Изучение тканеспецифической экспрессии сплайс-вариантов мРНК IL-4 И IL-6 у мыши и человека - Автореферат

Образование изоформ МРНК IL-4 у взрослого человека имеет тканеспецифический характер: обычно МРНК IL-4d2 обнаруживается в мононуклеарных клетках (МНК) периферической крови человека в минорных количествах [Alms W.J., 1996], однако в ряде случаев в МНК периферической крови [Alms W.J., 1996; Atamas S.P., 1996], а также в клетках тимуса и бронхо-альвеолярного лаважа [Atamas S.P., 1996], клеточных линиях B95/8 и HL60 [Klein S.C., 1996] обнаруживается преобладание МРНК IL-4d2 над полноразмерной формой. Остается невыясненным имеет ли сплайсинг МРНК генов IL-4 и IL-6 особенности в различных тканях на разных этапах онтогенеза и как их экспрессия может меняться под действием других регуляторных молекул. Использование мышиной модели допустимо для изучения спектра сплайс-вариантов МРНК, так как имеющиеся в литературе данные о механизмах сплайсинга, говорят о том, что он происходит однотипно у человека и мыши в случае некоторых МРНК интерлейкинов [Thanaraj T.A., 2003; Sorek R., 2003]. Изучить спектр сплайс-вариантов МРНК интерлейкина-4 в фетальных тканях человека и оценить уровень их экспрессии в тимусе, печени и селезенке. При этом у мышей альтерантивно сплайсированные варианты МРНК этих генов экспрессируются как минорные варианты, а у человека наблюдается тканеспецифическая экспрессия сплайс-вариантов, которая имеет качественные и количественные различия.Показано, что в спленоцитах и мононуклеарных клетках костного мозга мышей ген интерлейкина-4 экспрессируется в виде двух форм МРНК: полноразмерной и альтернативно сплайсированной по 2 экзону. Продемонстрировано, что в культуре спленоцитов, стимулированных Конканавалином А происходит индукция как МРНК MIL-4, так и МРНК MIL-4?2, причем максимальный уровень МРНК IL-4?2 наблюдается через 3 часа после добавления КОНА с последующим резким падением уровня экспрессии, а пик индукции МРНК MIL-4 наблюдается через 6 часов после начала стимуляции, и далее уровень МРНК постепенно снижается. Установлено, что ген IL-6 экспрессируется в клетках мышей в виде трех форм матричных РНК: МРНК MIL-6, соответствующей полноразмерному белку интерлейкина-6, и двух альтернативных сплайс-вариантов, которые не обнаруживаются у человека, МРНК MIL-6?3 - с делецией экзона 3 и МРНК MIL-6?5 - с делецией участка экзона 5.

1. Показано, что в спленоцитах и мононуклеарных клетках костного мозга мышей ген интерлейкина-4 экспрессируется в виде двух форм МРНК: полноразмерной и альтернативно сплайсированной по 2 экзону.

2. Продемонстрировано, что в культуре спленоцитов, стимулированных Конканавалином А происходит индукция как МРНК MIL-4, так и МРНК MIL-4?2, причем максимальный уровень МРНК IL-4?2 наблюдается через 3 часа после добавления КОНА с последующим резким падением уровня экспрессии, а пик индукции МРНК MIL-4 наблюдается через 6 часов после начала стимуляции, и далее уровень МРНК постепенно снижается. Соотношение МРНК MIL-4 / МРНК MIL-4?2 на пике индукции МРНК MIL-4 составляет 14:1.

3. Установлено, что ген IL-6 экспрессируется в клетках мышей в виде трех форм матричных РНК: МРНК MIL-6, соответствующей полноразмерному белку интерлейкина-6, и двух альтернативных сплайс-вариантов, которые не обнаруживаются у человека, МРНК MIL-6?3 - с делецией экзона 3 и МРНК MIL-6?5 - с делецией участка экзона 5.

4. Во всех исследованных образцах тканей мыши, как во взрослом состоянии, так и в фетальных тканях экспрессия альтернативно сплайсированных МРНК интерлейкина-4 и интерлейкина-6 носит минорный характер.

5. Продемонстрировано, что в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-4 происходит с участием альтернативного сплайсинга и имеет качественные и количественные отличия в экспрессии МРНК IL-4 и МРНК IL-4?2, что отражает наличие тканеспецифичной регуляции альтернативного сплайсинга этого гена.

6. Обнаружен ранее не описанный у человека вариант МРНК интерлейкина-4 со сплайсированным участком третьего экзона IL-4alt3 в мононуклеарных клетках, культивированных в присутствии RHIL-18.

7. Показано, что в мононуклеарных клетках человека экспрессируются МРНК IL-6, МРНК IL-6?2 и МРНК IL-6?2?4, ранее описанная только в клетках ткани легкого и фибробластах, причем после 6 часового культивирования мононуклеаров МРНК IL-6?2?4 не определяется.

