Р<0,05), альбумінів на 19% (Р<0,01), гама-глобулінів на 52,0% (Р<0,01), за рахунок зростання альфа1-і альфа2-і бета-глобулінових фракцій. У крові хворих собак до хірургічного втручання достовірно знижується рівень клітинних факторів імунітету, зокрема, загальна кількість Т-лімфоцитів (CD3 ) - на 13,2% (Р<0,05), Т-гелперів-індукторів (CD4 ) - на 12,1% (Р<0,05) і В-лімфоцитів (CD19 ) - на 4%, при незмінності числа Т-супресорів-кілерів (CD8 ). У крові хворих собак до хірургічного видалення пухлин молочної залози вірогідно знижується рівень клітинних факторів природного імунітету, зокрема фагоциторна активність лейкоцитів на 27,4% (Р<0,01), а фагоцитарний індекс - у 4-5 разів. Після хірургічного видалення пухлин молочної залози в організмі хворих собак посилюється імуносупресивний стан, який супроводжується подальшим вірогідним зниженням у крові загальної кількості лейкоцитів на 48,2±2,6% (Р<0,001), лімфоцитів на 21,2±1,1% (Р<0,01), популяцій CD3 , CD4 і CD8 Т-клітин відповідно на 12,6±0,3%; 16,7±0,4% і 10,2±0,2% (Р<0,05), рівня фібриногену на 32,3±1,6% (Р<0,01), ферментів антиоксидантної системи (каталази і СОД), без суттєвих змін числа CD19 -В-лімфоцитів.
План
Основний зміст роботи
Вывод
У дисертації на основі проведених комплексних досліджень розкрито нові аспекти імунофізіологічного стану організму здорових собак і носіїв злоякісних пухлин молочних залоз.
Встановлено, що основні показники протипухлинного захисту у хворих собак, порівняно із здоровими тваринами-аналогами за віком і породою, є зниженими. Для отримання стійкого клінічного видужання собак-пухлиноносіїв і для посилення імунного захисту їх організму слід поєднувати оперативне видалення пухлини з імунотерапією у післяопераційний період.
1. У собак-пухлиноносіїв, ще до хірургічного втручання, вірогідно знижується вміст загального білка в сироватці крові на 12% (Р<0,05), альбумінів на 19% (Р<0,01), гама-глобулінів на 52,0% (Р<0,01), за рахунок зростання альфа1- і альфа2- і бета-глобулінових фракцій. У всіх хворих собак в сироватці крові виявлено високий відсоток С-реактивного білка (52,4-72,4%), тоді як у клінічно здорових тварин цей білок був відсутній.
2. У крові хворих собак до хірургічного втручання достовірно знижується рівень клітинних факторів імунітету, зокрема, загальна кількість Т-лімфоцитів (CD3 ) - на 13,2% (Р<0,05), Т-гелперів-індукторів (CD4 ) - на 12,1% (Р<0,05) і В-лімфоцитів (CD19 ) - на 4%, при незмінності числа Т-супресорів-кілерів (CD8 ). У хворих собак-носіїв пухлин молочних залоз знижується у 5 разів кількість бластних клітин у відповідь на фітогемаглютинін (ФГА), число мітозів - в 11 разів, фагоцитарна активність лейкоцитів на 22,4% (Р<0,01).
3. У крові хворих собак до хірургічного видалення пухлин молочної залози вірогідно знижується рівень клітинних факторів природного імунітету, зокрема фагоциторна активність лейкоцитів на 27,4% (Р<0,01), а фагоцитарний індекс - у 4-5 разів. Одночасно достовірно зменшується кількість еритроцитів, гемоглобіну та активність каталази і супероксиддисмутази (СОД). Натомість вміст дієнових конюгатів (ДК) і малонового діальдегіду (МДА) достовірно зростає відповідно на 24,3 і 26,7% (Р<0,01).
4. Після хірургічного видалення пухлин молочної залози в організмі хворих собак посилюється імуносупресивний стан, який супроводжується подальшим вірогідним зниженням у крові загальної кількості лейкоцитів на 48,2±2,6% (Р<0,001), лімфоцитів на 21,2±1,1% (Р<0,01), популяцій CD3 , CD4 і CD8 Т-клітин відповідно на 12,6±0,3%; 16,7±0,4% і 10,2±0,2% (Р<0,05), рівня фібриногену на 32,3±1,6% (Р<0,01), ферментів антиоксидантної системи (каталази і СОД), без суттєвих змін числа CD19 -В-лімфоцитів. Вміст основних продуктів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) - ДК при цьому продовжує зростати на 6,2±0,2 мкмоль/л.
