Клинико-морфологическая характеристика вариантов медуллярного рака молочной железы - Автореферат

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» на кафедре патологической анатомии с секционным курсом Защита состоится «___» ___________ 2011 года в ___ часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.117.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» На сегодняшний день существует 3 классификационные схемы медуллярного рака молочной железы (МРМЖ): Ridolfi R.L. et al. Задачи исследования: 1.Выделить признаки, позволяющие идентифицировать медуллярный рак молочной железы, определить удельный вес этой группы карциномы и ее гистологических вариантов в операционных материалах, относящихся к раку молочной железы.

По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них - 2 - в рецензируемых научных журналах, определенных перечнем Высшей аттестационной комиссии.

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материал изложен на 135 страницах, иллюстрирован 48 рисунками, 27 таблицами, 6 диаграммами, 1 схемой. В указателе литературы приведено 123 источников (14 отечественных и 109 зарубежных публикаций).

Содержание работы

Материалы и методы исследования. Основой проведенной работы являлось ретроспективное клинико-морфологическое изучение 100 наблюдений вариантов медуллярного рака молочной железы. При формировании объектов исследования мы базировались на учете первичного патоморфологического заключения о наличии у пациенток МР этого органа. Включение в группы исследования мы проводили при выявлении в раке МЖ следующих признаков: 1) четко очерченный опухолевый край или формирование псевдокапсулы;

2) наличие среди опухолевой ткани структур синцитиального роста из недифференцированных раковых клеток с выраженными признаками атипии и полиморфизма на 2 и 3 балла по системе Elston C.W. and Ellis I.O. (1991) и высокой митотической активностью;

3) наличие различной степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

Критериями исключения из МРМЖ являлись: 1) выявление большого количества фокусов инфильтрирующего роста раковой паренхимы на границе с окружающими тканями;

2) отсутствие выраженной ядерной и клеточной атипии в паренхиматозных опухолевых клетках, а также лимфоидной инфильтрации стромы.

На основании указанных выше признаков из исследованной группы нами было исключено 7 случаев рака МЖ с первичным патогистологическим заключением «Медуллярный рак молочной железы».

Оперативное лечение по поводу МРМЖ в 77 наблюдениях было проведено в областном онкологическом диспансере №2 (г. Магнитогорск) с 1993 по 2009 гг. За этот период в данном лечебном учреждении хирургическое лечение с установленным диагнозом «рак МЖ» получило 2719 женщин. Кроме того, нами исследованы операционные материалы, относящиеся к МРМЖ у пациенток, обследованных и прооперированных в областном онкологическом диспансере №1 (г. Челябинск) с 2002 по 2005 гг.

При ретроспективном анализе в группу типичного медуллярного рака (ТМР) включались только опухоли, удовлетворяющие сразу всем трем классификационным схемам за исключением одного из признаков схемы Pedersen L. et al. (1991) - редкие некрозы опухолевой ткани (менее 25%), так как он противоречил классификации Ridolfi R.L. et al. (1977), в которой обширные некрозы опухолевой паренхимы рассматриваются как один из признаков типичной медуллярной карциномы (Ridolfi R.L. et al., 1977) (20 женщин). К группе ИПР с мед. пр. относились все случаи, в которых наряду с синцитиальной гистоархитектурой опухоли определялись хорошо различимые фокусы инвазивной протоковой карциномы независимо от содержания процентной доли синцитиальных структур (54 больных). К атипичной медуллярной карциноме были отнесены все оставшиеся новообразования, которые по классификации Ridolfi R.L. et al. (1977) могли быть отнесены к типичному варианту МР, но изза наличия единичных железистых структур, согласно критериям схем Wargotz E.S, et al. (1988) и Pedersen L. et al. (1991), были из этой группы исключены. Также в группу атипичного медуллярного рака (АМР) были переведены пациентки, опухоли которых имели строение, характерное для ТМР, но в регионарных лимфатических узлах (ЛУ) были выявлены метастазы (Reinfuss M., Stelmach A. et al., 1995) (всего 26 случаев).

У 72 женщин, прооперированных в онкологическом диспансере г. Магнитогорска, были доступны для изучения амбулаторные карты и карты стационарного больного, на основании которых проанализированы данные ультразвукового исследования МЖ, маммографии, цитологического исследования, трепанбиопсии МЖ; оценены объемы проведенных оперативных вмешательств, химиолучевого и гормонального лечения. В остальных случаях (28) были использованы только первичные патогистологические заключения с макро- и микроскопическим описанием.

Кроме обзорной окраски гематоксилином и эозином дополнительно были проведены методики на выявление коллагеновых (по Ван Гизон) и ретикулярных (по Футу) волокон, слизи (реактивом Шиффа после окисления срезов в йодной кислоте, альциановым синим при РН 1,0 и 2,5) и аргирофильных гранул (по Гримелиусу).

