Разработка оптимальных условий для количественного определения TREC методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Определение числа CD31-позитивных Т-клеток и количества TREC в них в норме, при атопическом дерматите, бронхиальной астме.
При низкой оригинальности работы "Количество TREC в периферических Т-лимфоцитах человека в норме и при иммунопатологических состояниях", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
У человека, несмотря на то, что для наивных CD4 лимфоцитов выявлен поверхностный маркер CD31, точно определить количество клеток, недавно мигрировавших из тимуса довольно трудно, так как CD4 CD31 клетки способны к самоподдержанию на низком уровне с сохранением экспрессии CD31 [Kohler S., 2009]. При стимуляции выделенных из пуповинной крови Т-лимфоцитов антителами против CD3 и CD28 антигенов наблюдалось уменьшение относительного количества TREC, поэтому для оценки функциональной активности тимуса необходимо учитывать время жизни наивных клеток и скорость обновления периферического пула Т-клеток [Douek D.C., 1998; Hazenberg M.D., 2003]. При ВИЧ-инфекции на ранней стадии наблюдается увеличение количества TREC в CD4 Т-клетках, что можно объяснить как увеличением гибели зрелых CD4 Т-клеток, так и большей по сравнению со здоровыми донорами продукцией тимуса [Nobile M., 2004]. Показано, что при ревматоидном артрите количество CD4 Т-клеток, содержащих TREC, снижено настолько, что у пациентов в 20-30 лет оно соответствует количеству таких клеток у здоровых людей в 50-60 лет. Пациенты с атопическим дерматитом характеризуются уменьшением относительного количества TREC в субпопуляциях CD4 и CD8 лимфоцитов на фоне повышенного абсолютного количества клеток в мм3 крови в данных субпопуляциях.По сравнению со здоровыми донорами при ревматоидном артрите регистрируется снижение доли TREC-позитивных клеток среди CD4 и CD8 лимфоцитов и абсолютного количества содержащих TREC CD8 лимфоцитов, что, учитывая неизмененное общее число CD8 -клеток, указывает на больший по сравнению с нормой вклад пролиферации периферических лимфоцитов в поддержание Т-клеточного пула. Пациенты с атопическим дерматитом характеризуются уменьшением относительного количества TREC в Т-лимфоцитах с сохранением абсолютного количества TREC-позитивных клеток на уровне донорских значений, что, учитывая повышенное абсолютное количество CD4 -и CD8 -клеток, свидетельствует о большем вкладе периферической экспансии в поддержание пула Т-лимфоцитов.
Вывод
1. Разработанный оригинальный стандарт и подобранные концентрации специфических праймеров, термостабильной Taq ДНК-полимеразы позволяют определять количество TREC в субпопуляциях Т-лимфоцитов методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
2. При стимуляции in vitro анти-CD3 антителами и IL-2 доля TREC-позитивных Т-лимфоцитов уменьшается пропорционально числу совершенных делений, что свидетельствует о переходе TREC только к одной из дочерних клеток при делении.
3. По сравнению со здоровыми донорами при ревматоидном артрите регистрируется снижение доли TREC-позитивных клеток среди CD4 и CD8 лимфоцитов и абсолютного количества содержащих TREC CD8 лимфоцитов, что, учитывая неизмененное общее число CD8 -клеток, указывает на больший по сравнению с нормой вклад пролиферации периферических лимфоцитов в поддержание Т-клеточного пула.
4. Пациенты с атопическим дерматитом характеризуются уменьшением относительного количества TREC в Т-лимфоцитах с сохранением абсолютного количества TREC-позитивных клеток на уровне донорских значений, что, учитывая повышенное абсолютное количество CD4 - и CD8 -клеток, свидетельствует о большем вкладе периферической экспансии в поддержание пула Т-лимфоцитов.
5. По сравнению с больными бронхиальной астмой с давностью заболевания более одного года и донорами пациенты с длительностью бронхиальной астмы менее одного года демонстрируют повышенное абсолютное и относительное количество TREC-позитивных клеток среди CD4 и CD8 лимфоцитов, что указывает на более интенсивное пополнение периферического пула Т-лимфоцитов за счет мигрирующих из тимуса наивных клеток.
6. При бронхиальной астме регистрируется увеличение количества TREC в CD31-позитивных клетках, что свидетельствует о роли тимопоэза в поддержании Т-клеточного пула при данной патологии. Напротив, пациенты с ревматоидным артритом и атопическим дерматитом не отличаются от доноров по содержаниюу TREC-позитивных CD4 CD31 и CD8 CD31 лимфоцитов, что указывает на отсутствие выраженных изменений тимопоэза у больных данной категории.
7. Определение абсолютного и относительного количества TREC в субпопуляциях CD4 и CD8 лимфоцитов, числа CD4 и CD8 лимфоцитов в мм3 крови, а также числа CD31-позитивных клеток и уровня TREC в них позволяет дифференцировать вклад различных механизмов (тимопоэза и периферической экспансии) в поддержание периферического пула Т-клеток при иммунопатологических состояниях.
Список литературы
1. Борисов В.И., Блинова Е.А., Кожевников В.С. Фенотипические особенности лимфоцитов в динамике клеточных делений in vitro // Сибирский медицинский журнал. - 2008. - Т.23 (3). - С. 86-87.
2. Борисов В.И., Блинова Е.А., Кожевников В.С. Изменение экспрессии CD4, CD8, CD25 и CD28 маркеров на Т-лимфоцитах после поликлональной активации в динамике клеточных делений in vitro // Российский иммунологический журнал. - 2009. - Т. 3 (12). - № 3-4. - С. 273-279.
3. Блинова Е.А., Борисов В.И., Кожевников В.С. Динамика TREC в зависимости от количества пройденных Т-лимфоцитами делений in vitro // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири», Красноярск, 2010. - С. 98-100.
4. Blinova E.A., Borisov V.I., Kozhevnikov V.S. The life span of TRECS in T-cell culture // International Immunology. - 2010. - V. 22 №1 day 3 (3/5). - P. iii92.
5. Блинова Е.А., Непомнящих В.М., Леонова М.И., Демина Д.В., Кожевников В.С. Пациенты с бронхиальной астмой в период обострения демонстрируют усиление миграции лимфоцитов из тимуса // Вестник Уральской медицинской академической науки тематический выпуск по аллергологии и иммунологии. - 2010. - № 2/1 (29). - С. 98-99.
6. Блинова Е.А., Борисов В.И., Непомнящих В.М., Сизиков А.Э., Кожевников В.С. Интенсивность тимопоэза при иммунопатологии // Медицинская иммунология. - 2011. - Т. 13. - № 4-5. - С. 360-361.
7. Блинова Е.А., Борисов В.И., Непомнящих В.М., Кожевников В.С. Количество ТРЭК в Т-лимфоцитах при иммунопатологии // Вестник Уральской медицинской академической науки тематический выпуск по аллергологии и иммунологии. - 2011. - № 2/1 (35). - С. 102-103.
8. Блинова Е.А., Борисов В.И., Кожевников В.С. Количество ТРЭК в норме и при иммунопатологических заболеваниях // Материалы 8-ой отчетной конференции НИИКИ СО РАМН, 2011. - С. 12-15.
9. Блинова Е.А., Непомнящих В.М., Кожевников В.С. Интенсивность тимопоэза у пациентов с бронхиальной астмой в зависимости от длительности заболевания // Медицинская иммунология. - 2012. - Т. 14. - № 1-2. - С. 163-168.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
