Адгезивні властивості клітин ембріональної печінки людини, вміст фібробластоподібних клітин-попередників у первинній суспензії та їх колонієутворююча активність в умовах моношарового культивування. Вплив диметилсульфоксиду на проліферативні властивості.
При низкой оригинальности работы "Кріоконсервування фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Однак властивості цих клітин у пренатальному періоді, зокрема в ЕПЛ, ще недостатньо вивчені, що і зумовлює актуальність обраного напрямку досліджень. Мета роботи - визначити вплив умов кріоконсервування на життєздатність клітин у первинній суспензії ембріональної печінки людини, вміст фібробластоподібних клітин-попередників і їх здатність до проліферації та індукованого диференціювання. Оцінити адгезивні властивості клітин ембріональної печінки людини, вміст фібробластоподібних клітин-попередників у первинній суспензії та їх колонієутворюючу активність в умовах моношарового культивування. Визначити здатність фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини до диференціювання в остеогенному та адипогенному напрямках при культивуванні in vitro. Визначити вплив різних умов кріоконсервування на колонієутворюючу активність і диференціювальні потенції фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини.Програмне заморожування суспензій клітин ЕПЛ (режими III-VI) здійснювали на заморожувачі ЗП 10 (СКТБ ІПКІК НАН України). Для характеристики стану клітин ЕПЛ на різних етапах дослідження використовували експрес-методи оцінки життєздатності за допомогою прижиттєвого забарвлення ТС (Seglen P., 1976), БЕ і ФДА (Dankberg F.et al., 1976). Для первісної характеристики життєздатності клітин ЕПЛ у складі первинної суспензії було використано методи прижиттєвого забарвлення за допомогою ТС, а також БЕ і ФДА. Ці результати свідчать, що кріоконсервування первинної суспензії клітин ЕПЛ у ССР з ДМСО 0,7 М за режимом III (на першому етапі - охолодження зі швидкістю близько 1 ОС/хв до-40 ОС, на другому етапі - 10 ОС/хв до-80 ОС, на третьому - занурення зразків в рідкий азот) дозволяє зберегти гранулоцитарно-макрофагальні КП. При використанні різних посівних концентрацій клітин встановлено, що для первинної суспензії ЕПЛ ефективна посівна доза - 20000-40000 клітин/см2.В дисертації наведено теоретичне узагальнення і вирішення наукової проблеми кріочутливості колонієутворюючих фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини. Визначено, що близько 50 % клітин первинної суспензії ембріональної печінки людини (8-11 тижнів гестації) здатно прикріплюватися до пластика протягом години після експлантації. Показано, що фібробластоподібні клітини-попередники ембріональної печінки людини здатні до індукованого остеогенного і адипогенного диференціювання в умовах культивування.
План
Основний зміст роботи
Вывод
В дисертації наведено теоретичне узагальнення і вирішення наукової проблеми кріочутливості колонієутворюючих фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини. В роботі визначені умови кріоконсервування фібробластоподібних клітин-попередників, що мають здатність до колонієутворення, остеогенного та адипогенного диференціювання in vitro.
1. Визначено, що близько 50 % клітин первинної суспензії ембріональної печінки людини (8-11 тижнів гестації) здатно прикріплюватися до пластика протягом години після експлантації. Адгезивна фракція включає популяцію колонієутворюючих фібробластоподібних клітин, що складають не менш 0,002-0,003 % від загальної кількості клітин первинної суспензії.
2. Показано, що фібробластоподібні клітини-попередники ембріональної печінки людини здатні до індукованого остеогенного і адипогенного диференціювання в умовах культивування.
3. Порівняльна оцінка життєздатності клітин ембріональної печінки людини показала, що прижиттєве забарвлення трипановим синім і бромистим етидієм дозволяє отримувати подібні результати, в той час як використання флуоресцеїндіацетату дає можливість виявити лише частину життєздатних клітин у складі первинної суспензії.