В 30 случаях были поставлены иммуногистохимические реакции (ИГХ реакции) с антителами к: c-ERBB-2 онкопротеину (HER2/neo). Интерпретация данных проводилась на основе Герцептеста «Dako» с учетом методических рекомендаций референс-лаборатории по HER2/neo-тестированию на базе патологоанатомического отделения ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росздрава» (Завалишина Л.Э, Франк Г.А., 2008); к рецепторам эстрогена и прогестерона. Выраженность экспрессии оценивалась полуколичественно в подсчете процента положительно окрашенных ядер эпителиальных опухолевых клеток: 0 - нет окрашенных клеток или окрашены единичные клетки, 1 - окрашено менее 30% опухолевых клеток, 2 - окрашено менее 60% опухолевых клеток, 3 - окрашено 60% и более опухолевых клеток; белкам СРР 32, р53 и bcl-2. Степень экспрессии белка р53 и bcl-2 онкопротеина оценивалась полуколичественно: 0 - нет экспрессии, 1 балл - положительное окрашивание 30% и менее эпителиальных опухолевых клеток, 2 балла - положительное окрашивание более 30% и менее 60% опухолевых клеток, 3 балла - положительное окрашивание 60% и более эпителиальных опухолевых клеток. Экспрессия белка СРР 32 (каспазы 3) оценивалась с помощью подсчета процента интенсивно окрашенных злокачественных эпителиальных опухолевых клеток в срезе; к белку Ki-67. Результат оценивался методом подсчета процента положительно окрашенных ядер эпителиальных опухолевых клеток; к CD 34; к CD 20 и CD 3; виментину; к Хромогранину А; к цитокератину (ЦК) 7; к ЦК с высокой молекулярной массой (клон 34ВЕ12, «Dako», Дания); к ЦК 8; к ЦК 17; к ЦК 18; к ЭМА; к S-100 протеину; к CD 99. Степень экспрессии эпителиальными опухолевыми клетками ЦК, виментина, S-100 протеина, нейрон специфической энолазы, ЭМА и CD 99 оценивалась полуколичественным методом (в баллах): 0 - нет окрашенных клеток или окрашены единичные клетки, 1 - окрашено менее 30% опухолевых клеток, 2 - окрашено менее 60% опухолевых клеток, 3 - окрашено 60% и более опухолевых клеток. Все ИГХ исследования были проведены на архивных кусочках тканей, фиксированных в нейтральном формалине (РН=7,0-7,2) и залитых в гомогенизированную парафиновую среду «Histomix Plus».

Степень мукоидного набухания опухолевой стромы оценивалась полуколичественно (в баллах) на срезах, окрашенных с использованием ШИК-реакции, альцианового синего при РН=1,0 и РН=2,5 : 1 - минимальная степень, 2 - умеренная, 3 - выраженная.

Выраженность лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы также верифицирована полуколичественным методом (в баллах): 1 - единичные рассеянные лимфоциты, 2 - рассеянная хорошо выраженная лимфоидная инфильтрация, распределяющаяся в строме опухолевого узла неравномерно, 3 - густая диффузная лимфоидная инфильтрация во всех исследованных участках опухолевого узла.

Пролиферативная активность эпителиальных опухолевых клеток, кроме использования ИГХ реакции с антителами к Ki 67, параллельно оценивалась методом подсчета количества митозов в 10 полях зрения в различных отделах опухолевого узла на обзорной окраске гематоксилином и эозином (увеличение х400, диаметр поля зрения 0,59 мм). Так как размеры опухолевых клеток в сравниваемых группах варьировали, и на 1 поле зрения при увеличении микроскопа х400 в изучаемых опухолях приходилось разное количество опухолевых клеток, также на обзорной окраске гематоксилином и эозином при увеличении микроскопа х400 подсчитывалось количество митозов, приходящееся на 1000 паренхиматозных опухолевых клеток (митотический индекс).

Степень полиморфизма и атипии ядер опухолевых клеток изучалась полуколичественным методом (в баллах) по критериям Elston-Ellis (1991).

Методом точечного счета (Автандилов Г.Г., 2002) была определена относительная доля опухолевой стромы на препаратах окрашенных по Футу при увеличении микроскопа х400. При окраске по методу Ван Гизон опухолевая строма в ТМР плохо визуализировалась.

Площадь некроза опухолевой паренхимы оценивалась полуколичественным методом (в баллах) на обзорной окраске гематоксилином и эозином при увеличении микроскопа х100: 0 - менее 5% площади исследованных участков опухоли, 1 - более 5% и менее 15% площади исследованных участков, 2 - более 15% и менее 25% площади исследованных участков опухоли, 3 - более 25% площади исследованных участков опухолевой ткани.

Для выявления сосудов микроциркуляторного русла (МЦР) была проведена иммуногистохимическая реакция с антителами к CD 34 («LABVISION Corporation», США). В каждом случае при увеличении микроскопа х400 методом точечного счета (Автандилов Г.Г., 2002) была определена относительная доля сосудов МЦР на участке опухолевой ткани площадью 0,274 мм2. Параллельно с этим в тех же полях зрения была подсчитана суммарная длина сосудов МЦР с использованием окуляр-микрометра при увеличении микроскопа х400 (Автандилов Г. Г., 2002). Дополнительно в этих же срезах при увеличении микроскопа х400 также было подсчитано количество пересеченных сосудов МЦР.