5. В процесі післяхірургічного лікування цитостатичним препаратом циклофосфаном порівняно з імунотерапією більшість імунологічних показників зберігається на пониженому рівні. Зокрема, вміст альфа1 і гама-глобулінів знижений відповідно на 6,3±0,2% (Р<0,05) і 14,7±0,7% (Р<0,01), CD3 , CD4 і CD19 -лімфоцитів відповідно на 16,7±0,7, 14,1±0,5 і 9,6±0,2% (Р<0,05). Кількість CD8 -Т-супресорів та С-реактивного білка при цьому зросли відповідно на 18,1±0,7 і 9,8±0,2% (Р<0,01).
6. При застосуванні імунотерапії впродовж комплексного лікування переважна більшість показників імунофізіологічного стану собак наближається до величин характерних для клінічно здорових тварин. Так, до факторів імунного захисту, які перевищують контрольні показники здорових собак-аналогів відносяться: вміст загального білка в сироватці крові, альфа1-глобуліни, число CD19 В-лімфоцитів, імунорегуляторний індекс (відношення CD4 /CD8 ). Решта досліджуваних показників, після завершення курсу комплексного лікування собак, наближалися до контрольних величин.
7. Отримані результати свідчать про те, що застосування специфічної автовакцини в якості імунотерапії собак-пухлиноносіїв молочної залози підвищує захисний потенціал організму, зменшує кількість метастазів і рецидивів хвороби.
Практичні рекомендації
1. Визначення вмісту імуноглобулінів класу G1 Т-гелперних і Т-цитотоксичних лімфоцитів, активності фагоцитарної та антиоксидантної системи в крові собак може бути використано для діагностики пухлин молочної залози.
2. Для підвищення протипухлинного захисту та профілактики рецидивів хвороби, отримання стійкого клінічного видужання собак при пухлинах молочної залози, рекомендується комплексне лікування, яке включає оперативне видалення бластоми та імунотерапію аутовакциною за методикою описаною нами у «Деклараційному патенті №98126325 від 01.12.1998р.».
3. Теоретичні та клінічні розробки результатів дисертації рекомендується включити у навчальні посібники та програми з підготовки фахівців ветеринарної медицини та вивчення курсу «Ветеринарна імунологія та онкологія».
Список литературы
1. Завірюха В.І. Папіломатоз тварин, ефективність консервативно-оперативних методів лікування / В.І. Завірюха, В.Ф. Шекель // Актуал. пробл. мед., біол., вет. і с.-г-ва. ? 1998. ? Т. 4. ? С. 276?277.
Дисертант брав участь у проведенні досліду, визначенні гемограми, аналізі отриманих даних результатів і підготовці статті до друку.
2. Онкологічні хвороби тварин і методи їх лікування / [В.І. Завірюха, В.І. Саєвич, В.Ф. Шекель та ін.] // Наук. вісн. ЛДАВМ. ? 1999. ? Вип. ІІ. ? С. 56?62.
Дисертант брав участь у проведенні досліду, визначенні клінічних і гематологічних показників, аналізі результатів і написанні статті.
3. Маслянко Р.П. Медіатори системи імунітету тварин / Р.П.Маслянко, Т.С. Матвіїшин, В.Ф. Шекель // Наук. вісн. ЛНАВМ. ? 2005. ? Т. 7 (27). ? С. 142?150.
Дисертант проводив аналіз експериментальних досліджень та узагальненні даних, брав участь в обґрунтуванні матеріалів, підготовці їх до друку.
4. Маслянко Р.П. Гемолітична резистентність еритроцитів собак при розвитку та лікуванні пухлин молочної залози / Р.П. Маслянко, В.Ф. Шекель // Сільський господар. ? 2006. ? № 9?10. ? С. 18?19.
Дисертант організував дослід, брав участь у дослідженні крові, аналізі результатів і написанні статті.
5. Маслянко Р.П. Сучасні аспекти імунології неопластичних процесів у тварин / Р.П. Маслянко, В.Ф. Шекель // Наук. вісн. ЛНАВМ. ? 2005. ? Т. 7, Ч. 1. ? С. 171?177.
Дисертант проводив аналіз літературних і експериментальних даних, брав участь в обґрунтуванні положень статті, підготовці матеріалів до друку.