8. Установлено, что в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-6 происходит с участием альтернативного сплайсинга с образованием МРНК IL-6, МРНК IL-6?2 и МРНК IL-6?2?4 и имеет качественные и количественные отличия в разных тканях, что может говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга этого гена.

Яценко О.П., Филипенко М.Л., Храпов Е.А., Сенников С.В., Козлов В.А. Альтернативный сплайсинг МРНК ИЛ-4 мыши. // Цитокины и Воспаление, (Материалы международной научно-практической школы-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет»), 2002, T.1, №2, c.21.

Yatsenko O.P., Filipenko M.L., Chrapov E.A., Sennikov S.V., Kozlov V.A. Alternative splicing of mouse IL-4 MRNA. // Journal of Interferon and Cytokine Research, (Cytokines and Interferons 2002. Turin, Italy, 6-10 October 2002), 2002, V22, supplement 1, S-127-128, Abstracts. Р-5-48.

Яценко О.П., Филипенко М.Л., Храпов Е.А., Сенников С.В., Козлов В.А. Альтернативный сплайсинг МРНК ИЛ-4 и ИЛ-6 мыши. // Иммунология, иммуногенетика, иммунопатология. Материалы 6-й отчетной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН под ред. В.И.Коненкова, Новосибирск, 2003, с. 258-261.

Яценко О.П., Филипенко М.Л., Храпов Е.А., Воронина Е.Н., Сенников С.В., Козлов В.А. Альтернативный сплайсинг МРНК ИЛ-4 и ИЛ-6 мыши. // Медицинская иммунология (Материалы 7 Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» 23-26 июня 2003), 2003, Т.5, №3-4, с.430.

Yatsenko O.P., Filipenko V.L., Chrapov E.A., Sennikov S.V., Kozlov V.A. Alternative splicing of mouse IL-4 MRNA. // Proceedings of the annual meeting 2003 of the ISICR. Cytokines, signaling and diseases. S. 335

Yatsenko O.P., Filipenko M.L., Khrapov E.A., Voronina E.N., Sennikov S.V., Kozlov V.A. Alternative splicing IL-4 MRNA and IL-6 MRNA in mice. // Clinical and Investigative Medicine, (Abstract 12 International Congress of Immunology and 4 Annual Conference of FOCIS), 2004, V.27 №4, р.70B.

Яценко О.П., Филиппенко М.Л., Воронина Е.Н., Храпов Е.А., Сенников С.В., Козлов В.А.. Альтернативный сплайсинг МРНК интерлейкина-4 мыши. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004 Т.137, №2, с.202-205.

Яценко О.П., Филипенко М.Л., Храпов Е.А., Воронина Е.Н., Сенников С.В.,. Козлов В.А. Альтернативный сплайсинг МРНК интерлейкина-6 у мыши. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2004, Т.137, № 7, с.87-90.

Яценко О.П., Силков А.Н., Филиппенко М.Л., Храпов Е.А., Воронина Е.Н., Козлов В.А., Сенников С.В. Альтернативный сплайсинг МРНК ИЛ-4 и ИЛ-6 в клетках разных фетальных тканей мыши и человека. // Медицинская иммунология, (Материалы VIII Всероссийского научного форума с международным участием имени В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге), 2004, Т. 6, №3-5, с. 264.

Yatsenko O.P., Filipenko M.L., Khrapov E.A., Voronina E.N., Kozlov V.A., Sennikov S.V. Alternative splicing of MRNA of mouse interleukin-4 and interleukin-6. // Cytokine, 2004, V. 28, №4-5 р. 190-196.

Яценко О.П., Филипенко М.Л., Самарин Д.М., Селедцов В.И., Сенников С.В., Козлов В.А. Особенности экспрессии изоформ МРНК интерлейкина-4 и интерлейкина-6 в эмбриональных тканях человека. // Цитокины и воспаление, (Материалы Всероссийского научного симпозиума «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет»), 2005, Т.4, №2, с.82.

Яценко О.П., Силков А.Н., Храпов Е.А., Воронина Е.Н., Филипенко М.Л., Селедцова Г.В., Козлов В.А., Сенников С.В.Экспрессия слайс-вариантов МРНК генов ИЛ-4 и ИЛ-6 в различных тканях человека. // Цитокины и воспаление, (Материалы Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетичекие основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии» Новосибирск 15-17 сентября 2010г.), 2010, Т.9, №3, с. 58-59.

Яценко О.П., Силков А.Н., Храпов Е.А., Филиппенко М.Л., Сенников С.В. Тканеспецифичность сплайсинга МРНК генов ИЛ-4 и ИЛ-6 человека. // «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике». Под ред. В.А.Козлова и С.В.Сенникова, Новосибирск, 2011, с.57-59.

Яценко О.П., Силков А.Н., Храпов Е.А., Филиппенко М.Л., Козлов В.А., Сенников С.В. Тканеспецифическая экспрессия сплайс-вариантов МРНК генов ИЛ-4 и ИЛ-6 человека. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2011, Т. 152, № 9, с. 298-302.

Размещено на .ru