Статистический анализ полученных данных включал использование метода вариационной статистики с использованием критерия t (Стьюдента) для малых выборок (n<30) (Ефимова М.Р., Петрова Е.В., Румянцев В.Н., 2009). При проведении статистического исследования использованы программы Microsoft Excel 2002 пакета Microsoft Office XP. Для измеряемых показателей - процент Ki 67 положительных опухолевых клеток, количество митозов в поле зрения, митотический индекс, удельная доля сосудов микроциркуляторного русла (МЦР) в срезе опухолевой ткани, суммарная длина сосудов МЦР и количество пересеченных сосудов МЦР в срезе опухолевой ткани, процент СРР 32 - положительно окрашенных раковых клеток рассчитывались средняя арифметическая, ошибка средней арифметической, определялась ошибка репрезентативности разности средних арифметических.

Результаты исследований и их обсужение

Возраст пациенток с ТМР, АМР и ИПР с мед. пр. колебался от 29 до 73 лет (среднее значение 52,3±6,3 года), от 32 до 78 лет (51,5±8 лет) и от 31 до 84 лет (55,2±4 года) соответственно. Возрастной диапазон пациенток с ТМР был несколько моложе, чем у женщин с АМР и с ИПР мед. пр. Средний размер новообразования у этих трех групп опухолей был 3,5 см, 3,8 см и 3,5 см соответственно. Максимальное количество больных с МРМЖ приходилось на возрастные диапазоны 40-49 лет (29%) и 50-59 лет (28%). Для ТМР и ИПР с мед. пр. возрастной пик приходился на период 50-59 лет, для АМР - на 40-49 лет. У 38 женщин из 100 было выявлено метастатическое поражение регионарных лимфатических узлов и у 7 - распространение опухолевого роста на кожу с ее изъязвлением. Количество метастазов в ЛУ варьировало от 1 до 10. Группа N1 (определялось поражение трех и менее ЛУ) представлена 14 пациентками с АМР и 13 случаями ИПР с мед. пр., составляет 27% от всех наблюдений МРМЖ. Группа N2 (выявлено поражение 5 и более ЛУ, но не больше 10) представлена только 11 больными с ИПР с мед. пр, составляет 11% среди всех случаев МРМЖ.

Таблица 1. Распределение пациенток с различными вариантами медуллярного рака по клиническим стадиям.

Варианты МРМЖ 1 ст 2а ст 2б ст 3а ст 3б ст

ТМР 3 14 3 0 0

АМР 3 11 10 0 2

ИПР с мед. пр. 11 23 6 9 5

Всего 17 48 19 9 7

МРМЖ у пациенток с 1-ой и 2-ой клиническими стадиями опухолевого процесса в сумме составил 84%. ТМР регистрировался только в 1-ой и 2-ой (2а и 2б) клинических стадиях, при этом на 2-ую стадию в группе ТМР приходилось 85%. У женщин с АМР диагностированы 1-ая, 2-ая (2а и 2б) и 3б клинические стадии, при этом сумма 1-ой и 2-ой клинических стадий в этой группе была равна 92,3%. ИПР с мед. пр. регистрировался во всех стадиях. 1-ая и 2-ая (2а и 2б) клинические стадии в группе ИПР с мед. пр. составили 74,1%.

Таблица 2. Анализ объема оперативного вмешательства у пациенток с различными вариантами медуллярного рака, n=87.

Варианты МРМЖ Радикальная резекция МЖ Мастэктомия по Маддену Мастэктомия по Пейти Мастэктомия по Пирогову Санитарная ампутация МЖ Секторальная резекция или квадрант-эктомия

ТМР 8 6 2 0 0 1

АМР 2 6 7 1 0 1

ИПР с мед.пр. 17 11 22 0 1 2

Всего 27 23 31 1 1 4

Радикальные мастэктомии проведены у 55 женщин и составляют большинство в группах АМР и ИПР с мед. пр. В группе ТМР мастэктомия и радикальная резекция МЖ составили равное количество случаев. Паллиативные хирургические операции выполнены в каждой исследованной группе: по одной в группах ТМР и АМР и 3 в случаях ИПР с мед. пр.

Наибольшему количеству пациенток (42 случая из 72-х/58,3%) кроме локорегионального воздействия (операция, лучевое лечение) была проведена системная ПХТ (см табл. 3). При этом в группах АМР и ИПР с мед. пр. этот вид лечения преобладал. Максимальное число адъювантной ПХТ проведено в группе ИПР с мед. пр. - 28 человек, что в этой группе составляет 66,7%. В группе ТМР 5-ти женщинам (33% в группе) было проведено только локорегиональное воздействие в объеме оперативного и лучевого лечения и 5 больных получило системную ПХТ. Тамоксифен был назначен 14 пациенткам без учета рецепторного статуса опухоли.

Таблица 3. Анализ объема проведенного лечения у пациенток с различными вариантами медуллярного рака, n=72.

