Кальцій-залежні механізми оогенезу мишей в нормі та при дії антиоваріальних антитіл - Автореферат

Показано, що антиоваріальні антитіла (антиоваріальна цитотоксична сироватка) дозозалежно впливають на морфоструктуру яєчників самок щурів та їх естральний цикл (Зеленська Т. М., 1965, 1967; Спасокукоцький Ю. А., 1977) Досліджено вплив антиоваріальних антитіл на морфологічні (Вербицкий М.Ш., Гоцуляк Я.Н., 1997; Гоцуляк Я.М., Янчій Р.І., 1999) та електрофізіологічні (Гоцуляк Я.М. і співавт., 1991) особливості ооцитів мишей. Метою дослідження було вивчення участі кальційзалежних механізмів у відновленні мейозу ооцитами мишей на різних стадіях естрального циклу в нормі та при дії антиоваріальних антитіл, що вимагало виконання таких завдань: Размещено на Дослідити здатність ооцитів до відновлення мейозу при їх неферментативному виділенні з фолікулів в залежності від розмірів фолікулів та самих ооцитів, а також від стадії естрального циклу миші. Встановити роль кальцієвих каналів (за допомогою блокатора Са-каналів верапаміла) у відновленні мейозу ооцитами кумулюсно-ооцитарних клітинних комплексів та ооцитами без кумулюсних клітин на різних стадіях естрального циклу миші. Дослідити вплив низької концентрації кальцію в культуральному середовищі на відновлення мейозу ооцитами на стадіях проеструс та еструс І естрального циклу миші при дії г-АОЦС in vitro.Для експериментів вибирали самок: на стадії діеструс - відсаджених від самців; на стадії проеструс; на стадії еструс (І); на стадії еструс (ІІ). Група фолікулів з діаметром 104-193 мкм зіставляється з виділеною нами групою “малі” фолікули; група фолікулів з діаметром 195-303 мкм відповідає “середнім” фолікулам; група фолікулів з діаметром >303 мкм - групі “великі” фолікули на всіх досліджуваних нами стадіях естрального циклу миші. Нами встановлено, що процент ооцитів на стадії “зародкового пухирця” (ЗП ) здатних здійснити перехід на наступну мейотичну стадію “розчиненого зародкового пухирця” (ЗП-) після 2 годин культивування становив 22,2±0,2% (р <0.01) з "малих" фолікулів з яєчника мишей в діеструсі та 28,1±0,2% (р <0.01) з "малих" фолікулів з яєчника мишей в еструсі І, а також - 32,4±0,3% (р <0.01) з "великих" фолікулів з яєчника мишей в діеструсі та 41,8±0,2% (р <0.01) з "великих" фолікулів з яєчника мишей в еструсі І. Проведеними нами дослідженнями встановлено, що культивування (ЗП )-ооцитів мишей на стадії проеструс в середовищі без Са2 повністю блокувало відновлення мейозу, тоді як після двох годин культивування у 57,5±1,4% (n=12) (ЗП )-ооцитів мишей на стадії еструс І в безкальцієвому середовищі відбувалося відновлення мейозу. В наших дослідженнях одноразове внутрівенне введення великих доз АОЦС та г-АОЦС через 72 години викликало: дозозалежне зменшення кількості ооцитів які виділяли з одного яєчника а саме, кількість ооцитів в яєчнику після дії АОЦС в дозі 0,1 мл становила 4,5±0,9 шт/яєчник (p<0.01) та після дії 0,01 мл 9,6±0,5 шт/яєчник (p<0.01), при 15,62±0,21 шт/яєчник в контролі; після дії г-АОЦС в дозі 0,2 мг та 0,02 мг до 7,7±1,5 шт/яєчник (p<0.01) та 11,8±0,5 шт/яєчник (p<0.01), відповідно, при 15,62±0,21 шт/яєчник в контролі; відсутність в яєчнику фолікулів певного розміру, а також зміну розмірів самих фолікулів.З використанням різних концентрацій Са2 , блокаторів кальцієвих каналів (верапаміла та амілорида), а також антиоваріальних антитіл в середовищі культивування досліджено участь кальційзалежних механізмів в процесі відновлення ооцитами миші мейозу, який є абсолютно необхідним для нормального запліднення і подальшого розвитку плода, а також чинником жіночого безпліддя аутоімунного походження, і який досі був недостатньо вивченим. Показано, що здатність ооцитів до відновлення мейозу in vitro при їх неферментативному виділенні з яєчника миші на різних стадіях естрального циклу, залежить як від розмірів фолікула та самого ооцита, так і від стадії естрального циклу миші. Культивування ооцитів мишей на стадії проеструс в середовищі без Са2 повністю блокувало відновлення мейозу, тоді як в ооцитах мишей на стадії еструс за цих умов блокування відновлення мейозу було неповним. Встановлено участь кальцієвих каналів (за допомогою блокатора L-типу Са-каналів верапаміла) у відновленні мейозу in vitro ооцитами кумулюсно-ооцитарних клітинних комплексів та ооцитами без кумулюсних клітин на стадіях проеструс та еструс І естрального циклу миші.

Основний зміст

З використанням різних концентрацій Са2 , блокаторів кальцієвих каналів (верапаміла та амілорида), а також антиоваріальних антитіл в середовищі культивування досліджено участь кальційзалежних механізмів в процесі відновлення ооцитами миші мейозу, який є абсолютно необхідним для нормального запліднення і подальшого розвитку плода, а також чинником жіночого безпліддя аутоімунного походження, і який досі був недостатньо вивченим.

