Корекція андрогенної функції в експериментальних тварин шляхом трансплантації нативних та кріоконсервованих органних культур сім’яників - Автореферат

На сьогодні одним із підходів до вирішення проблем гормональної недостатності ендокринних залоз, що розвивається при тривалій гормональній терапії і супроводжується, як правило, розвитком гормоно-залежного стану пацієнтів, є трансплантація ендокринних тканин неонатальних поросят у вигляді органотипових культур [Егоров У.И., 1994, Турчин И.С., 2000]. Дослідження з кріоконсервування органотипових культур ендокринних тканин, що зявилися останнім часом [Бондаренко Т.П., 1999, Геращенко А.В., 2002, Самченко И.И., 2003], дозволяють говорити про принципову можливість впровадження в практику методу трансплантації кріоконсервованого ендокринного матеріалу. Залишається відкритим питання і про те, чи будуть кріопротектори, використані при формуванні середовищ для кріоконсервування, змінювати функціональні характеристики органотипових культур і чи будуть клітини органотипових культур підлягати принципам функціонування ендокринних тканин в організмі реципієнта, чи зміниться їх базальна та стимульована секреція. Робота виконувалася в рамках науково-дослідних тем Інституту проблем кріобіології і кріомедицини НАН України №73 “Біохімічні і фармакологічні аспекти кріоконсервування ендокринних тканин та еритроцитів” (шифр - 2.2.6.73, № 02-13-73) і теми №3 “Дослідження механізмів функціонування кріоконсервованих органних культур ендокринних тканин” (шифр - 2.2.6.03, № 0101U003478). Метою роботи був порівняльний аналіз функціональних характеристик нативних і кріоконсервованих органотипових культур сімяників статевозрілих щурів та новонароджених поросят за умов ало-і ксенотрансплантація орхіектомованим тваринам і тваринам з експериментальним гіпогонадизмом, викликаним введенням хлориду кадмія.Дослідження виконані на органотипових культурах, які одержували з сімяників білих безпородних щурів (100 шт) з віварію при Інституті проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, і новонароджених поросят (100 шт), що доставляли з агрокомплексу “Слобожанський” (с. Тваринами-реципієнтами для трансплантації нативних і кріоконсервованих органотипових культур ало-та ксеногенного походження були орхіектомовані самці білих безпородних щурів або щури з експериментальним токсичним гіпогонадизмом вагою 200-230 г (200 шт). З третьої по пяту добу для клітин культури була характерна тенденція до підвищення вмісту тестостерону в живильному середовищі і суттєве підвищення його рівня на пяту добу. Для клітин даної культури у випадку 5% концентрації ДМ ми не спостерігали будь-яких змін рівня тестостерону як у клітинах, так і в інкубаційному середовищі. При аналізі показників вмісту тестостерону в клітинах виявилося, що його концентрація зростала, а це означало, що процеси стероїдогенезу не порушувалися, а відбувалася зміна процесів секреції, як і у випадку клітин органотипової культури з сімяників новонароджених поросят.Проведений порівняльний аналіз властивостей нативних і кріоконсервованих органотипових культур з сімяників статевозрілих щурів і новонароджених поросят вказує на доцільність використання кріоконсервованого матеріалу як трансплантату, а створення його запасів у низькотемпературних банках сприятиме впровадженню метода ксенотрансплантації для корекції ендокринопатій. Кріоконсервування органотипових культур з сімяників тварин в присутності 10% димексиду при двоетапному заморожуванні зі швидкістю 2°С/хв до-40°С з подальшим зануренням у рідкий азот (-196°С) забезпечує збереження 80-85% життєздатних клітин зі збереженням функціональних характеристик, визначених за рівнем базальної і стимульованої секреції тестостерону, вимірюваних радіоімунним методом. Ало-і ксенотрансплантація нативних і кріоконсервованих органотипових культур орхіектомованих тварин і тварин з експериментальним гіпогонадизмом сприяє підвищенню рівня тестостерону в плазмі крові реципієнтів. Алотрансплантат в організмі орхіектомованих тварин забезпечує в період з 15-ї по 30-у добу після трансплантації більший порівняно з ксенотрансплантатом позитивний ефект, який різко знижується до 45-ї доби і поступово знижується до 90-ї доби. Позитивний ефект ало-і ксенотрансплантатів в організмі експериментальних тварин з токсичним гіпогонадизмом починає виявлятися на 15-у добу, до 30-ї доби концентрація тестостерону в плазмі крові досягає рівня контрольних тварин при трансплантації нативного матеріалу і перевищує такий у випадку використання кріоконсервованого ксенотрансплантату.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

1. Проведений порівняльний аналіз властивостей нативних і кріоконсервованих органотипових культур з сімяників статевозрілих щурів і новонароджених поросят вказує на доцільність використання кріоконсервованого матеріалу як трансплантату, а створення його запасів у низькотемпературних банках сприятиме впровадженню метода ксенотрансплантації для корекції ендокринопатій.