Варианты МРМЖ Операция, ПХТ, гамма-терапия Операция, ПХТ Операция, гамма-терапия Только операция Операция, тамоксифен Операция, гамма-терапия, тамоксифен

ТМР 3 2 5 0 2 3

АМР 6 3 1 2 2 1

ИПР с мед.пр. 24 4 7 1 2 4

Всего 33 9 13 3 6 8

Адъювантная ПХТ в 30 случаях была проведена по схеме CAF (доксорубицин 30мг/м2, циклофосфан 100мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2), в 8 - по схеме FAC (доксорубицин 50мг/м2, циклофосфан 500мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2) и в 4 - по схеме CMF (метотрексат 40мг/м2, циклофосфан 100мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2). Предоперационный курс дистанционной гамма-терапии в традиционном режиме на МЖ и зоны регионального метастазирования СОД 44 Гр получили 4 женщины. 39 больным был проведен послеоперационный курс дистанционной гамма-терапии в режиме традиционного фракционирования на МЖ 44 Гр и/или локально на постоперационный рубец до 50 Гр и в 11 случаях - на область рубца 50 Гр и пути лимфооттока до СОД 44 Гр.

При морфологическом исследовании операционных материалов во всех наблюдениях МРМЖ опухолевый узел характеризовался относительно четкими контурами, диаметр новообразования колебался от 0,8 см до 12 см, консистенция опухоли варьировала от мягкой до плотной. Во всех случаях в строме неоплазмы определялась лимфоидная инфильтрация различной степени выраженности. Микроскопически паренхиматозные опухолевые клетки в большинстве случаев характеризовались преобладающим синцитиальным характером роста, высокой пролиферативной активностью, выраженным ядерным и клеточным полиморфизмом.

Таблица 4 Макроскопический анализ вариантов медуллярного рака.

Вариант рака Признак ТМР n=20 АМР n=26 ИПР с мед. пр., n=54

Четкий опухолевый край 100% 88,5% 64,8%

Средний диаметр узла 3,5 см 3,8 см 3,5 см

Консистенция: Мягкая Эластичная плотная 75% 10% 15% 38,5% 3,8% 57,7% 1,1% 11,1% 85,2%

Распространение на кожу 0 7,7% 9,3%

Наиболее часто поражаемый квадрант МЖ верхнена- ружный верхнена- ружный верхнена- ружный

Количество случаев с метастазами 0 53,8% 44,4%

Частота первично множественного или мультицентричного роста 5% 3,8% 20,4%

При анализе характера макроскопического исследования всех трех изученных вариантов МРМЖ нельзя было выделить достоверных макропризнаков, позволяющих дифференцировать эти опухоли между собой. Тем не менее, ТМР чаще других характеризовался как четко отграниченная опухоль мягкой консистенции без распространения на кожу и без метастазов в региональные лимфатические узлы (таблица 4). ИПР с мед. пр. наиболее часто имел нечеткий опухолевый край, плотную консистенцию, множественный или мультицентричный рост и чаще распространялся на кожу. АМР почти по всем показателям занимал промежуточное положение за исключением частоты выявления метастазов в региональных ЛУ (чаще всех) и первично множественного или мультицентричного характера роста (меньше всех). По характеру метастазирования и распространения на кожу АМР был схож с ИПР с мед. пр., по другим показателям он ближе находился к ТМР.

При микроскопическом исследовании более четко проявились различия между ТМР и ИПР с мед. пр. Это касалось и характера роста, и степени атипии и полиморфизма опухолевых клеток, и площади некрозов опухолевой паренхимы и степени лимфоидной инфильтрации стромы (таблица 5). АМР по всем сравниваемым показателям занимал промежуточное положение, но различия между ТМР и АМР были невелики, поэтому в ряде случаев их трудно было дифференцировать между собой.

Таблица 5 Микроскопический анализ вариантов медуллярного рака.

Вариант рака Признак ТМР n=20 АМР n=26 ИПР с мед. пр. n=54

Синцитиальный характер роста 100% не менее 90% от 30% до 90%

Единичные железистые структуры нет да да Наличие фокусов плоскоклеточной дифференцировки может быть может быть может быть

Наличие муцина в опухолевых клетках нет может быть может быть

Определяемые фокусы роста инфильтрирующего протокового рака обычной гистоструктуры нет нет да Лимфоидная инфильтрация: 1 балл 2 балла 3 балла 10% 65% 25% 34,6% 57,7% 7,7% 44,5% 33,3% 22,2%

Атипия опухолевых клеток: 1 балл 2 балла 3 балла 0 10% 90% 0 19,2% 80,8% 0 31,5% 68,5%

Полиморфизм опухолевых клеток: 1 балл 2 балла 3 балла 0 10% 90% 0 61,5% 38,5% 5,6% 61,1% 33,3%

Площадь некрозов опухолевых клеток: 0 1 балл 2 балла 3 балла 0 5% 10% 85% 0 30,8% 7,7% 61,5% 33,3% 38,9% 16,7% 11,1%

Все исследованные опухоли имели отрицательную реакцию с антителами к Хромогранину А и отрицательный результат при окраске опухолевых клеток по Гримелиусу.