6. Маслянко Р.П. Взаємодія імунокомпетентних клітин з клітинами пухлин / Р.П. Маслянко, В.Ф. Шекель // Біологія тварин. ? 2005. ? Т. 7 (2). ? С. 56?61.
7. Мисак А.Р. Морфологія окремих пухлин великої рогатої худоби і собак / А.Р. Мисак, В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха // Наук. вісн. ЛНАВМ. ? 2004. ? Т. 6. ? С. 56? 60.
Дисертант брав участь у проведенні дослідів, визначенні гемограми, аналізі результатів і підготовці матеріалів до друку.
8. Шекель В.Ф. Особливості антиоксидантного захисту в організмі собак при онкології молочної залози / В.Ф. Шекель // Сільськ. господар. ? 2006. ? № 9?10. ? С. 18?19.
9. Шекель В.Ф. Пухлини собак і принципи їх лікування / В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха // Проблеми вет. обслугов. дрібних тварин : зб. матеріалів наук. конференції. ? К., 1998. ? С. 39?42.
Дисертант брав участь у проведенні дослідів, визначенні гемограми та показників імунітету, узагальнив дані та підготовив статтю до друку.
10. Шекель В.Ф. Імунотерапія в системі лікування тварин хворих пухлинами / В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха, А.Р. Мисак // Наук. вісн. ЛНАВМ. ? 2004. ? Т. 6 (3). ? С. 144?149.
Дисертант брав участь у проведенні досліду, визначенні показників гемогами та імунітету, аналізі результатів і написанні статті.
11. Шекель В.Ф. Схема загальних оперативно-консервативних заходів при лікуванні собак з пухлинами / В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха // Пробл. вет. обслуг. дрібних домаш. тварин : мат. Міжнарод. науков.-практичн. конф. ? К., 1998. ? С. 36?39.
12. Шекель В.Ф. Застосування імуно- та хіміотерапії при лікуванні собак із новоутвореннями / В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха, А.Р. Мисак // Вісник Дніпропетровського держ. аграр. у-ту. ? 2006. ? № 1. ? С. 53?55.
Дисертант брав участь у проведенні досліду, визначенні імунокомпетентних і фізіологічних показників, аналізі отриманих результатів і підготовці статті до друку.
13. Шекель В.Ф. Роль иммунных реакций при онкологических заболеваниях / В.Ф. Шекель, Р.П. Маслянко // Матер. конф. по иммунологии. ? Минск, 2005. ? С. 42?48.
Дисертант провів аналіз літератури і власних досліджень, узагальнив дані та підготовив матеріали до друку.
14. Шекель В.Ф. Застосування імуно- та хіміотерапії при лікуванні собак з новоутвореннями / В.Ф. Шекель, В.І. Завірюха, А.Р. Мисак // Вісник Сумського наукового аграрного університету. Серія «Ветеринарна медицина». ? Вип. 1?2. ? 2006. ? С. 234?235.
Дисертант брав участь у проведенні досліджень гематологічних і імунологічних показників, аналізі результатів і написанні статті.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 03.00.13 - фізіологія людини і тварин. - Львівський національний університет ветеринарної медицини та біотехнологій імені С.З.Ґжицького. - Львів, 2008.
В дисертації наведені дані про зміни клітинної та гуморальної ланки природного та набутого імунітету, гематологічних показників, активність антиоксидантного захисту в організмі здорових собак і пухлиноносіїв молочної залози з врахуванням комплексного лікування. Встановлено, що у собак-пухлиноносіїв, ще до хірургічного втручання достовірно знижується вміст загального білку в сироватці крові, альбумінів, імуноглобулінів і зростає концентрація альфа-, бета-глобулінів, та С-реактивного білку, тоді як у клінічно здорових собак цей білок відсутній.
У крові собак-пухлиноносіїв достовірно знижується також рівень клітинних факторів природного та набутого захисту, зокрема фагоцитарна активність лейкоцитів, кількість і функціональна активність Т- і В-лімфоцитів при незмінності числа Т-супресорів - кілерів. Одночасно достовірно зменшується кількість еритроцитів, гемоглобіну, активність каталази та супероксиддисмутази. Натомість вміст дієнових конюгатів і малонового діальдегіду достовірно зростає.
Зясовано, імунофізіологічний вплив розробленої схеми імунотерапії на стан факторів протипухлинного захисту собак. Відзначено, що аутовакцина, виготовлена з гомогенних тканин пухлини молочної залози, виявляла виражений стимулюючий ефект на рівень гуморальних та клітинних механізмів імунітету в організмі собак, що забезпечило прискорення термінів одужання.
