Анализ клинических признаков среди пациентов с подозрением на синдром Элерса–Данлоса. Разработка системы регистрации "нулевых аллелей" в гене COL5A1, молекулярно-генетическое исследование областей экзон-интронных соединений гена COL5A2 в выборке больных.
При низкой оригинальности работы "Клиническое и молекулярно-генетическое исследование классического типа синдрома Элерса-Данлоса", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
У больных, вошедших в выборку для молекулярно-генетического исследования (31 человек), были взяты образцы крови путем венопункции и биопсия кожи. Для выявления изменений нуклеотидной последовательности гена COL5A2 использовался метод SSCP-анализа [Orita и соавт., 1989] с щелочной денатурацией амплифицированных фрагментов КДНК с последующим их электрофорезом в неденатурирующем полиакриламидном геле, окраской геля 1х раствором SYBRA Gold nucleic acid gel stain (INVITROGENEOMOLECULAR PROBESO, США) и регистрацией с помощью документирующей системы GELDOC фирмы BIO-RAD (США) в УФ-излучении. Спектр соединительно-тканной патологии, выявленной в результате клинического обследования, среди всех больных и в выборке для молекулярно-генетического исследования. Первый этап молекулярно-генетического исследования гена COL5A1 заключался в анализе однонуклеотидных полиморфизмов в гене COL5A1 в образцах ДНК пациентов с целью определения гетерозиготного состояния по исследуемому маркеру в генотипе каждого пациента. Для анализа были выбраны 6 полиморфизмов: C1120T (rs3124299 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы PSTI в экзоне 5; G4504А (rs3827848 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы ASUHPI в экзоне 52; G4864C (rs3811146 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы Bsc4I в экзоне 58; С5652Т (rs2229817 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы STYI в экзоне 65; T5982C (rs13946 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы BSTENII в экзоне 66 (в 3’-нетранслируемой области, 3’-UTR) и T6166C (rs12722 ), меняющий сайт узнавания для рестриктазы BSTUI в экзоне 66 (в 3’-UTR).Предложенная схема клинического обследования пациентов с подозрением на СЭД с использованием специальной карты и компьютерной базы данных позволяет стандартизировать клиническое обследование, провести дифференциальную диагностику между типами СЭД и избежать гипердиагностики. Разработана система регистрации потери гетерозиготности (гаплонедостаточности) в гене COL5A1 как метод молекулярно-генетической диагностики КТ СЭД.
Вывод
Предложенная схема клинического обследования пациентов с подозрением на СЭД с использованием специальной карты и компьютерной базы данных позволяет стандартизировать клиническое обследование, провести дифференциальную диагностику между типами СЭД и избежать гипердиагностики.
Поиск точковых мутаций в гене COL5A2 при классическом типе СЭД является малоинформативным методом.
Разработана система регистрации потери гетерозиготности (гаплонедостаточности) в гене COL5A1 как метод молекулярно-генетической диагностики КТ СЭД. При использовании трех внутриэкзонных полиморфизмов (C1120T, G4864C и T5982C) общая информативность системы составила 84%. Потеря гетерозиготности была выявлена у 5 пациентов из 4 семей.
Наибольшая информативность метода выявления потери гетерозиготности в гене COL5A1 наблюдается в группе больных с тяжелым вариантом КТ СЭД (в 3 из 6 информативных случаев), характеризующимся выраженной гипермобильностью суставов, гиперрастяжимостью кожи, наличием тонной, бархатистой кожи, множественных атрофичных рубцов и подкожных псевдоопухолей.
Список литературы
Блинникова О.Е., Курникова М.А., Мутовин Г.Р. «Современные представления о синдроме Элерса-Данлоса. Значение молекулярно-генетических исследований (обзор литературы)»// Альманах «Исцеление», вып.5, «Тривола».- Москва. - 2001.- С.154-156
Курникова М.А., Семячкина А.Н., Тверская С.М., Поляков А.В., Блинникова О.Е., Мутовин Г.Р. «Клиническое и молекулярно-генетическое исследование классического типа синдрома Элерса-Данлоса»// Тез.докл.I Всероссийского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии».- Москва.-2002.- С.126-127
Курникова М.А., Семячкина А.Н., Тверская С.М., Поляков А.В., Мутовин Г.Р. «Выявление гаплонедостаточности гена COL5A1 среди пациентов с классическим типом синдрома Элерса-Данлоса»// V Всероссийский конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии»: сборник материалов конгресса. - Москва.-2006.- С.59-60
Kournikova M., Blinnikova O., Semyachkina A., Mutovin G., Tverskaya S., Polyakov A. “Clinical and molecular genetic investigation of the classic type of Ehlers-Danlos syndrome in Russia”// Europ J of Hum Genet. - Vol10, suppl 1.- Abst. Annual meeting of the European Society of Hum.Genet.-Strasbourg.-2002.-P.126
Kournikova M., Blinnikova O., Mutovin G., Semyachkina A., Tverskaya S., Polyakov A. “COL5A1 haploinsufficiency in a patient with the classical form of Ehlers-Danlos syndrome”// Europ J of Hum Genet. - Vol11, suppl 1.- Abst. Annual meeting of the European Society of Hum.Genet.-Birmingham.-2003.-P.97
Kournikova M., Blinnikova O., Semyachkina A., Mutovin G., Tverskaya S., Polyakov A. “COL5A1 haploinsufficiency in Russian patients with classic Ehlers-Danlos syndrome”//Europ J of Hum Genet. - Vol14, suppl 1.- Abst. Annual meeting of the European Society of Hum.Genet.-Amsterdam.-2006.-P.248
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