При анализе атипии и полиморфизма опухолевых клеток обращало внимание, что раковые клетки АМР и ИПР с мед. пр. при относительно высокой степени атипии были значительно менее полиморфны, чем паренхиматозные клетки ТМР. В отличие от ТМР в АМР и ИПР с мед. пр. опухолевые клетки в синцитиальных пластах местами лежали рыхло с образованием щелей и формированием железисто-подобных структур.

Какой либо заметной разницы в степени мукоидного набухания опухолевой стромы между исследованными группами не выявлено. Можно говорить лишь о том, что в ТМР оно идет за счет преимущественного накопления (оценка на 2 и 3 балла) нейтральных мукополисахаридов и сильно-кислых сульфатированных гликозаминогликанов и в меньшей степени (оценка на 1 и 2 балла) слабокислых сульфатированных гликозаминогликанов и сиалогликопротеинов. В АМР - за счет всех вариантов мукополисахаридов. В ИПР с мед. пр. также за счет нейтральных мукополисахаридов и сильно-кислых сульфатированных гликозаминогликанов и в несколько меньшей степени слабокислых сульфатированных гликозаминогликанов и сиалогликопротеинов.

Таблица 6 Анализ пролиферативной активности опухолевых клеток и степени экспрессии ими каспазы 3 в различных вариантах медуллярного рака.

Вариант рака Признак ТМР n=20 АМР n=26 ИПР с мед. пр. n=54

Количество митозов в поле зрения d=0,59 мм 8±2,77 6±1,4 5,33±1,04

Митотический индекс 32±8,38 26±20,41 23,05±9,37

Ki 67 73%±10,01% 66,3%±29,56% 43,28%±10,33% *

Экспрессия каспазы 3 13,5%±5,7% 20,7%±9,41% 26% ± 13,25%

Примечание. * - достоверность р<0,001, в сравнении с группой ТМР.

При сравнении показателей пролиферативной активности, как видно из таблицы 6, самый высокий уровень по всем трем показателям выявлен в ТМР, наименьший - в ИПР с мед. пр. По всем показателям пролиферативной активности ТМР превышал ИПР с мед. пр. А по проценту Ki-67 - положительных эпителиальных опухолевых клеток эти различия были статистически значимыми. АМР по всем исследованным признакам строго занимал промежуточное положение. Различия между АМР и другими исследованными вариантами МРМЖ были статистически не достоверны. Обращает внимание широкий доверительный интервал в группе АМР по показателям Ki 67 и митотическому индексу, что указывает на большую вариабельность исследованного признака в группе.

При анализе экспрессии раковыми клетками каспазы 3 выявлена тенденция увеличения среднего значения процента интенсивно окрашенных эпителиальных опухолевых клеток от ТМР к АМР и к ИПР с мед. пр. При сопоставлении результатов пролиферативной активности опухолевых клеток вариантов МРМЖ и уровня экспрессии ими каспазы 3 можно предположить, что типичная медуллярная карцинома по темпу роста и скорости увеличения опухолевой массы значительно опережает ИПР с мед. пр.

Таблица 7 Сравнительный анализ плотности сосудов микроциркуляторного русла в различных вариантах медуллярного рака.

Вариант рака Признак ТМР n=20 АМР n=26 ИПР с мед. пр. n=54

Относительная доля сосудов МЦР на участке опухолевой ткани S=0,274 мм2 6,66%±3,06 7,85%±2,94 8,94%±2,15

Суммарная длина сосудов МЦР на участке опухолевой ткани S=0,274 мм2 0,428мм±0,206 0,541мм±0,14 0,615мм±0,105

Количество пересеченных сосудов в поле зрения d=0,59 мм 4±1,34 6±1,56 10,5±2,1 *

Примечание. * - достоверность р<0,05, в сравнении с группой ТМР.

Как видно из таблицы 7 по всем трем показателям, отражающим степень развития сосудов МЦР, ТМР уступал АМР и ИПР с мед. пр. При этом при исследовании каждого признака выявлялась тенденция увеличения степени развития сосудов МЦР от ТМР к АМР и к ИПР с мед. пр.

Относительная доля опухолевой стромы в ТМР составила 22,8%±6,93, в АМР - 32,4%±9,66, в ИПР с мед. пр. - 39,5%±9,9, при этом различие показателей между ТМР и ИПР с мед. пр. было статистически значимым (р<0,001). При сравнении показателей относительной доли опухолевой стромы отчетливо выявлялась тенденция увеличения относительной доли опухолевой стромы от ТМР к АМР и к ИПР с мед. пр.

Таблица 8 Сравнительный анализ экспрессии цитокератинов в различных вариантах медуллярного рака.