Зясовано позитивну дію імунотерапії на активність антиоксидантної системи захисту, стан гомеостазу та гемолітичної резистентності еритроцитів.
Шекель В.Ф. Иммунологические факторы противоопухолевой защиты молочной железы у собак. - Рукопись.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 03.00.13 - физиология человека и животных. - Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З.Гжицкого. - Львов, 2008.
В диссертации приведены данные об изменениях клеточных и гуморальных факторов естественного и приобретенного иммунитета, гематологических показателей и активность антиоксидантной системы защиты в организме здоровых собак и носителей опухоли молочной железы с учетом комплексного лечения. Установлено, что наличие опухолей в молочной железе собак сопровождается достоверным снижением содержания общего белка в сыворотке крови, альбуминов и иммуноглобулинов, увеличивается концентрация альфа-, бета-глобулинов и С-реактивность белка. У клинически здоровых собак С-реактивный белок отсутствует.
В крови собак-носителей опухоли молочной железы достоверно снижается также уровень клеточных факторов естественной резистентности и приобретенного иммунитета, в частности фагоцитарная активность лейкоцитов, количество и функциональная активность Т - и В-лимфоцитов, при неизменности числа Т-супрессоров - киллеров. Одновременно уменьшается в крови больных собак количество эритроцитов, гемоглобина, активность каталазы и супероксиддисмутазы, а содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида достоверно возрастает.
При комплексном лечении собак-носителей опухоли молочной железы возрастает коагуляционная способность периферической крови, которая характеризируется ее гепаринингибирующей активностью, повышением свертывающей системы и снижением антикоагуляционного действия. Эти изменения могут способствовать развитию благоприятного фона для процессов малигнизации клеток и дальнейшего развития прогрессии опухоли, поскольку они влияют на пролиферацию и дифференциацию клеток, а также на отложение фибрина крови вокруг циркулирующих опухолевых клеток, защищая их таким образом от иммунной атаки организма.
Активация антикоагуляционной функции повышает резистентность организма больных собак процессами злокачественной трансформации клеток, роста опухолевых узлов, приживлению циркулирующих опухолевых клеток.
Анализ проблемы взаимоотношений опухолевого процесса и системы иммунофизиологического состояния организма собак показал, что появление бластомы сопровождается выраженными изменениями в крови клеточных и гуморальных факторов защиты. Эти изменения оказывают влияние не только на развитие опухоли, но и на процесс комплексного лечения его носителя. При лечении собак-носителей опухоли молочной железы наилучший эффект получен при использовании иммунотерапии.
Разработан способ приготовления аутовакцины и ее применение при комплексном лечении больных собак, включая хирургическое удаление бластом и послеоперационную иммунотерапию для предотвращения рецедивов и метастазов.
Shekel V.F. Immune and physiological factors of antitumor protection of dogs mammary glands. - Manuscript.
Dissertation presented on scientific degree of candidate of Veterinary Sciences on speciality 03.00.13 - Physiology of Human and Animals. - Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z.Gzhytskyj. - Lviv, 2008.
The dissertation present information about the changes of cellular and hummoral links of natural and acquired immunity, hematological indexes, activity of antioxidative defence in the bodies of both healthy dogs and tumorowners of mammary gland taking into account complex medical treatment. It has been determined that in tumorowner dogs in the process of surgical interference content of common protein in blood serum, albumins, immunoglobulins is reduced as well as concentration of ?-, ?-globulins and С-reactive protein is absent.
Level of cellular factors of natural and acquired protection in the blood of tumorowner dogs is also reduced, in particular phagocytic activity of leucocytes, the amount and functional activity of T- and B-lymphocytes. At the same time the amount of erythrocytes, hemoglobin, catalase and superoxydymutasa is reduced. Instead, the amount of leucocytes, content of new conjugates and malone dialdehyde is grown.
It is found out the immunophysiological influence of the developed immunotherapy scheme on the state of factors of dogs antitumor protection. It is marked that autovaccine made from homogeneous tissues of mammary gland tumor has shown stimulative effect on the level of humoral and cellular mechanisms of immunity in dogs bodies that provided the acceleration of recovering.
We have shown the positive action of immunotherapy on the activity protection system, as well as state of homoeostasis and hemolytic resistance of erythrocytes.