2. Кріоконсервування органотипових культур з сімяників тварин в присутності 10% димексиду при двоетапному заморожуванні зі швидкістю 2°С/хв до -40°С з подальшим зануренням у рідкий азот (-196°С) забезпечує збереження 80-85% життєздатних клітин зі збереженням функціональних характеристик, визначених за рівнем базальної і стимульованої секреції тестостерону, вимірюваних радіоімунним методом. Терміни низькотемпературного зберігання не впливають на життєздатність і функціональні характеристики органотипових культур з сімяників.

3. Кріоконсервований ендокринний матеріал має високу функціональну активність, що зумовлено впливом димексиду і факторами, які реалізуються при зниженні температури.

4. Ало- і ксенотрансплантація нативних і кріоконсервованих органотипових культур орхіектомованих тварин і тварин з експериментальним гіпогонадизмом сприяє підвищенню рівня тестостерону в плазмі крові реципієнтів.

5. Алотрансплантат в організмі орхіектомованих тварин забезпечує в період з 15-ї по 30-у добу після трансплантації більший порівняно з ксенотрансплантатом позитивний ефект, який різко знижується до 45-ї доби і поступово знижується до 90-ї доби. Ксенотрансплантат протягом усього терміну спостереження (90 діб) забезпечував стійкий позитивний ефект.

6. Позитивний ефект ало- і ксенотрансплантатів в організмі експериментальних тварин з токсичним гіпогонадизмом починає виявлятися на 15-у добу, до 30-ї доби концентрація тестостерону в плазмі крові досягає рівня контрольних тварин при трансплантації нативного матеріалу і перевищує такий у випадку використання кріоконсервованого ксенотрансплантату. На 45 добу спостерігається зниження позитивної функції, яке виходить на плато і залишається незмінним до закінчення термінів спостереження (90 діб).

ПЕРЕЛІК ОПУБЛІКОВАНИХ РОБІТ

1. Бондаренко Т.П., Салех Дж. М. Абу Жаяб. Криоконсервирование органной культуры семенников новорожденных поросят для создания банка трансплантационного материала // Проблеми медичної науки та освіти. - 2002. - №2.- С.60-64 (дисертантом особисто проведена вся експериментальна частина).

2. Салех Дж. М. Абу Жаяб, Луговой С.В., Губина Н.Ф. Влияние криоконсервирования на динамику базальной секреции тестостерона органной культурой семенников крыс // Проблемы криобиологии. - 2002. - №1.- С.50-54 (дисертантом проведено експерименти з культивування, рекультивування та кріоконсервування).

3. Салех Дж. М. Абу Жаяб, Бондаренко Т.П. Функциональные характеристики органной культуры семенников при криоконсервировании // Проблемы криобиологии. - 2002. - №3.- С.80-82 (дисертантом особисто проведено всю експериментальну частину).

4. Бондаренко Т.П., Алабедалькарим Н.М., Божок Г.А., Салех Дж. М. Абу Жаяб Вплив диметилсульфоксиду та кріоконсервування на функціональні характеристики органної культури сімяників // Проблеми ендокринної патології.-2003.-№3.-с.57-62 (дисертантом особисто досліджено вплив диметилсульфоксиду на функціональні характеристики органної культури сімяників).

5. Бондаренко Т.П., Салех Дж. М. Абу Жаяб, Божок Г.А., Алабедалькарим Н.М., Легач Е.И. Коррекция гормонального статуса у кастрированных и с экспериментальным гипогонадизмом крыс путем алло- и ксенотрансплантации органотипических культур // Проблеми екології та медицини.- 2003.-Т. 7.- № 1-2 с. 3-7 (дисертантом самостійно здійснено постанову експерименту, забір матеріалу, біохімічні дослідження, статистичну обробку даних та оформлення результатів у вигляді статті).

6. Салех Дж. М. Абу Жаяб, Луговой С.В., Губина Н.Ф. Влияние криоконсервирования на секрецию тестостерона органной культурой семенников крыс // Збірник тез. конференції: Патогенетичні аспекти фармакотерапії ендокринних захворювань. Харків.- 6-7 лютого. - 2002. - С.17-18.

7. Божок Г.А., Салех Дж. М. Абу Жаяб, Алабедалькарим Н.М. Вплив кріоконсервування на функціональний стан органної культури сімяників новонароджених поросят // Тези конференції //Укр. біохім. журнал.-2002.-74, № 4.-с. 141-142.

Размещено на .ru