ЦК Баллы экспрессия ЦК простых эпителиев экспрессия ЦК 17 экспрессия ЦК плоских эпителиев

ТМР n=10 АМР n=5 ИПР с мед. пр. n=10 ТМР n=6 АМР n=2 ИПР с мед. пр. n=9 ТМР n=10 АМР n=5 ИПР с мед. пр. n=10

Отрицательная реакция 10% 0 0 33% 0 67% 0 0 0

1 балл 30% 20% 10% 67% 100% 33% 20% 40% 30%

2 балла 50% 60% 50% 0 0 0 80% 60% 60%

3 балла 10% 20% 40% 0 0 0 0 0 10%

При изучении цитокератинового профиля во всех вариантах МРМЖ выявлялась одновременная экспрессия ЦК как простых, так и плоских эпителиев. При этом в ИПР с мед. пр. несколько интенсивнее экспрессировались ЦК простых эпителиев, чем в ТМР.

Во всех исследованных опухолях определялся высокий уровень коэкспрессии раковыми клетками синцитиальных структур виментина, максимально выраженный в группе ТМР (90%), минимально - в ИПР с мед. пр. (59%), в АМР положительная реакция к виментину была выявлена в 80% исследованных случаев. При этом клетки синцитиального компонента были негативны к РЭ и РП, белку HER2/neo, достаточно часто (в 50% проведенных реакций) экспрессировали р53 и в единичных случаях были положительны к bcl-2 онкопротеину.

В ИПР с мед. пр. в отличие от ТМР и АМР в 30% исследованных случаев часть опухолевых клеток была положительна к РЭ и/или РП, выявлялись опухоли с гиперэкспрессией белка HER2/neo. Также в группе ИПР с мед. пр. заметно выше была частота экспрессии CD 99 (65%) и несколько реже наблюдалась экспрессия NSE (40%). Положительная реакция в паренхиматозных опухолевых клетках к ЭМА определялась во всех исследованных вариантах МРМЖ.

Заключение. Частота выявления МР среди всех карцином молочной железы по данным зарубежных авторов варьирует от 1% до 10% (Bloom H.J., Richardson W.W., 1970; Rapin V., Contesso G. et al., 1988; Rosen P.P., Oberman H.A., 1993; Cook D.L., Weaver D.L., 1995). По операционным материалам крупного промышленного города удельная доля МР с лимфоидной стромой (МКБ-О), выделенного на основе предложенных нами критериев, составила 2,83% среди всех удаленных карцином молочной железы. При этом типичный его вариант верифицирован в 0,62%, атипичный - в 0,59%, ИПР с мед.пр. - в 1,62%.

Присутствие в опухолевой ткани структур, характеризующих синцитиальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью, объединяет эти варианты между собой и придает им схожие морфологические особенности: четко очерченный опухолевый край и наличие лимфоидной инфильтрации стромы. Во всех проведенных ИГХ исследованиях данные опухолевые клетки в различных вариантах МР экспрессировали ЦК простых, плоских эпителиев, имели высокий уровень коэкспрессии виментина, часто (до 50%) были положительны к белку р53 и в 100% исследованных случаев были негативны к РЭ и РП. Именно одновременная экспрессия ЦК простых, плоских эпителиев и виментина отличает их от эпителиальных клеток инфильтрирующего протокового рака обычной гистоструктуры, которые, как правило, экспрессируют только ЦК простого эпителия (Ермилова В.Д., Петров С.В., 2004; Ellis O., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003). Учитывая высокий уровень коэкспрессии раковыми клетками МРМЖ виментина, можно предполагать, что положительная реакция к ЦК с высокой молекулярной массой (смесь ЦК 1,5,10,14) отражает не плоскоклеточную дифференцировку в опухолевых клетках, а положительную реакцию к ЦК, характеризующим миоэпителий. Таким образом, в эпителиальной опухолевой клетке данной группы новообразований выявляются ИГХ признаки, как простого выстилающего эпителия, так и миоэпителия. Tot T. (2002) в своей работе отметил, что в различных вариантах МРМЖ определяется положительная реакция к ЦК 5-6, типичным для миоэпителиальных клеток. С нашей точки зрения, учитывая слабую степень экспрессии ЦК 17 (на 1 балл) и высокую степень - виментина (на 2 и 3 балла), данный тип недифференцированных опухолевых клеток относится к варианту опухолевой трансформации стволовой клетки мелких концевых проточков дольки, которая сочетает в себе признаки железистой и миоэпителиальной дифференцировки. Бельгийские авторы (Larsimont D., Lespagnard L. et al., 1994) также высказали суждение, что гистогенез клеток МРМЖ связан с клеткой-предшественницей терминального протока дольковой единицы.

Во всех исследованных случаях ТМР был на всем протяжении представлен вышеописанными не продуцирующими слизь раковыми клетками, имел скудную строму, низкую степень развития сосудов микроциркуляторного русла и чаще всего - выраженную лимфоплазмоцитарную инфильтрацию.