Показано, що здатність ооцитів до відновлення мейозу in vitro при їх неферментативному виділенні з яєчника миші на різних стадіях естрального циклу, залежить як від розмірів фолікула та самого ооцита, так і від стадії естрального циклу миші. Найбільший процент ооцитів, які вступали в мейоз in vitro, характерний для “великих” фолікулів на стадії еструс І.

Встановлено, що процес відновлення мейозу ооцитом залежить від фази естрального циклу і є кальційзалежним. Культивування ооцитів мишей на стадії проеструс в середовищі без Са2 повністю блокувало відновлення мейозу, тоді як в ооцитах мишей на стадії еструс за цих умов блокування відновлення мейозу було неповним.

Встановлено участь кальцієвих каналів (за допомогою блокатора L-типу Са-каналів верапаміла) у відновленні мейозу in vitro ооцитами кумулюсно-ооцитарних клітинних комплексів та ооцитами без кумулюсних клітин на стадіях проеструс та еструс І естрального циклу миші.

Показано, що антиоваріальні антитіла при їх застосуванні in vivo, викликали дозозалежне зменшення кількості ооцитів, які виділяли з одного яєчника миші та пригнічення відновлення мейозу ооцитами in vitro.

При порівняльному вивченні дії АОЦС, НКС, г-АОЦС, г-НКС, АОЦСТ, НКСТ in vitro встановлено, що вплив цільної АОЦС на процес відновлення мейозу ооцитами є сумарним ефектом кількох різноспрямовано діючих чинників: 1) специфічних гальмівних термолабільних, в тому числі антиоваріальних антитіл; 2) специфічних мейоз-активуючих термостабільних; 3) неспецифічних гальмівних термолабільних (включаючи нормальні антитіла).

Показано, що знижений вміст кальцію в культуральному середовищі послаблює гальмівний вплив антиоваріальних антитіл на відновлення мейозу ооцитами і є більш виражений на стадії еструс І.

Встановлено, що в присутності блокаторів кальцієвих каналів L- та Т-типу (верапаміла та амілорида, відповідно) відбувалося підсилення пригнічуючої дії антиоваріальних антитіл на відновлення мейозу ооцитами. Цей ефект був більш виражений на стадії еструс І.

Отримані результати свідчать, що на оолемі ооцитів миші функціонують кальцієві канали L- і Т-типу, активність яких залежить від стадії естрального циклу і повязана з механізмами відновлення мейозу ооцитами. На стадії діеструс при відновленні мейозу функціонують переважно канали L-типу, на стадії еструс І - канали Т-типу. Кальцієві канали залучаються в механізм пригнічуючої дії антиоваріальних антитіл на відновлення ооцитами мейозу.

1. Алексєєва І.М., Вознесенська Т.Ю., Блашків Т.В., Янчій Р.І. Відновлення in vitro мейотичного дозрівання та формування першого полярного тільця ооцитами мишей на різних стадіях естрального циклу//Фізіол. журн.- 1999. - Т. 45, №5. - С. 55-59.

2. Янчій Р.І., Блашків Т.В., Вознесенська Т.Ю. Вплив кальцію на відновлення першого поділу мейозу та на формування першого полярного тільця in vitro ооцитами мишей на стадіях проеструс та еструс//Експериментальна та клінічна фізіологія та біохімія. - 1999, №2. -С. 21-25.

3. Янчій Р.І., Блашків Т.В., Вознесенська Т.Ю., Портниченко А.Г., Сандуляк В.Н., Бідзіля Ю.П. Вплив верапамілу на відновлення мейозу та формування першого полярного тільця ооцитами мишей in vitro//Фізіол. журн.- 2000.- Т. 46, №1.- С. 52-57.

4. Алексєєва І.М., Янчій Р.І., Блашків Т.В., Портниченко А.Г., Бідзіля Ю.П. Вплив кумулюсних клітин на відновлення першого поділу мейозу ооцитами мишей in vitro // Сб. научных трудов симпозиума с междунаролным участием 27-28 мая 1999. - К.: 1999. - С. 233-238.

5. Gotsuiyak Y.M., Blashkiv T.V., Yanchiy R.I., Voznesenska T.Y. Influence of specific antibodies on process of oocyte maturation in vivo and iv vitro // Тези. доп. Міжнародний симпозіум по імунології репродукції (Київ, 22-25 жовтня 1996). - К., 1996. - С.16.

6. Блашкив Т.В., Алексеева И.Н., Янчий Р.И. Влияние кальция на in vitro созревание ооцитов мышей // Сб. матер. международной конференции “Механизмы функционирования висцеральных систем”, посвященной 150-летию со дня рождения академика И. П. Павлова (Санкт-Петербург, Россия; 23-25 сентября, 1999). - СПБ., 1999. - С.49-50.

7. Блашків Т.В., Алексєєва І.М., Янчій Р.І., Портниченко А.Г., Вознесенська Т.Ю., Блашків В.С. Морфометричні зміни фолікулів та ооцитів миші після внутрівенної інєкції великих доз антиоваріальної цитотоксичної сироватки та антиоваріальних антитіл //ІІІ Міжнародний конгрес патофізіологів, 28-31 травня 2000). - Одеса, 2000. - С. 34.

Размещено на