4. Встановлено, що експозиція клітин ембріональної печінки людини в кріозахисному розчині з диметилсульфоксидом 0,7 або 1,4 М при 4 ОС протягом 30 хвилин не призводить до зниження життєздатності і адгезивних властивостей клітин, а також їх здатності до колонієутворення.
5. Показано, що повільне заморожування первинної суспензії клітин ембріональної печінки людини в сахарозо-сольовому розчині під захистом диметилсульфоксиду забезпечує збереження гранулоцитарно-макрофагальних гемопоетичних попередників, але не є ефективним для колонієутворюючих фібробластоподібних клітин-попередників.
6. Виявлено стимулювання індукції остеогенного диференціювання фібробластоподібних клітин-попередників ембріональної печінки людини після експозиції первинної суспензії з кріопротектором диметилсульфоксидом.
7. Визначено, що зниження переохолодження за допомогою ініціації кристалоутворення при кріоконсервуванні первинної суспензії клітин ембріональної печінки людини під захистом диметилсульфоксиду забезпечує збереження здатності фібробластоподібних клітин-попередників до колонієутворення та диференціювання в остеогенному і адипогенному напрямках.
Список литературы
1. Скоробогатова Н.Г., Грищук В.П., Петренко А.Ю. Влияние условий удаления криопротектора ДМСО на жизнеспособность и колониеобразующую активность криоконсервированных клеток эмбриональной печени человека // Проблемы криобиологии. 2002. № 4. С. 16-23.
2. Скоробогатова Н.Г. Сравнение методов оценки жизнеспособности клеток эмбриональной печени человека после криоконсервирования // Проблемы криобиологии. 2003. №2. С. 84-90.
3. Грищенко В.И., Петренко А.Ю., Волкова Н.А., Скоробогатова Н.Г. Колониеобразующая активность фибробластоподобных клеток-предшественников из эмбриональной печени человека в условиях in vitro // Доповіді Національної академії наук України. 2005. №2. С. 138-141.
4. Скоробогатова Н.Г., Волкова Н.А., Петренко А.Ю. Криочувствительность гемопоэтических и стромальных предшественников в первичной суспензии клеток эмбриональной печени человека // Проблемы криобиологии. 2005. Том 15, №3.С. 577-580.
5. Скоробогатова Н.Г., Грищук В.П., Петренко А.Ю. Роль переохлаждения в сохранении клоногенных свойств фибробластоподобных клеток - предшественников эмбриональной печени человека после криоконсервирования // Проблемы криобиологии. 2006. Том 16, №1. С. 24-31.
6. Патент № 67587А, МПК А01N1/02. Спосіб кріоконсервування гемопоетичних клітин ембріональної печінки людини / В.І. Грищенко, О.Ю. Петренко, Н.Г. Скоробогатова, С.П. Мазур, В.П. Грищук, Н.О. Волкова. Заявл.31.10.03; Опубл. 15.06.2004. Бюл. № 6. С. 4.7.
7. Petrenko A.Yu., Petrenko Yu.A., Skorobogatova N.G., Improvement of some cryopreservation stages of suspensions enriched with stem haemopoietic cells// Abstrats of Meeting of the Society of low temperature biology Cryobiomol. Coimbra, 2003. P. 155.
8. Petrenko A.Yu.,Grischenko V.I.,Petrenko Yu.A., Skorobogatova N.G. Cellular hierarchy of human fetal liver cells // Матеріали Установчого зїзду Українського товариства клітинної біології (25-28 квітня 2004). Львів, 2004. С. 147.
9. Petrenko Yu. A., Skorobogatova N. G., Jones R. E., Petrenko A. Yu. Cryosensitivity of hematopoietic and mesenchymal stem / progenitor cells derived from human fetal liver // Abstracts of Meeting of Society for Cryobiology and Society for low temperature biology. Hamburg, 2006. P. 43.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