Морфологическая схожесть типичного и атипичного вариантов МР обусловлена тем, что АМР на большем протяжении (на 90%) представлен структурами ТМР, и мы не выявили какого-либо значимого гистохимического и иммуногистохимического признака, позволяющего дифференцировать между собой эти варианты МРМЖ. Только обнаружение пула раковых клеток с морфологически различимой железистой дифференцировкой, которые в ряде случаев могут иметь гистохимические признаки слизеобразования, позволяет диагностировать атипичный вариант МР. Вторым критерием, позволяющим дифференцировать между собой ТМР и АМР - это наличие метастазов в регионарных ЛУ, которые в нашем исследовании были представлены солидными и железистыми структурами протокового рака. Ни в одном случае нами не было зарегистрировано поражение метастазами рака более 2-х региональных ЛУ. Едва различимые отличия раковой паренхимы АМР от ТМР сопровождаются изменением опухолевой стромы, которое проявляется в уменьшении степени выраженности лимфоидной инфильтрации, увеличении в строме количества коллагеновых волокон и сосудов МЦР, при этом площадь некроза и митотический потенциал раковых клеток также снижаются.

ИПР с мед. пр. наряду со структурами типичной медуллярной карциномы содержал хорошо различимые фокусы опухолевых клеток с железистой дифференцировкой, имеющие черты строения инвазивного протокового рака. Удельный вес синцитиальной гистоархитектуры раковых клеток в ИПР с мед. пр. в большинстве случаев преобладал. В этом варианте МР четко прослежена разнородность опухолевых клеток: наряду с недифференцированными раковыми клетками, экспрессирующими ЦК простых, плоских эпителиев и виментин, определялись участки железистого роста, в которых эпителиальные клетки неоплазмы экспрессировали только ЦК простого эпителия. В ряде случаев часть опухолевых клеток экспрессировала РЭ и/или РП, выявлялись опухоли с гиперэкспрессией белка HER2/neo. В этом варианте МРМЖ отмечались случаи с метастатическим поражением до 10 региональных ЛУ, при чем метастазы в большинстве таких наблюдений имели железистый характер строения. Изменения стромы характеризовались значительным увеличением количества коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла при еще большем, чем в АМР снижении степени лимфоидной инфильтрации стромы, очагов некроза опухолевой ткани.

В результате проведенного анализа медицинской документации в группе ТМР выявлен самый высокий уровень 5-летней (100%), 10-летней (85,7%) и 15-летеней (75%) безрецидивной выживаемости. При этом он не зависел от объема проведенного оперативного лечения. В ТМР выявлен сравнительно низкий уровень развития сосудов микроциркуляторного русла стромы в сравнении с ИПР с мед. пр. Несмотря на то, что в работах некоторых исследователей (Guidi A.J., Berry D.A., Broadwater G. et al., 2002) не выявлена связь между агрессивным поведением рака молочной железы и степенью развития сосудов микроциркуляторного русла в его строме, в нашем исследовании низкий удельный вес сосудов микроциркуляторного русла в строме ТМР может объяснить его благоприятное клиническое поведение и причину распространенных некрозов опухолевой паренхимы, делая их одним из характерных морфологических признаков ТМР.

У пациенток с ИПР с мед. пр. показатели безрецидивной выживаемости значительно ниже, но в целом они соответствуют уровню безрецидивной выживаемости, характеризующей инфильтрирующий протоковый рак Grade 3 (Zambetti M. et al., 1992). Только в этой группе были зарегистрированы локальные рецидивы опухолевого роста у 2-х пациенток через 2 года после проведенного комплексного лечения.

Больные с АМР имели относительно высокий уровень безрецидивной выживаемости (85%, 83% и 66% соответственно), но несколько меньший, чем в группе ТМР, и занимали промежуточное положение по данному показателю между пациентами с ТМР и с ИПР с мед. пр. Высокий уровень безрецидивной выживаемости в группе АМР по сравнению с ИПР с мед. пр. можно объяснить тем, что пул клеток с железистой дифференцировкой, способных к метастазированию, здесь очень мал, поэтому безрецидивная выживаемость в этой группе близка к таковой при 1-ой клинической стадии инфильтрирующего протокового рака (Rosen P.P. et al., 1993).

Такие неблагоприятные прогностические факторы для рака МЖ как: отсутствие экспрессии bcl-2, р53-позитивность, отрицательная реакция с антителами к рецепторам стероидных гормонов (РЭ и РП) и высокий уровень пролиферации (Ермилова В.Д., Петров С.В., 2004, Ellis O., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003) в нашем исследовании достаточно часто выявлялись во всех группах МР. Но только в группе ИПР с мед. пр. они коррелировали с низким уровнем 5-летней безрецидивной выживаемости. При этом степень их выраженности уменьшалась от ТМР к АМР и к ИПР с мед. пр. Таким образом, отсутствие экспрессии bcl-2, р53-позитивность, отрицательная реакция с антителами к рецепторам стероидных гормонов (РЭ и РП) и высокий уровень пролиферации - это характерные признаки ТМР, но в этой опухоли они не оказывают существенного влияния на прогноз заболевания.

Для создания регистра и полного учета различных морфологических вариантов рака МЖ необходимо применять систему идентификации и кодирования новообразований. Полная идентификация вариантов МР с учетом требований МКБ-Х (1995), МКБ-О (1995) и международной гистологической классификации опухолей молочной железы (2003) выражается 10-ю знаками и предусматривает учет топографии новообразования (4 знака); морфологического типа (4 знака); характера опухоли (1 знак) и гистологической градации или степени дифференцировки опухоли (1 знак).

По топографии вариантов МРМЖ указывается трехзначная рубрика - С50 2-го класса МКБ-Х, а после точки - четвертый знак с учетом более точной локализации процесса, изменяющийся от 0 до 9. По морфологическому типу МР по МКБ-О кодируется как медуллярный рак с лимфоидной стромой - М 8512 (считаем, что сюда целесообразно включать типичный и атипичный варианты МР), а ИПР с мед. пр. - М 8521. После «косой» черты указывается следующий знак - «3» (злокачественная опухоль, первичный очаг). Гистологическая градация или степень дифференцировки кодируется 10-ым знаком (МКБ-О). При ИПР с мед. пр. необходимо использовать код «3» (слабо дифференцированная опухоль), при ТМР - «4» (недифференцированная, анапластическая опухоль), при атипичном варианте МР - «3».

Уровень безрецидивной выживаемости - один из важных клинических признаков, характеризующих биологическое поведение опухоли. Основное морфологическое различие между вариантами МРМЖ проявлялось в изменении соотношения между синцитиальным компонентом и участками железистого роста. Увеличение структур железистого роста сопровождалось усилением метастазирования МР. При гистологическом исследовании было выявлено, что чем меньше синцитиального компонента из недифференцированных раковых клеток, тем менее выражена лимфоидная инфильтрация и площадь некроза раковой паренхимы и более развита коллагеновая строма с большей удельной долей сосудов МЦР. При этом по всем исследованным признаками АМР рак занимал промежуточное положение между ТМР и ИПР с мед.

С позиций морфогенеза опухоли, имеющего стадийный характер (Foulds L., 1954), где в ходе опухолевой прогрессии может происходить ее клональная эволюция (Пальцев М.А., Иванов А.А., 1995) c появлением новых клонов клеток, имеющих более выраженные способности к инвазивному росту, метастазированию, с появлением другой чувствительности к гормонам и «антигенной невидимости». По теории опухолевой прогрессии начальная фаза стадии инвазивного роста характеризуется в первую очередь ослаблением контактов между клетками, появлением развитой сосудистой сети и стромы, что было прослежено на нашем материале от ТМР к АМР и к ИПР с мед. пр. При этом в ИПР с мед. пр. выявлена разнородность опухолевых клеток по характеру экспрессии ЦК. Анализируя полученные данные, нарастание степени выраженности отличий при одновременном уменьшении содержания синцитиального компонента от ТМР к атипичному варианту и ИПР с мед. пр. отражает опухолевую прогрессию МРМЖ, проявляющуюся переходом от моноклоновости к поликлоновости с нарастанием степени злокачественности в виде увеличения инвазивного и метастатического потенциала раковых клеток, изменения их гормональной чувствительности.

Анализируя уровни безрецидивной выживаемости и проведенные объемы оперативного лечения при ТМР, АМР и ИПР с мед. пр., можно сделать вывод, что при расширении объема оперативного вмешательства от радикальной резекции МЖ до радикальных мастэктомий в случаях типичного варианта МР отдаленные результаты не улучшаются. Учитывая данное обстоятельство, считаем обоснованным расширить показания к применению органосохраняющих операций, типа радикальной резекции МЖ, при типичном варианте МРМЖ. АМР в нашем исследовании показал несколько меньший, но сравнительно высокий уровень 5-ти, 10-ти и 15-летней безрецидивной выживаемости. В связи с отсутствием в группе АМР пациенток с радикальной резекцией МЖ, оценить отдаленные результаты с данным объемом мы не смогли. Считаем, что АМР требует индивидуального подхода при выборе лечения, так как отрицательная реакция к РЭ/РП, высокая митотическая активность, положительная реакция к белку р53 и отрицательная к bcl2-онкопротеину не являются неблагоприятными прогностическими факторами в этом варианте рака МЖ.

Выводы

1.Удельная доля медуллярного рака среди всех карцином молочной железы у жительниц г. Магнитогорска составила 2,83%, при этом типичный вариант медуллярного рака с лимфоидной стромой верифицирован в 0,62%, атипичный вариант - в 0,59 %, инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками - в 1,62%.

2.Ведущими критериями клинико-морфологической диагностики медуллярного рака молочной железы являются следующие признаки: - четко очерченный опухолевый край;

- наличие структур, характеризующих синцитиальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью;

- различная степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

3.Паренхиматозные опухолевые клетки типичного медуллярного рака на всем протяжении имеют синцитиальный рост, характеризуются выраженной ядерной и клеточной атипией с высоким уровнем пролиферации, отсутствием муцина, распространенными некрозами, отрицательной реакцией к рецепторам эстрогена и прогестерона, белку HER2/neo и положительной реакцией к эпителиальному мембранному антигену. Раковые клетки маркируются цитокератинами как простых, так и плоских эпителиев, им